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  Yurong0203 2016-12-16 00:00:00

  實(shí)驗(yàn)一常用培養(yǎng)基的制備、滅菌與消毒一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馀囵B(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾CJ的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長(zhǎng)繁殖和合成代謝產(chǎn)物所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長(zhǎng)因素和水。根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用Z廣泛和Z普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需要的Z基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供微生物生長(zhǎng)繁殖之用。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達(dá)到殺死微生物的效果。三、試劑與器材1.器材試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、麻繩、紗布、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等。2.試劑牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查2.干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物3.高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查4.過濾CJ：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.要嚴(yán)格按配方配制。2.調(diào)pH不要過頭。3.干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的時(shí)間控制，70ºC以下放物、取物。4.高壓滅菌要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時(shí)降壓回零取物。5.過濾CJ要注意各部件滅菌，壓濾時(shí)，壓力要適當(dāng)，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。六、思考題1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的?2.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題?為什么?3.培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應(yīng)具備哪些條件?為什么?4.培養(yǎng)基的配制原則是什么?實(shí)驗(yàn)二土壤中微生物分離純化培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆盏蛊桨宓姆椒ê蛶追N常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特征；進(jìn)一步熟練和掌握微生物無菌操作技術(shù)；掌握微生物培養(yǎng)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的分離、純化方法：?jiǎn)渭?xì)胞挑取法，稀釋涂布平板法，稀釋混合平板法，平板劃線法稀釋涂布平板法步驟：倒平板－制備土壤污水稀釋液－涂布－培養(yǎng)－挑菌落；平板劃線法步驟：倒平板－標(biāo)記培養(yǎng)基名稱－劃線。三、試劑與器材1.器材盛9m1無菌水的試管、盛90m1無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環(huán)、酒精燈、無菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板等。2.試劑牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，高氏1號(hào)培養(yǎng)基，查氏培養(yǎng)基四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.土壤稀釋液的制備2.微生物分離純化：稀釋涂平板法，平皿劃線分離法，微生物培養(yǎng)技術(shù)五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.掌握含菌培養(yǎng)基的配制，嚴(yán)格控制溫度。2.平板劃線應(yīng)防止染菌，同時(shí)應(yīng)注意劃線深度及密度。六、思考題1.如何確定平板上某單個(gè)菌落是否為純培養(yǎng)?請(qǐng)寫出實(shí)驗(yàn)的主要步驟。2.如果要分離得到極端嗜鹽細(xì)菌，在什么地方取樣品為宜?并說明理由。實(shí)驗(yàn)三菌種保藏一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)并掌握菌種保藏的基本原理。2.掌握常用的幾種不同的菌種保藏方法。二、實(shí)驗(yàn)原理微生物個(gè)體微小、代謝旺盛、生長(zhǎng)繁殖快，如果保存不妥容易發(fā)生變異和雜菌污染，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡等現(xiàn)象。因此，保存好菌種是非常必要和重要的。常用的菌種保藏方法包括傳代培養(yǎng)法、載體法、懸液法、冷凍法和真空干燥法三、試劑與器材1.材料大腸桿菌、青霉菌、放線菌2.試劑液體石蠟、甘油、五氧化二磷、95％乙醇、10％鹽酸、無水氯化鈣、食鹽、干冰3.器材無菌吸管、無菌滴管、無菌培養(yǎng)皿；安額管、凍干管、40目與100目篩子、油紙、濾紙條(0.5X1.2cm)、干燥器、真泵器、真空泵、真空壓力表、噴燈、L形五通管、冰箱、低溫冰箱(—30℃)、超低溫冰箱和液氮罐等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.斜面保藏法2.液體石蠟法3.穿刺保藏法4.砂土管保藏法5.冷凍真空干燥保存法五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.清楚各種保藏方法的優(yōu)缺點(diǎn)，針對(duì)不同要求選擇適宜的保藏方法。2.熔封安瓶時(shí)防止封閉不嚴(yán)。3.液氮凍存操作應(yīng)防止凍傷。六、思考題根據(jù)你自己的實(shí)驗(yàn)。談?wù)?--2種菌種保藏方法的利弊?實(shí)驗(yàn)四細(xì)菌形態(tài)觀察及單染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解簡(jiǎn)單染色法的原理，并掌握其操作方法。2.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無菌操作技術(shù)。3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法。4.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌個(gè)體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對(duì)比，以便在顯微鏡下進(jìn)行觀察。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌煞譃楹?jiǎn)單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等。簡(jiǎn)單染色法是Z基本的染色方法，是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。常用堿性染料進(jìn)行簡(jiǎn)單染色。三、試劑與器材1.材料大腸桿菌，枯草芽孢桿菌2.試劑呂氏堿性美藍(lán)染液(或草酸銨結(jié)晶紫染液)、齊氏石炭酸復(fù)紅染液。3.器材顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容簡(jiǎn)單染色法：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→鏡檢五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.涂片時(shí)，生理鹽水及取菌不宜過多，涂片應(yīng)盡可能均勻，2.水洗步驟水流不宜過大，過急，以免涂片薄膜脫落。六、思考題1.你認(rèn)為制備細(xì)菌染色標(biāo)本時(shí)，尤其應(yīng)該注意哪些環(huán)幣?2.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察?3.如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會(huì)出現(xiàn)什么問題?如果加熱溫度過高、時(shí)間太長(zhǎng)，又會(huì)怎樣呢?實(shí)驗(yàn)五放線菌及霉菌形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解放線菌、霉菌形態(tài)觀察的原理。2.學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的操作方法。3.初步了解放線菌、霉菌的形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細(xì)菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱“基絲”)，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲(簡(jiǎn)稱“氣絲”)，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細(xì)菌和放線菌粗得多，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。人們?cè)O(shè)計(jì)了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實(shí)驗(yàn)采用插片法。插片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，插上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長(zhǎng)期的形態(tài)。三、試劑與器材1.材料黑曲霉、青霉和根霉，細(xì)黃鏈霉菌或青色鏈霉菌，滅菌的高氏I號(hào)瓊脂和滅菌的查氏培養(yǎng)基。2.實(shí)驗(yàn)器材經(jīng)滅菌的：平皿、玻璃紙、無菌吸管、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子、顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容倒平板→接種→插片→培養(yǎng)→鏡檢五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.倒平板要厚一些，接種時(shí)劃線要密。2.插片時(shí)要有一定角度并與劃線垂直。3.觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，更換高倍鏡觀察。4.如果用0.1%美藍(lán)對(duì)培養(yǎng)后的蓋玻片進(jìn)行染色后觀察，效果會(huì)更好。六、思考題1.鏡檢時(shí)，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲?2.你認(rèn)為霉菌和放線菌菌絲的主要區(qū)別是什么？實(shí)驗(yàn)六革蘭氏染色及芽孢染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解革蘭氏染色法和芽孢染色法的原理，并掌握其操作方法。2.了解革蘭氏染色法在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。3.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、染色的基本技術(shù)和無菌操作技術(shù)。4.學(xué)習(xí)顯微鏡(油鏡)的使用方法。5.初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。二、實(shí)驗(yàn)原理革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脫色，Z后用復(fù)染劑(如番紅)復(fù)染。經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽性菌；如果細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色(紅色)，該菌屬于革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌重要的鑒別特征，為保證染色結(jié)果的正確性，采用規(guī)范的染色方法是十分必要的。芽孢染色法的基本原理，用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠或石炭酸復(fù)紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當(dāng)用對(duì)比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。三、試劑與器材1.材料：枯草芽孢桿菌12～18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，大腸桿菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物2.試劑革蘭氏染色液(結(jié)晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液)。5％孔雀綠水溶液3.實(shí)驗(yàn)器材小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無菌水、顯微鏡等、接種環(huán)、雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯)、擦鏡紙、生理鹽水等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.革蘭氏染色法制片→初染→媒染→脫色→復(fù)染→鏡檢。2.Schaefer-Fulton氏染色法制片→染色→水洗→復(fù)染→水洗→鏡檢。五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.涂片時(shí)，生理鹽水及取菌不宜過多，涂片應(yīng)盡可能均勻，2.乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，嚴(yán)格掌握脫色時(shí)間。六、思考題1.你認(rèn)為要得到正確的改良的革蘭氏染色結(jié)果必須注意哪些操作?關(guān)鍵在哪一步?為什么?2.現(xiàn)有一株細(xì)菌寬度明顯大于大腸桿菌的粗壯桿菌，請(qǐng)你鑒定其革蘭氏染色反應(yīng)。你怎樣運(yùn)用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌株進(jìn)行涂片染色，以證明你的染色結(jié)果正確性。3.你的染色結(jié)果是否正確?如果不正確，請(qǐng)說明原因。4.若涂片中觀察到的只是大量游離芽孢，很少看到芽孢囊及營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，你認(rèn)為這是什么原因?5.說明芽孢染色法的原理。用簡(jiǎn)單染色法能否觀察到細(xì)菌的芽孢?實(shí)驗(yàn)七酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察酵母菌的形態(tài)特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌與細(xì)菌形態(tài)特征的區(qū)別。2.學(xué)習(xí)鑒別死活細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理酵母菌是單細(xì)胞的真核微生物，菌體比細(xì)菌大而且不運(yùn)動(dòng)。酵母菌的繁殖方式分為無性繁殖和有性繁殖兩種，以無性繁殖為主。芽殖是酵母菌普遍的無性繁殖方式，少數(shù)為裂殖；有性繁殖是產(chǎn)生子囊和子囊孢子。本實(shí)驗(yàn)是通過美藍(lán)染液水浸片和水一碘液水浸片來觀察酵母的形態(tài)和芽殖方式。美藍(lán)是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。用美藍(lán)對(duì)酵母活細(xì)胞染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，而對(duì)代謝作用微弱或死細(xì)胞，無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，不僅用此法可觀察酵母細(xì)胞形態(tài)，也可用來鑒別酵母菌的死細(xì)胞和活細(xì)胞。三、試劑與器材1.材料釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或卡爾酵母(Saccharomycescalsbergensis)培養(yǎng)2天左右的麥芽汁(或豆芽汁)液體培養(yǎng)物。2.試劑0.05％和O.1％呂氏堿性美藍(lán)染色液、革蘭氏染色用的碘液。3.器材顯微鏡、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、灑精燈等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.美藍(lán)浸片觀察酵母培養(yǎng)→制片→染色→鏡檢→30分鐘后再鏡檢2.水-碘浸片觀察五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時(shí)，菌液溢出或出現(xiàn)大量氣泡。2.用鑷子取一塊蓋玻片，先將一側(cè)與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下，使其蓋在菌液上，蓋玻片不宜平著放下，避免氣泡產(chǎn)生。六、思考題1.呂氏堿性美藍(lán)染液濃度和作用時(shí)間的不同，對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響?試分析其原因。2.在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細(xì)菌?實(shí)驗(yàn)八微生物直接計(jì)數(shù)法及測(cè)微技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)原理，并掌握計(jì)數(shù)方法。2.掌握用測(cè)微尺測(cè)定微生物大小的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將一定稀釋的菌體或孢子懸液注入血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室中，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。因?yàn)橛?jì)數(shù)板是一塊特別的載玻片。其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)；中間較寬的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(見圖2—3—44)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，無論哪種每個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為0．1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0．1mm3。計(jì)數(shù)時(shí)，通常只用5個(gè)中格內(nèi)的菌體(孢子)數(shù)即可。然后求出每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，得出一個(gè)大方格中的總茵數(shù)，再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。若設(shè)5個(gè)中方格中總菌數(shù)為N，菌液稀釋倍數(shù)為M，如果是25個(gè)中方格計(jì)數(shù)板，則計(jì)算方法為：lml菌液中的總菌數(shù)=平均每個(gè)中格中菌的個(gè)數(shù)×25×104×M=50000N•M(個(gè))微生物細(xì)胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小的測(cè)定，需要在顯微鏡下，借助于特殊的測(cè)量工具——測(cè)微尺，包括目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。鏡臺(tái)測(cè)微尺是ZY部分刻有精確等分線的載玻片，一般是將1mm等分為100格，每格長(zhǎng)0．01mm(即10pm)。鏡臺(tái)測(cè)微尺并不直接用來測(cè)量細(xì)胞的大小，而是用于校正目鏡測(cè)微尺每格的相對(duì)長(zhǎng)度。三、試劑與器材1.材料釀酒酵母、藤黃微球菌和大腸桿菌的染色標(biāo)本片、釀酒酵母24h馬鈴薯斜面培養(yǎng)物。2.實(shí)驗(yàn)器材細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細(xì)滴管、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、載玻片、蓋玻片、顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.微生物直接計(jì)數(shù)法菌懸液制備→鏡檢計(jì)數(shù)室→加樣品→顯微鏡計(jì)數(shù)→清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板2.微生物測(cè)微技術(shù)裝目鏡測(cè)微尺→校正→菌體大小測(cè)定五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.防止加樣空氣泡產(chǎn)生。2.調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)。六、思考題1.根據(jù)你的體會(huì)，說明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差、力求準(zhǔn)確?2.某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測(cè)方法。3.為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺重新對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行校正?實(shí)驗(yàn)九大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線特征和繁殖規(guī)律，并學(xué)會(huì)繪制生長(zhǎng)曲線。2.復(fù)習(xí)光電比濁法測(cè)量細(xì)菌數(shù)量的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長(zhǎng)曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長(zhǎng)曲線也不相同。三、試劑與器材1.材料與試劑大腸桿菌、LB液體培養(yǎng)基70ml、分裝2支大試管(5ml／支)、剩余60ml裝入250ml的三角瓶。2.器材722型分光光度計(jì)、恒溫振蕩搖床、無菌試管、無菌吸管等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容編號(hào)→接種→培養(yǎng)→比濁測(cè)定五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.測(cè)定OD值時(shí)，要求從低濃度到高濃度測(cè)定2.嚴(yán)格控制培養(yǎng)時(shí)間六、思考題1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)畫出生長(zhǎng)曲線，并說明大腸桿菌生長(zhǎng)特征。2.如果用活菌計(jì)數(shù)法制作生長(zhǎng)曲線，你認(rèn)為會(huì)有什么不同?兩者各有什么缺點(diǎn)7．3.次生禮謝產(chǎn)物的大量積累在哪個(gè)時(shí)期?根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累?實(shí)驗(yàn)十水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的方法。2.了解水源水的平板菌落計(jì)數(shù)的原理。二、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用平板計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對(duì)營(yíng)養(yǎng)和其他生長(zhǎng)條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長(zhǎng)繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)出來的菌落，計(jì)算出來的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。三、試劑與器材1.試劑牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，滅菌水2.器材滅菌三角瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌吸管，滅菌試管等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.水樣的采取2.細(xì)菌總數(shù)測(cè)定3.菌落計(jì)數(shù)方法五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.注意全過程防止染菌六、思考題從自來水的細(xì)菌總數(shù)結(jié)果來看，是否合乎飲用水的標(biāo)準(zhǔn)？實(shí)驗(yàn)十一細(xì)菌細(xì)胞的生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私獠⒄莆占?xì)菌鑒定中常用生理生化反應(yīng)的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理各種細(xì)菌由于具有不同的酶系統(tǒng)，致使它們能利用不同的底物，或雖然可以利用相同的底物，卻產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物，因此可以利用各種生理生化反應(yīng)來鑒別細(xì)菌。糖發(fā)酵是Z常用的生化反應(yīng)，存在于大多數(shù)細(xì)菌中。不同的細(xì)菌在糖的分解能力上存在很大的差異。有些細(xì)菌能分解某種糖并產(chǎn)生酸性物質(zhì)(如乳酸、丙酸、醋酸等)和氣體(如二氧化碳、氫、甲烷等)，而有些細(xì)菌只產(chǎn)生酸不產(chǎn)生氣體。例如大腸桿菌分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，但不能分解乳糖。酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判斷。在培養(yǎng)基中加入溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵試管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡的出現(xiàn)來驗(yàn)證．三、試劑與器材1.材料大腸桿菌、普通變性桿菌、產(chǎn)氣桿菌、糖發(fā)酵培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。2.試劑甲基紅試劑、40％KOH、5％a一萘酚、、吲哚試劑。3.實(shí)驗(yàn)器材德漢氏小管、試管、接種環(huán)、恒溫培養(yǎng)箱。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容培養(yǎng)基配制→編號(hào)→試管→接種→培養(yǎng)→觀察結(jié)果五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.要嚴(yán)格按照培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基。2.觀察結(jié)果時(shí)要注意滴加藥量及反應(yīng)時(shí)間。六、思考題1.哪些生理生化試驗(yàn)可用于區(qū)別大腸桿菌和產(chǎn)生腸桿菌?結(jié)果如何?2.做糖發(fā)酵試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意哪些問題?3.甲基紅試驗(yàn)和伏一普試驗(yàn)的Z終產(chǎn)物如何?為什么會(huì)出現(xiàn)不同的Z終產(chǎn)物?實(shí)驗(yàn)十二噬菌體的分離、純化及效價(jià)測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)分離、純化噬菌體的原理和方法2.觀察噬菌斑的形態(tài)和大小3.掌握噬菌體效價(jià)測(cè)定的基本方法二、實(shí)驗(yàn)原理噬菌體是細(xì)菌的專性寄生物，自然界中凡是有細(xì)菌存在的地方，均可以發(fā)現(xiàn)其特異性的噬菌體，噬菌體侵入細(xì)菌細(xì)胞后，利用宿主細(xì)胞的酶系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)制和增殖，Z終導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞裂解，噬菌體從細(xì)胞中釋放出來，可以進(jìn)一步侵染細(xì)菌細(xì)胞。在液體培養(yǎng)基中，噬菌體可以使渾濁的菌懸液變?yōu)槌吻?。在長(zhǎng)有宿主細(xì)菌的固體培養(yǎng)基平板上，噬菌體可以裂解細(xì)菌形成透明的空斑，即噬菌斑，一個(gè)噬菌體產(chǎn)生一個(gè)噬菌斑，因此可以利用這個(gè)性質(zhì)對(duì)噬菌體進(jìn)行分離和效價(jià)的測(cè)定。噬菌體的效價(jià)是指噬菌體的濃度，即一毫升培養(yǎng)液中所含有的噬菌體數(shù)量。噬菌體效價(jià)的測(cè)定方法多采用雙層瓊脂平板法。先在培養(yǎng)皿中倒入底層固體培養(yǎng)基，凝固后再倒入含有宿主細(xì)菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，計(jì)算噬菌斑的數(shù)量。三、試劑與器材1.材料大腸桿菌、牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基(含有瓊脂0．5％，試管分裝，每管3～5m1)、三倍濃縮的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基。2.器材培養(yǎng)皿、無菌吸管、三角瓶、抽濾瓶、蔡氏細(xì)菌濾器、真空泵、陰溝污水。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容噬菌體分離→噬菌體純化→效價(jià)測(cè)定五、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)1.噬菌體時(shí)要注意細(xì)菌濾器的型號(hào)。2.純化噬菌體時(shí)要注意形態(tài)、大小。3.效價(jià)測(cè)定時(shí)要注意雙層瓊脂平板法的使用技巧。六、思考題1.在固體培養(yǎng)基平板上為什么能形成噬茵斑?2.從固體培養(yǎng)基平板上得到的噬菌斑數(shù)目，如何計(jì)算噬菌體的效價(jià)？

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