RFLP和DGGE各自的優(yōu)缺點(diǎn)？謝謝了，大神幫忙啊

ma492179069 2014-06-23 12:08:06 578 瀏覽

土壤微生物的分子生物學(xué)研究，可以有很多方法。我利用RFLP來(lái)做，是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室缺少做DGGE的儀器。那么請(qǐng)問(wèn)，RFLP還具有DGGE所沒(méi)有的其他優(yōu)勢(shì)嗎？... 土壤微生物的分子生物學(xué)研究，可以有很多方法。我利用RFLP來(lái)做，是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室缺少做DGGE的儀器。那么請(qǐng)問(wèn)，RFLP還具有DGGE所沒(méi)有的其他優(yōu)勢(shì)嗎？展開(kāi)

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lqqqianqi 2014-06-24 00:00:00

RFLP標(biāo)記是發(fā)展Z早的DNA標(biāo)記技術(shù)。RFLP是指基因型之間限制性片段長(zhǎng)度的差異，這種差異是由限制性酶切位點(diǎn)上堿基的插入、缺失、失重排或點(diǎn)突變所引起的。 RFLP技術(shù)主要包括以下基本步驟： DNA提取→用限制性內(nèi)切酶酶切DNA→用凝膠電泳分開(kāi)DNA片段→把DNA片段轉(zhuǎn)移到濾膜上→利用放射性標(biāo)記的探針雜交顯示特定的DNA片段（Southern雜交）和結(jié)果分析。 RFLP遍布整個(gè)基因組，并且非常穩(wěn)定，但RFLP實(shí)驗(yàn)操作繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，成本高昂，不適于大規(guī)模的分子育種，在植物分子標(biāo)記輔助育種中需要將RFLP轉(zhuǎn)換成以PCR為基礎(chǔ)的標(biāo)記。 RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphisma，限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性)作為diyi代分子生物學(xué)標(biāo)記自問(wèn)世以來(lái)已廣泛運(yùn)用于多門生物學(xué)科研究中，但它運(yùn)用于植物抗性研究還只是近幾年的事。RFLP能對(duì)植物的抗性基因進(jìn)行定位和分離，利用RFLP技術(shù)，對(duì)于核基因組或葉綠體基因組、尤其是后者，若能提取純凈DNA，則可直接從酶切后的電泳圖譜看出其多態(tài)性，利用這一方法可以測(cè)定種群內(nèi)、種群間不同水平的物種在污染環(huán)境下抗性分化進(jìn)化水平上的差異。與核酸序列分析相比，RFLP可省去序列分析中許多非常繁瑣工序，但相對(duì)RAPD 而言，RFLP方法更費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，需要進(jìn)行DNA多種酶切、轉(zhuǎn)膜以及探針的制備等多個(gè)步驟，僅對(duì)基因組單拷貝序列進(jìn)行鑒定。但RFLP又有比RAPD優(yōu)越之處，它可以用來(lái)測(cè)定多態(tài)性是由父本還是母本產(chǎn)生的，也可用來(lái)測(cè)定由多態(tài)性產(chǎn)生的突變類型究竟是由堿基突變或倒位、還是由缺失、插入造成的。

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