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  推窗望月ok 2018-07-16 00:00:00

  A549細(xì)胞是很常見的細(xì)胞，培養(yǎng)基各個(gè)實(shí)驗(yàn)室也不盡相同，有用DMEM的、有用RPMI-1640的，但是用的Z多的也是官方的一個(gè)培養(yǎng)條件是：F12K+10%FBS，類似ATCC、ECACC、DMSZ等大型細(xì)胞庫(kù)都是用的這個(gè)培養(yǎng)體系。---------上海蓋寧生物

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  卟簡(jiǎn)灬單 2017-01-02 00:00:00

  1、培養(yǎng)A549細(xì)胞，了解A549細(xì)胞的倍增周期，擴(kuò)增A549細(xì)胞；2、收集A549細(xì)胞并計(jì)數(shù)，按照一定的密度如2500細(xì)胞/孔，25uL/孔(參考值，需進(jìn)行優(yōu)化)進(jìn)行鋪板；3、在細(xì)胞板內(nèi)培養(yǎng)一定時(shí)間，如24h等，該時(shí)間需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)和鋪板密度來確定，并且需要優(yōu)化，至少要等到細(xì)胞貼壁之后才可以進(jìn)行下一步；4、配制ABCD化合物溶液，通常將化合物溶解在DMSO中。由于細(xì)胞對(duì)DMSO敏感，因此在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)之前需要對(duì)實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行DMSO耐受測(cè)試，獲得A549在該實(shí)驗(yàn)體系中的Z大DMSO耐受量。假設(shè)A549能夠耐受1%的DMSO，那么需要配制100×終濃度的ABCD化合物溶液，并用培養(yǎng)基稀釋到終濃度。5、棄掉細(xì)胞培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，將配好的化合物溶液轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)板中，進(jìn)行加藥處理；6、培養(yǎng)一段時(shí)間，例如24h，48h等(該時(shí)間需要進(jìn)行優(yōu)化)，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，向其中加入PromegaCaspase3/7Glo檢測(cè)試劑，震蕩10分鐘后用酶標(biāo)儀讀板。7、將獲得的數(shù)值與陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行比較并轉(zhuǎn)換成作用百分比，即可判斷該化合物是否有效。如果化合物配制時(shí)是配制的梯度溶液，還能獲得活性化合物的IC50.

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