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- 東霞云霞 2017-06-16 00:00:00
- 原理:X射線衍射法是一種研究晶體結(jié)構(gòu)的分析方法,而不是直接研究試樣內(nèi)含有元素的種類及含量的方法。當X射線照射晶態(tài)結(jié)構(gòu)時,將受到晶體點陣排列的不同原子或分子所衍射。X射線照射兩個晶面距為d的晶面時,受到晶面的反射,兩束反射X光程差2dsinθ使入射波長的整數(shù)倍時,即2dsinθ=nλ(n為整數(shù)),兩束光的相位一致,發(fā)生相長干涉,這種干涉現(xiàn)象稱為衍射,晶體對X射線的這種折射規(guī)則稱為布拉格規(guī)則。θ稱為衍射角(入射或衍射X射線與晶面間夾角)。n相當于相干波之間的位相差,n=1,2…時各稱0級、1級、2級……衍射線。反射級次不清楚時,均以n=1求d。晶面間距一般為物質(zhì)的特有參數(shù),對一個物質(zhì)若能測定數(shù)個d及與其相對應(yīng)的衍射線的相對強度,則能對物質(zhì)進行鑒定。
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1.環(huán)境溫度如果高于60度,對閉口閃點儀將影響很大,首先是試劑的揮發(fā)性,溫度高試劑會大量揮發(fā),造成損耗,其次,儀器電解水分過程中,溫度過高對儀器的電解時間、速度、重復性,穩(wěn)定性造成一定的影響。
2.使用環(huán)境差,外界干擾增多,測量電極的信號采集和傳輸困難,抗干擾能力減弱,造成儀器測定不準確。
3.主板的各電子元件,超過其耐熱承受力,耐熱性能減弱,同時熱輻射的增強,容易燒毀部分電子元器件,造成儀器主板性能不穩(wěn)定。
4.高溫高濕環(huán)境空氣水汽增多,樣品吸收水分的幾率增大,測定的結(jié)果會有很大的誤差,造成測量不準確。
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解決方案:
客戶需要對頭孢克肟晶體進行特征觀察用于制藥,工程師給用戶推薦了高性價比的偏光顯微鏡MP41,采用無限遠光學系統(tǒng)及模塊化功能設(shè)計,配置無窮遠無應(yīng)力長工作距離平場物鏡,三目鏡筒可自由切換目視觀察與顯微攝影,攝影時可通光,適合低照度顯微圖像拍攝。另外搭配具有較高的清晰度和靈敏度、色彩還原真實、傳輸數(shù)據(jù)快的顯微鏡相機MC50-S。
如果您對偏光顯微鏡感興趣或有疑問,歡迎與我們聯(lián)系,期待與您相約!
(來源:http://www.mshot.com/kehuanli/20200414.html廣州市明美光電技術(shù)有限公司)
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德國ibidi 81201載玻片
實驗使用的材料和試劑列于下面。
12孔腔室載玻片,可移除(ibidi,81201)
用于腔室的蓋玻片,可移除,24mm x 60 mm(ibidi,10811)
細胞:MCF-7(CLS,300273)
細胞培養(yǎng)基
細胞培養(yǎng)試劑
聚苯硫醚
formalin溶液中性緩沖液,10%(Sigma,HT5011)
染色試劑
o DAPI(Sigma,D954)
o DYE-490鬼筆環(huán)肽(Dynomics,490-33)
安裝介質(zhì):FluoroshieldTm值(Sigma,F(xiàn)6182)
實驗方案:
步驟1:
必須在預(yù)實驗中確定細胞系的正確接種濃度。根據(jù)您的細胞類型,用2-6x10 4細胞/ ml在2-3天內(nèi)產(chǎn)生匯合的單層。
1.打開12孔可移除腔室載玻片(ibidi,81201)包裝,在無菌條件下可拆除。
2.像往常一樣用胰蛋白酶消化并計數(shù)細胞。細胞濃度為5×104細胞/ ml MCF-7。
3. 將250μl細胞懸浮液加入腔室的每個孔中。避免搖晃,因為這會導致細胞分布不均勻。
4. 用配套的蓋子蓋住。在37°C和5%CO2下培養(yǎng)。細胞至少培養(yǎng)24小時,或直到建立融合的單層步驟2:
固定是染色程序的DY步。目標是將細胞,細胞形成物或組織維持在其當前狀態(tài),并在較長時間內(nèi)通過化學試劑保存。
1.小心地吸出細胞培養(yǎng)基。
2.用PBS洗兩次。
3.加入250μl的formalin溶液。
4.在室溫下孵育30分鐘。
5.小心吸入formalin溶液。
6.用PBS洗滌三次。步驟3:
應(yīng)根據(jù)感興趣的細胞結(jié)構(gòu)選擇染色試劑。在該方案中使用DAPI和DYE-490鬼筆環(huán)肽染色MCF-7細胞的細胞核和肌動蛋白骨架。
1.準備你的染色溶液:· 聚苯硫醚· DYE-490鬼筆環(huán)肽· DAPI 1μg/ml
2.小心吸出PBS。
3.移取250μl染色溶液到每個孔中
4.在室溫下避光孵育30分鐘步驟4:
在染色后清洗你的樣本會使背景信號降到很低
1.小心地吸出染色溶液
2.加入250μl緩沖液
3.小心吸入緩沖液
4.重復步驟2和步驟3一次步驟5:
從一個邊部開始,用手或用鑷子小心地取下硅膠墊圈。該步驟應(yīng)以緩慢,穩(wěn)定的進行,以避免損壞細胞層。
步驟6:
完成染色程序后,必須在用顯微鏡成像之前封固樣品。該步驟還防止樣品脫水。
1.將載玻片側(cè)面在干凈的實驗室濕巾上輕敲,從樣品中去除多余的介質(zhì)。
2.將封固劑涂在樣品上。用24毫米x 60毫米的蓋玻片覆蓋安裝的樣品,小心地將蓋玻片放到安裝介質(zhì)上,以避免夾住任何氣泡。推薦使用諸如FluoroshieldTm值(Sigma-Aldrich),Vectashield?(Vector Laboratories Inc.)或ProLongAntifade?(ThermoFisher Scientific)的硬化封固劑。
3.安裝封固劑固化。步驟7:顯微觀察
使用12孔可移除載玻片培養(yǎng)MCF-7細胞,用DAPI和DYE 490鬼筆環(huán)肽染色細胞結(jié)構(gòu)。使用硬化封固劑安裝載玻片保存樣品以便長期儲存。
圖1用DYE490鬼筆環(huán)肽(左上)染色MCF-7細胞的肌動蛋白骨架,并用DAPI(右上)染色細胞核。下圖顯示了合成圖像,其中細胞核為藍色,肌動蛋白骨骼為綠色。(比例尺:100μm)
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