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  _豌豆可可 2017-08-15 00:00:00

  青霉素鈉無(wú)菌檢查的方法驗(yàn)證目的建立健全注射用青霉素鈉無(wú)菌檢查方法，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。方法按ZG藥典2010年版二部(附錄XIH)無(wú)菌檢查法中的薄膜過(guò)濾法進(jìn)行。1試驗(yàn)環(huán)境與材料1．1試驗(yàn)環(huán)境在環(huán)境潔凈度萬(wàn)級(jí)、局部潔凈度百級(jí)的單向流空氣的菌無(wú)室中進(jìn)行。1．2儀器智能集菌儀(杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司)、PY330一次性全封閉集菌培養(yǎng)器(杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司)、生化培養(yǎng)箱(蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司)、霉菌培養(yǎng)箱(蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司)、生物安全柜(蘇州安泰空氣技術(shù)公司)1．3試藥注射用青霉素鈉1．4試驗(yàn)用菌株金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003l、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64941]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(V)98003]。1．5培養(yǎng)基、稀釋液及緩沖液1．5．1干粉培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、瓊脂粉。1．5．2細(xì)菌稀釋液0．9％滅菌氯化鈉溶液。1．5．3沖洗用緩沖液pH7．0氯化鈉-蛋白胨緩沖液。2方法與結(jié)果2．1菌液制備按ZG藥典2010年版附錄ⅪH無(wú)菌檢查法菌液制備法制備。2．2菌落計(jì)數(shù)取金黃色葡萄球菌菌液、大腸埃希菌菌液、枯草芽孢桿菌菌液各1m1分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，生孢梭菌接種至含1．5％瓊脂的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30~C～35'E生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～48h，取白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液各1m1分別接種至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，經(jīng)23℃一28~C霉菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)48～72h，計(jì)數(shù)。(上述各菌液分別接種兩個(gè)平板，取平均值，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照)2．2方法學(xué)驗(yàn)證2．3．1試驗(yàn)組(樣品+陽(yáng)性)取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器(三聯(lián)裝)一套，先用少量pH7．0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液潤(rùn)濕濾膜，取樣品15瓶溶解于250ml緩沖液中，按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，樣品過(guò)濾完畢后，再用pH7．0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，每次每管注人沖洗液100ml，充分振搖，完全排空后循環(huán)操作5次，總沖洗量達(dá)到500ml每管。沖洗完畢后在2管中分別注人改良馬丁培養(yǎng)基100ml，另1管中注入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100ml。另取一套集菌培養(yǎng)器(三聯(lián)裝)取本品依上述方法過(guò)濾并沖洗后，均注入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100ml，將上述6管集菌培養(yǎng)器移至陽(yáng)性對(duì)照室，于含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的集菌培養(yǎng)器中，分別接種金黃色葡萄球菌菌液、大腸埃希菌茵液、枯草芽孢桿菌菌液、生孢梭菌菌液各1ml，于含改良馬丁培養(yǎng)基的集茵培養(yǎng)器中，分別接種白色念珠菌菌液和黑曲霉菌液各1ml，按前述規(guī)定溫度培養(yǎng)3～5d，觀察結(jié)果。2．3．2陽(yáng)性對(duì)照組取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器(三聯(lián)裝)二套，4管中分別注入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基各100ml、2管中分別注入改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，在陽(yáng)性對(duì)照室內(nèi)將6種菌液分別接種至相應(yīng)管內(nèi)，作為陽(yáng)性對(duì)照，按前述規(guī)定溫度培養(yǎng)3～5d，觀察結(jié)果。2．3．3陰性對(duì)照組取一次性全封閉集菌培養(yǎng)器(二聯(lián)裝)一套，濾過(guò)適量緩沖液后分別注入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基各100ml，作為陰性對(duì)照，按前述規(guī)定溫度培養(yǎng)14d，觀察結(jié)果。2．3．4樣品的無(wú)菌檢查取樣品15支依上述方法同法操作，以500ml／管的沖洗量沖洗，加入培養(yǎng)基后，按規(guī)定溫度培養(yǎng)14d，逐日觀察，若培養(yǎng)14d均澄清；由此判定供試品符合規(guī)定。結(jié)果判斷與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)YJ作用或其YJ作用可以忽略不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有YJ作用，可采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的YJ作用，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證試驗(yàn)。討論目前，抗生素類藥物的應(yīng)用非常廣泛，針對(duì)每種抗生素類藥物建立嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高抗生素的質(zhì)量就顯得尤為關(guān)鍵。所以對(duì)一個(gè)新品種建立無(wú)菌檢查法時(shí)，對(duì)其方法進(jìn)行驗(yàn)證就顯得尤為必要。薄膜過(guò)濾法作為無(wú)菌檢查中的一種方法，具有準(zhǔn)確、方便、快捷的優(yōu)點(diǎn)，是無(wú)菌檢查時(shí)所采用的一種重要方法。試驗(yàn)表明上述方法操作方便快捷、結(jié)果準(zhǔn)確。所以，該無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證對(duì)保證結(jié)果的可信度和準(zhǔn)確性具有重要意義。

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