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  sijie199396 2017-01-16 00:00:00

  DNA提取過程中所用到的主要設(shè)備有哪些 DNA的粗提取 ①準(zhǔn)備材料 將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液放入冰箱冷凍室，至少24 h。 ②取材 稱取30 g菜花，去梗取花，切碎。 ③研磨 將碎菜花放入研缽中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min 。 ④過濾 在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液濾入燒杯中(有條件的學(xué)?？蓪V液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心，用1 000r/min的旋轉(zhuǎn)頻率，離心25 min，取上清液放入燒杯中)。在4 ℃冰箱中放置幾分后，再取上清液。 ⑤加冷酒精 將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液中，并用玻璃棒緩緩地輕輕攪拌溶液(玻璃棒不要直插燒杯底部)。沉淀35 min后，可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，絮狀物會纏在玻璃棒上。 (2)DNA的鑒定 ①配制二苯胺試劑 取0.1 mL B液，滴入到10 mL A液中，混勻。 ②鑒定 取4 mL DNA提取液放入試管中，加入4 mL 二苯胺試劑，混勻后觀察溶液顏色(不變藍(lán))。用沸水浴(100 ℃)加熱10 min 。在加熱過程中，隨時注意試管中溶液顏色的變化(逐漸出現(xiàn)淺藍(lán)色)。 研磨液的配制方法 Tris：10.1 g(相對分子質(zhì)量為121.14)，先加50 mL 蒸餾水溶解，用物質(zhì)的量濃度為2 moL/L 的鹽酸調(diào)至pH8.0，再加下述藥品。 NaCl：8.76 g(相對分子質(zhì)量58.44) EDTA：37.2 g(相對分子質(zhì)量372.24) SDS：20 g(相對分子質(zhì)量288.3) 待上述藥品全部溶解后，再用蒸餾水定容至1 000 mL。 若在室溫低于20 ℃時配制藥液，SDS呈沉淀析出，此時需要加溫，才能將SDS溶解。如果提前配制的研磨液出現(xiàn)了沉淀，則應(yīng)加溫使沉淀溶解后再使用。 研磨液中幾種藥品的作用 SDS(十二烷基磺酸鈉):可使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。 EDTA(乙二胺四乙酸二鈉):為DNA酶的YZ劑，可以防止細(xì)胞破碎后DNA酶降解DNA。 物質(zhì)的量濃度為0.15 moL/L的氯化鈉溶液：能很好地溶解DNA。 Tris/HCl：提供緩沖體系，DNA在這個緩沖體系中呈穩(wěn)定狀態(tài)。(Tris為三羥甲基氨基甲烷) 鑒定DNA的其他方法 用紫外燈照射法鑒定DNA效果很好。具體鑒定方法如下。 1.配制染色劑。用蒸餾水配制萬分之五的溴化乙錠(EB)溶液。 2.將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上，再滴1滴EB溶液染色。 3.將蠟紙放在紫外燈(260 nm)下照射(暗室中)，可見橙紅色的螢光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm處)。

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