正在培養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)“突然”惡化！

在顯微鏡下觀察，感覺(jué)有黑點(diǎn)狀的不明物體在游動(dòng)！

但沒(méi)看見(jiàn)懸浮物，也沒(méi)感覺(jué)培養(yǎng)基pH變化速度加快。

是不是支原體？--

但支原體怎可能在低倍數(shù)顯微鏡下看得這么清楚？

難道是它？？？

科研學(xué)術(shù)圈一直流傳著這樣一種生物——它，可以污染細(xì)胞，污染后短期內(nèi)不會(huì)影響貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞貼壁；同時(shí)污染后的培養(yǎng)基也不會(huì)像細(xì)菌、真菌污染之后的培養(yǎng)基迅速變黃渾濁，有菌絲團(tuán)漂浮在上清中。但是，沒(méi)有人能確切地說(shuō)出它到底是原蟲(chóng)還是其他病原微生物，也沒(méi)有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的圖像記錄，不管是相機(jī)實(shí)拍還是掃描電鏡，甚至都沒(méi)人能確定到底是“黑焦蟲(chóng)”還是“黑膠蟲(chóng)”。

1.“黑膠蟲(chóng)”究竟是什么？

有研究人員通過(guò)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的“黑膠蟲(chóng)”為變形桿菌a-2亞群，其存在于胎牛血清中。

但后又有研究表明“黑膠蟲(chóng)”并非生物，而是一種碳酸鈣納米顆粒或硅復(fù)合物，稱其為“硅小體”，來(lái)源于培養(yǎng)基對(duì)玻璃細(xì)胞培養(yǎng)器皿的侵蝕。

在“黑膠蟲(chóng)血清”的說(shuō)法流行后，也有研究者表明自己實(shí)驗(yàn)室相似的情況出現(xiàn)原因是由于細(xì)菌污染，并從被“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中分離到了一株短波單胞菌屬的新菌株[1]。實(shí)際上，并不是所有的細(xì)菌污染馬上就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞立即死亡，也不是所有的污染會(huì)讓培養(yǎng)基變黃且渾濁，相反有時(shí)細(xì)菌污染會(huì)讓培養(yǎng)基變得更紅（細(xì)菌分解蛋白質(zhì)產(chǎn)胺會(huì)導(dǎo)致pH值上升因此變紅）。

很多人猜測(cè)，所謂的“黑膠蟲(chóng)”可能只是凋亡小體或細(xì)胞碎片，因?yàn)榧?xì)胞狀態(tài)好的時(shí)候就看不到了，而當(dāng)顆粒物直徑足夠小，在液體中做不規(guī)則的布朗運(yùn)動(dòng)也很正常。盡管到目前，關(guān)于黑膠蟲(chóng)究竟是什么仍無(wú)定論，但我們應(yīng)盡量避免“黑膠蟲(chóng)”污染。

2、如何避免或應(yīng)對(duì)“黑膠蟲(chóng)”污染？

• 采用原裝進(jìn)口特級(jí)胎牛血清。
  

• 出現(xiàn)問(wèn)題的培養(yǎng)體系中的血清，有很多是經(jīng)過(guò)熱滅活處理的，熱滅活操作會(huì)使血清中產(chǎn)生線狀的蛋白質(zhì)聚合體，因其顆粒較小進(jìn)行布朗運(yùn)動(dòng)便被認(rèn)定為是生物，所以在進(jìn)行血清融化的過(guò)程中要進(jìn)行梯度處理，最適合在4℃緩慢融化

  
  

3.如果遇到“黑膠蟲(chóng)”污染怎么辦？

• 換優(yōu)質(zhì)胎牛血清。
  

• 停止熱滅活處理血清，目前大部分高品質(zhì)血清都不需要熱滅活操作，甚至通常因?yàn)檩^高溫度處理后，血清質(zhì)量受影響，細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。同時(shí)熱滅活過(guò)的血清，蛋白等沉淀物的形成顯著增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染。所以在不是做免疫學(xué)研究或昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)等特殊場(chǎng)景時(shí)，血清盡量不經(jīng)熱滅活。

• 雖說(shuō)是“黑膠蟲(chóng)”，但是其實(shí)有很大可能性是被其他微生物污染，如果對(duì)細(xì)胞狀態(tài)影響很大，正常情況下應(yīng)該直接丟棄，若細(xì)胞非常珍貴，可以用伯氨奎、磺胺、四環(huán)素、貝尼爾，慶大霉素進(jìn)行洗滌。并盡早更換品質(zhì)好的一次性細(xì)胞培養(yǎng)耗材以及相關(guān)培養(yǎng)試劑。