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如何純化pcr產(chǎn)物或粗提的dna

wenyawen0222 2015-04-03 23:10:45 863  瀏覽

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全部評論(2條)

  • 元亨利貞8706 2015-12-09 00:00:00
    (1) 在PCR反應(yīng)液中加入3倍體積的Buffer PCR-A，若需加入的Buffer PCR-A不足100μl，則加入100μl。 (2) 將DNA-prep Tube置于2-ml Microfuge Tube中，將步驟⑴中的混合液移入DNA-prep Tube中，5500rpm離心1min。 (3) 棄濾液，將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，加入500μl Buffer W1，5500rpm離心1min。 (4) 棄濾液，將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube 中，加入700μl 已加無水乙醇的Buffer W2，5500rpm離心1min，以同樣的方法再用700μl已加無水乙醇的BufferW2洗滌一次。 (5) 棄濾液，將DNA-prep Tube置回到原2-ml Microfuge Tube中，14000rpm離心1min。 (6) 連濾液一并棄掉收集管，將DNA-prep Tube 置于一新的1.5ml 離心管中，在silica 膜ZY加入25-30μl Eluent或去離子水（65℃預(yù)熱）。 (7) 室溫靜置2min，14000rpm離心1min洗脫DNA。 (8) 取5μl樣品，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測純化結(jié)果。

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  • 曉豸 2015-04-04 00:00:00
    你是指跑膠、割膠然后用試劑盒純化回收嗎? 如果是的話，有以下幾個方法可能可以提高回收率. 1凝膠要充分溶解.2加elution buffer溶解DNA時少加點.3用elution buffer洗脫時可以把管子里的溶液吸回來，重復(fù)一次.4溶解時延長室溫溶解時間.5PCR循環(huán)可以多幾次.6可以把兩管回收離心后，合并成一管吸附柱回收.

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