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  浮生一夢(mèng)獨(dú)戀蝶 2016-08-05 00:00:00

  （轉(zhuǎn)載，僅供參考） 一．貼壁細(xì)胞 1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。 2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ，200X 各一張）。 3. 顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 4. 嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 5. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。 6. 用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。 7. 1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2 培養(yǎng)。 二．懸浮細(xì)胞 1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。 2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ，200X 各一張）。 3. 嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。 5. 1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃，5%CO2 培養(yǎng)。 三．一毫升小管操作方法 小管內(nèi)也是此細(xì)胞。 1. 用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）。 2. 嚴(yán)格無(wú)菌操作，用吸管吸出管中細(xì)胞至9ml完全培養(yǎng)基混勻。 3. 1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。 4.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2 培養(yǎng)。

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