流式細(xì)胞儀-調(diào)節(jié)熒光補(bǔ)償是不是把其他顏色熒光都調(diào)到零是Z好的？
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我用Annexin V-FITC和PI雙染檢測細(xì)胞凋亡，結(jié)果細(xì)胞給藥后，細(xì)胞團(tuán)層45度角向上偏，是不是熒光補(bǔ)償沒有調(diào)好，但是我的熒光補(bǔ)償選中GRE時(shí)，RED調(diào)到Z低；選中RED時(shí)，GRE調(diào)到Z低；其實(shí)我對熒光補(bǔ)償?shù)脑聿皇呛芮宄?，不知道這樣調(diào)是不是對的，可不可以用比較容... 我用Annexin V-FITC和PI雙染檢測細(xì)胞凋亡，結(jié)果細(xì)胞給藥后，細(xì)胞團(tuán)層45度角向上偏，是不是熒光補(bǔ)償沒有調(diào)好，但是我的熒光補(bǔ)償選中GRE時(shí)，RED調(diào)到Z低；選中RED時(shí)，GRE調(diào)到Z低；其實(shí)我對熒光補(bǔ)償?shù)脑聿皇呛芮宄恢肋@樣調(diào)是不是對的，可不可以用比較容易懂的語言解釋一下熒光補(bǔ)償?shù)脑?，然后針對我這個(gè)結(jié)果，我應(yīng)該如何調(diào)節(jié)熒光補(bǔ)償？（上圖是給藥組，下圖是正常組） 展開
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- 天空上的云sky 2014-06-13 00:00:00
- 熒光補(bǔ)償是因?yàn)槊總€(gè)熒光的光譜都比較寬。用你的例子來說，就是PI的熒光，不僅被PI這個(gè)通道的探測器所感應(yīng)到，而且也同時(shí)被FITC的探測器感應(yīng)到，所以一個(gè)PI染色會(huì)出現(xiàn)在雙染的區(qū)域。另外FITC的熒光，也會(huì)同時(shí)被兩個(gè)探測器所檢測到。這時(shí)候就要做compensation. 你做compensation的時(shí)候，必須有3個(gè)管子，一個(gè)是無染料的，一個(gè)只染了PI的，另外一個(gè)只染了FITC。diyi個(gè)管子，原來調(diào)節(jié)FL-1和FL-2的電壓，是所有細(xì)胞都位于左下象限。然后保持電壓不變，上FITC的管子，調(diào)節(jié)compensation 的數(shù)值(FL-2 - FL-1%），使FITC陽性的細(xì)胞都位于右下象限，但是在水平位置上和陰性細(xì)胞一致，而不是Z低。然后再上PI的管子，調(diào)節(jié)compensation數(shù)值，使PI陽性的細(xì)胞都位于左上象限。在垂直位置上和陰性細(xì)胞一致，但不是Z低。 簡單的說，就是把單個(gè)陽性的染色放到屬于原來自己的位置上。 只有這個(gè)設(shè)置好了，才能往下做實(shí)驗(yàn)。 從你的圖上看，你四個(gè)象限的設(shè)置并沒有用無染色的細(xì)胞來設(shè)置。PI的陽性閾值設(shè)的很高。參照是什么？FITC的參照閾值是什么？這些都必須用無染色的細(xì)胞來設(shè)置。
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