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- aifangaini87 2018-07-31 00:00:00
- PCR擴(kuò)增時(shí)，加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針。該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收。PCR擴(kuò)增過程中，Taq酶的5’～3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而使熒光檢測(cè)系統(tǒng)接受到熒光信號(hào)。每個(gè)模板的Ct值（即每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)）與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中縱坐標(biāo)為起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)，橫坐標(biāo)代表Ct值，然后根據(jù)待測(cè)樣本的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣本的起始拷貝數(shù)。另外bcr/abl融合基因編碼的蛋白P210可以用Western印跡或酶聯(lián)免疫反應(yīng)加以檢測(cè)[10]。
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