制藥潔凈室環(huán)境微生物標(biāo)準(zhǔn)要求在潔凈室監(jiān)測中非常重要，因?yàn)樗鼈兡苤苯佑绊懙剿幤焚|(zhì)量。所以需對(duì)潔凈區(qū)的微生物進(jìn)行監(jiān)測，確保潔凈區(qū)的空氣潔凈度符合新版GMP法規(guī)要求，無菌生產(chǎn)環(huán)境中監(jiān)測的微生物數(shù)量必須符合GMP法規(guī)的要求。微生物監(jiān)測至關(guān)重要！

在無菌制藥生產(chǎn)的潔凈室環(huán)境中，對(duì)于關(guān)鍵區(qū)域（A級(jí)、B級(jí)）的微生物監(jiān)測，我們來看看最 新法規(guī)《EU GMP 附錄一》中所提出的要求：

01、

9.24：應(yīng)在A級(jí)關(guān)鍵工藝的整個(gè)過程進(jìn)行連續(xù)空氣監(jiān)測（例如浮游菌或沉降菌），包括設(shè)備（無菌裝配）組裝和關(guān)鍵處理。對(duì)于B級(jí)潔凈室，應(yīng)基于對(duì)無菌工藝影響的風(fēng)險(xiǎn)考慮類似方法。監(jiān)測應(yīng)捕獲所有干預(yù)、瞬態(tài)事件和任何系統(tǒng)惡化，并避免監(jiān)測操作干預(yù)造成的任何風(fēng)險(xiǎn)。

02、

9.30 (c)：應(yīng)當(dāng)注意對(duì)于A級(jí)，任何有菌生長都應(yīng)引起調(diào)查。

由此可看出，附錄一中對(duì)于關(guān)鍵區(qū)域（A級(jí)、B級(jí)）的微生物取樣提高了要求：連續(xù)以全覆蓋整個(gè)生產(chǎn)工藝過程。同時(shí)，監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)也相應(yīng)提高：A級(jí)區(qū)不允許檢出微生物（No Growth），如檢出，必須展開調(diào)查。這對(duì)出口至歐盟或者未來有出口規(guī)劃的制藥企業(yè)而言，提出了更高的監(jiān)測要求，而附錄一將于2023年8月25日生效（8.123于2024年8月25日生效）。

PMS深耕于制藥行業(yè)的環(huán)境微污染監(jiān)測領(lǐng)域，始終致力于為制藥企業(yè)客戶提供符合最 新法規(guī)要求，以及符合污染控制策略(CCS)的創(chuàng)新解決方案。對(duì)于關(guān)鍵區(qū)域的浮游菌取樣，PMS為您提供一次性浮游菌取樣器Biocapt? Single Use (簡稱BCSU)，它實(shí)現(xiàn)了取樣器和培養(yǎng)基的“一體設(shè)計(jì)”，既是取樣器，又是培養(yǎng)皿，能夠有效地規(guī)避假陽性結(jié)果。

經(jīng)驗(yàn)證，在25LPM（L/min）下，單片BCSU的連續(xù)取樣時(shí)間可達(dá)到2小時(shí)，這就意味著每片BCSU進(jìn)行不停歇地抽氣取樣，可持續(xù)2小時(shí)。而在實(shí)際應(yīng)用的客戶現(xiàn)場，甚至還有單片BCSU持續(xù)采樣（25LPM）高達(dá)3小時(shí)或4小時(shí)的成功案例。

其實(shí)在無菌生產(chǎn)中，人員是潔凈室最 大的污染源，而BCSU的優(yōu)勢在于換碟次數(shù)大幅度減少，從而大大降低由人員干預(yù)引起的風(fēng)險(xiǎn)；并且它是連續(xù)的監(jiān)測，符合附錄一的要求。而常規(guī)的方案是平皿取樣1000L，如進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測，約40分鐘就需進(jìn)行更換，這樣更換頻率高，或無法實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵工藝的全覆蓋監(jiān)測。

除此之外，BCSU中的培養(yǎng)基能夠被完好地保護(hù)在內(nèi)部，即使在換碟時(shí)，培養(yǎng)基表面也不會(huì)暴露出來，而此時(shí)人員的干預(yù)正在進(jìn)行中，因此能夠很好地規(guī)避假陽性結(jié)果，加強(qiáng)生產(chǎn)的無菌保證。如果在換碟時(shí)不小心發(fā)生平皿跌落的情況，常規(guī)平皿內(nèi)的培養(yǎng)基可能會(huì)掉出來或接觸到設(shè)備表面，從而污染A級(jí)區(qū)環(huán)境。而您完全不必為BCSU擔(dān)心，因?yàn)槠洵傊谌悠鞯膬?nèi)部，可以被很好地保護(hù)住。

BCSU的應(yīng)用場景非常廣泛，它可用于無菌生產(chǎn)、血液和組織、潔凈室認(rèn)證、醫(yī)療保健和化妝品、醫(yī)院、醫(yī)療器械、制藥生產(chǎn)、高校研究所等，凡是涉及到A級(jí)區(qū)域環(huán)境的微生物監(jiān)測，BCSU均可以使用。

如果您想了解更多這一創(chuàng)新方案，可通過下方任一方式與我們?nèi)〉寐?lián)系！

人工智能（AI）正在成為生命科學(xué)研究的一個(gè)組成部分。

當(dāng)人工智能被正確地整合到顯微成像工作流程中，可以使研究人員以更高效的方式收集數(shù)據(jù)，并進(jìn)行以前無法完成的實(shí)驗(yàn)。

用于STELLARIS共聚焦平臺(tái)的全新稀有事件檢測工作流程就是這樣一種基于人工智能的工具。STELLARIS的數(shù)據(jù)采集和Aivia的人工智能圖像分析的協(xié)同作用，能夠幫助科研人員快速獲得高質(zhì)量的信息并減少工作量。

稀有事件檢測工作流程能夠穩(wěn)定地檢測出生物樣本中高達(dá)90%的稀有事件，并且大幅度地縮短了采集時(shí)間，最 高可達(dá)70%。

由于只有感興趣的區(qū)域被以高分辨率成像記錄下來，可以避免大量不必要的數(shù)據(jù)。以前受限于時(shí)間和復(fù)雜性而不可能進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)在可以通過稀有事件檢測工作流程來實(shí)現(xiàn)。

更多信息請(qǐng)關(guān)注后續(xù)的內(nèi)容！

單程細(xì)胞具有復(fù)雜生物學(xué)性質(zhì)，它們通過細(xì)胞外基質(zhì)ECM形成緊密的細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞連接，諸如上皮細(xì)胞通過這種特殊的鏈接方式構(gòu)成了屏障層保護(hù)人體免受外界損傷。因此細(xì)胞之間以及細(xì)胞基底的粘附力測定對(duì)于研究細(xì)胞粘附蛋白的機(jī)制有著重要意義。使用力學(xué)工具測量細(xì)胞間以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的粘附力始終不是一件容易的事情。首先，由于細(xì)胞與基質(zhì)的作用力僅為nN級(jí)別，因此需要力學(xué)精度較高的設(shè)備才能夠測量，而且在這其中較為適合的工具為原子力顯微鏡（AFM）。原子力顯微鏡能夠提供納米級(jí)別的操作精度并可測量從pN~nN范圍的力譜。但是受制于AFM探針本身的限制，需要借助修飾手段才能夠讓細(xì)胞與探針固定到一起，這個(gè)過程十分繁瑣，并且由于需要大量手工操作很難實(shí)現(xiàn)高通量的測量。而不同的細(xì)胞由于細(xì)胞異質(zhì)性使得要想確定粘附力需要較多樣本才能獲得相對(duì)準(zhǔn)確的值，無法實(shí)現(xiàn)高通量測量直接限制了原子力探針在細(xì)胞粘附力上的應(yīng)用。

而多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)的出現(xiàn)改變了這一現(xiàn)狀，它使用特殊的中空探針能夠輕松地通過負(fù)壓抓取細(xì)胞，取得和AFM近似精度的數(shù)據(jù)，無需在探針上進(jìn)行任何修飾，不會(huì)改變細(xì)胞表面的任何通路，從而能夠得到接近細(xì)胞原生的數(shù)據(jù)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后能夠通過正壓快速丟棄用過的細(xì)胞，具備很高的自動(dòng)化，能夠快速測量細(xì)胞粘附力。

使用FluidFM對(duì)細(xì)胞操作的基本流程

FluidFM在粘附力測量上具備顯著優(yōu)勢。如圖所示，F(xiàn)luidFM能夠通過負(fù)壓將細(xì)胞吸附到原子力探針的末端，通過高精度位移臺(tái)的控制將細(xì)胞從基底上分離，并且同時(shí)記錄FD曲線。通過FD曲線能夠獲得最大粘附力Fmax和粘附能量Emax。通過高度自動(dòng)化的控制系統(tǒng)能夠在短時(shí)間內(nèi)測量大量細(xì)胞粘附力，評(píng)估細(xì)胞群體分布以及細(xì)胞間差異，并且可有效避免傳統(tǒng)粘附力測量因準(zhǔn)備時(shí)間過長而錯(cuò)過最佳測量時(shí)間導(dǎo)致的細(xì)胞粘附力改變，得到更為精準(zhǔn)的結(jié)果。近期，Agoston等人使用多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)FluidFM實(shí)現(xiàn)了高通量細(xì)胞粘附力測量，對(duì)同種細(xì)胞不同區(qū)以及不同細(xì)胞之間的粘附力進(jìn)行測量和比較。

作者首先對(duì)Vero和Hela細(xì)胞在不同狀態(tài)下的粘附力進(jìn)行了測量和比較，總共測量了214個(gè)細(xì)胞。通過比較明膠涂層上處于單個(gè)細(xì)胞、孤島狀細(xì)胞、致密連接細(xì)胞以及單層細(xì)胞上游離細(xì)胞之間的粘附力，能夠明顯觀測到Vero細(xì)胞處于致密連接的細(xì)胞粘附力最大，大概在750 nN左右，隨著細(xì)胞單細(xì)胞層的稀疏，細(xì)胞粘附力有所下降，而處于細(xì)胞層頂部的細(xì)胞粘附力最低僅為50 nN左右。這一點(diǎn)充分說明上皮細(xì)胞能夠在細(xì)胞之間形成緊密的連接，而處于細(xì)胞層外的細(xì)胞則幾乎沒有粘附力。而對(duì)于HeLa這樣的腫瘤細(xì)胞測量的結(jié)果卻顯示出了截然不同的結(jié)果，處于不同狀態(tài)的細(xì)胞有著近似的粘附力，基本都在200 nN左右，這與處于單個(gè)游離上皮細(xì)胞的粘附力十分接近，表明HeLa細(xì)胞在不同環(huán)境下仍然具有較高遷徙能力。

使用FluidFM對(duì)不同區(qū)域細(xì)胞的FD曲線測定結(jié)果和對(duì)比

       通過對(duì)這兩種細(xì)胞的最大粘附力、最大粘附能量、最大拉伸距離和細(xì)胞接觸面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析可以發(fā)現(xiàn)，HeLa腫瘤細(xì)胞在粘附力和粘附能量上均有所降低，但是當(dāng)HeLa細(xì)胞形成了單層后，兩者區(qū)別不大。

對(duì)比Hela和Vero在不同生長狀態(tài)下的最大粘附力、最大粘附能量、粘附拉伸距離和粘附面積。

再進(jìn)一步對(duì)Vero與HeLa細(xì)胞最大粘附力與距離和接觸面積進(jìn)行對(duì)比，依然可以得到與單獨(dú)比較粘附力相同的結(jié)果，并且最大能量與細(xì)胞接觸面積的比值中也存在著類似的結(jié)果。由此可見腫瘤細(xì)胞通過降低自身粘附力從而獲得了更好的遷移能力。

對(duì)不同狀態(tài)Vero和A549之間的粘附力/粘附距離、粘附力/粘附面積、粘附能量/粘附面積

總結(jié)

       細(xì)胞粘附力測定在細(xì)胞生命科學(xué)研究中起著至關(guān)重要的作用，然而傳統(tǒng)手段中有著各種各樣的局限性，主要原因是缺乏一種有效抓取細(xì)胞并進(jìn)行力學(xué)測定的手段?，F(xiàn)如今FluidFM技術(shù)在細(xì)胞粘附力測定中的應(yīng)用，使得研究者們有了一種能夠有效、低損的方式抓取細(xì)胞，配合原子力顯微鏡精確測量的特性，真正意義上做到精準(zhǔn)、無損、快速的測量單細(xì)胞粘附力，幫助研究者尋找細(xì)胞粘附力與細(xì)胞生命發(fā)展、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。

【參考文獻(xiàn)】

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【相關(guān)產(chǎn)品】

　　多功能單細(xì)胞顯微操作系統(tǒng)- FluidFM OMNIUM:http://m.sdczts.cn/zt2203/product_386418.html

研究現(xiàn)狀

單程細(xì)胞具有復(fù)雜生物學(xué)性質(zhì)，它們通過細(xì)胞外基質(zhì)ECM形成緊密的細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞與細(xì)胞連接，諸如上皮細(xì)胞通過這種特殊的鏈接方式構(gòu)成了屏障層保護(hù)人體免受外界損傷。因此細(xì)胞之間以及細(xì)胞基底的粘附力測定對(duì)于研究細(xì)胞粘附蛋白的機(jī)制有著重要意義。使用力學(xué)工具測量細(xì)胞間以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的粘附力始終不是一件容易的事情。首先，由于細(xì)胞與基質(zhì)的作用力僅為nN級(jí)別，因此需要力學(xué)精度較高的設(shè)備才能夠測量，而且在這其中較為適合的工具為原子力顯微鏡（AFM）。原子力顯微鏡能夠提供納米級(jí)別的操作精度并可測量從pN~nN范圍的力譜。但是受制于AFM探針本身的限制，需要借助修飾手段才能夠讓細(xì)胞與探針固定到一起，這個(gè)過程十分繁瑣，并且由于需要大量手工操作很難實(shí)現(xiàn)高通量的測量。而不同的細(xì)胞由于細(xì)胞異質(zhì)性使得要想確定粘附力需要較多樣本才能獲得相對(duì)準(zhǔn)確的值，無法實(shí)現(xiàn)高通量測量直接限制了原子力探針在細(xì)胞粘附力上的應(yīng)用。

多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)

多功能單細(xì)胞顯微操作FluidFM技術(shù)的出現(xiàn)改變了這一現(xiàn)狀，它使用特殊的中空探針能夠輕松地通過負(fù)壓抓取細(xì)胞，取得和AFM近似精度的數(shù)據(jù)，無需在探針上進(jìn)行任何修飾，不會(huì)改變細(xì)胞表面的任何通路，從而能夠得到接近細(xì)胞原生的數(shù)據(jù)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后能夠通過正壓快速丟棄用過的細(xì)胞，具備很高的自動(dòng)化，能夠快速測量細(xì)胞粘附力。

使用FluidFM對(duì)細(xì)胞操作的基本流程

FluidFM在粘附力測量上具備顯著優(yōu)勢。如圖所示，F(xiàn)luidFM能夠通過負(fù)壓將細(xì)胞吸附到原子力探針的末端，通過高精度位移臺(tái)的控制將細(xì)胞從基底上分離，并且同時(shí)記錄FD曲線。通過FD曲線能夠獲得最 大粘附力Fmax和粘附能量Emax。通過高度自動(dòng)化的控制系統(tǒng)能夠在短時(shí)間內(nèi)測量大量細(xì)胞粘附力，評(píng)估細(xì)胞群體分布以及細(xì)胞間差異，并且可有效避免傳統(tǒng)粘附力測量因準(zhǔn)備時(shí)間過長而錯(cuò)過最 佳測量時(shí)間導(dǎo)致的細(xì)胞粘附力改變，得到更為精 準(zhǔn)的結(jié)果。