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  她叫陳佳如 2007-04-14 00:00:00

  活性污泥中的微生物種類繁雜，數(shù)量龐大。如果不經(jīng)稀釋就直接做分離培養(yǎng)，則培養(yǎng)基上的菌落會因為數(shù)量過多而互相連結(jié)，分不清楚了，就達(dá)不到分離目的。

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  nice000000c 2007-04-13 00:00:00

  活性污泥中的微生物種類繁雜，數(shù)量龐大。如果不經(jīng)稀釋就直接做分離培養(yǎng)，則培養(yǎng)基上的菌落會因為數(shù)量過多而互相連結(jié)，分不清楚了，就達(dá)不到分離目的。

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  楊冪味的蘇玖吖 2017-10-05 00:00:00

  菌種的分離方法： （1）施加選擇性壓力分離法 主要是利用不同種類的微生物其生長繁殖對環(huán)境和營養(yǎng)的要求不同，如溫度、pH、滲透壓、氧氣、碳源、氮源等，人為控制這些條件，使之利于某類或某種微生物生長，而不利于其他種類微生物的生存，以達(dá)到使目的菌種占優(yōu)勢．而得以快速分離純化的目的。如可以控制培養(yǎng)時的氧，可將好氧微生物和厭氧微生物分開；通過控制溫度，可將嗜熱微生物和非嗜熱微生物分開；控制pH，可將嗜酸、嗜堿微生物分離等。在分離培養(yǎng)基中也可以加入不同的抗生素或試劑來增加選擇性。如在分離放線菌和細(xì)菌時，可加入抗真菌抗生素；分離真菌時，可加入抗細(xì)菌藥物。 （2）隨機分離方法 有些微生物的產(chǎn)物對篩選沒有直接的選擇性指示作用，因此常采用隨機分離方法分離。 A、抗生素產(chǎn)生菌的分離 抗生素產(chǎn)生菌的分離常用YJ圈法。實驗必須用工具菌：采用抗生素的敏感菌，傳統(tǒng)上常用金黃色葡萄球菌和枯草桿菌。 B、抗腫瘤藥物產(chǎn)生菌的分離 抗腫瘤藥物產(chǎn)生菌的分離常用方法：生化誘導(dǎo)法、SOS生色檢測法、DNA修復(fù)能力突變株。原理是利用DNA的損傷，微生物發(fā)生突變。 B1、生化誘導(dǎo)法：將大腸桿菌的lacZ基因連接在λ噬菌體的PL啟動子下，當(dāng)DNA損傷時，誘發(fā)λ阻遏物CI分解，PL啟動子啟動lacZ基因轉(zhuǎn)錄，測定表達(dá)的ß-半乳糖苷酶活性，來檢測藥物的存在。 B2、SOS生色檢測法：利用當(dāng)DNA損傷時，可活化yecA蛋白，進(jìn)而分解噬菌體的阻遏蛋白，再引起sifA基因啟動lacZ基因轉(zhuǎn)錄，測定表達(dá)的ß-半乳糖苷酶活性，來檢測藥物的存在。 C、生長因子產(chǎn)生菌的分離 以氨基酸產(chǎn)生菌為例，介紹篩選方法。首先將待試菌接入加了抗真菌的化合物（如亞胺環(huán)己酮）的分離培養(yǎng)基中生長，然后采用影印法，將菌落復(fù)印到能支持氨基酸產(chǎn)生菌生長的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2-3天后，用紫外線殺司長好的菌落，再往此平板上面鋪一層相應(yīng)營養(yǎng)缺陷型菌株菌懸液，培養(yǎng)16小時后，被殺死的氨基酸產(chǎn)生菌的菌落周圍應(yīng)有一檢測菌的生長圈。 （3）目的微生物分離 A、根據(jù)形態(tài)篩選突變株 B、根據(jù)平板菌落生化反應(yīng)篩選變株 透明圈法、呈色圈法、YJ圈法、渾濁圈法等。 ①透明圈法：在平板培養(yǎng)基中加入溶解性較差的底物，使培養(yǎng)基混濁。能分解底物的微生物便會在菌落周圍產(chǎn)生透明圈，圈的大小初步反應(yīng)該菌株利用底物的能力。該法在分離水解酶產(chǎn)生菌時采用較多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶產(chǎn)生菌都會在含有底物的選擇性培養(yǎng)基平板上形成肉眼可見的透明圈。 在分離某種產(chǎn)生有機酸的菌株時，也通常采用透明圈法進(jìn)行初篩。在選擇性培養(yǎng)基中加入碳酸鈣，使平板成混狀，將樣品懸浮液涂抹到平板上進(jìn)行培養(yǎng)，由于產(chǎn)生菌能夠把菌落周圍的碳酸鈣水解，形成清晰的透明圈，可以輕易地鑒別出來。分離乳酸產(chǎn)生菌時，由于乳酸是一種較強的有機酸，因此，在培養(yǎng)基中加入的碳酸鈣不僅有鑒別作用，還有酸中和作用。 ②變色圈法：對于一些不易產(chǎn)生透明圈產(chǎn)物的產(chǎn)生菌，可在底物平板中加入指示劑或顯色劑，使所需微生物能被快速鑒別出來。如篩選果膠酶產(chǎn)生菌時，用含0.2%果膠為惟一碳源的培養(yǎng)基平板，對含微生物樣品進(jìn)行分離，待菌落長成后，加入0.2%剛果紅溶液染色4h，具有分解果膠能力的菌落周圍便會出現(xiàn)絳紅色水解圈。在分離谷氨酸產(chǎn)生菌時，可在培養(yǎng)基中加入溴百里酚藍(lán)，它是一種酸堿指示劑，變色范圍在pH6.2～7.6，當(dāng)pH在6.2以下時為黃色，pH7.6以上為藍(lán)色。若平板上出現(xiàn)產(chǎn)酸菌，其菌落周圍會變成黃色，可以從這些產(chǎn)酸菌中篩選谷氨酸產(chǎn)生菌。 ③生長圈法：生長圈法通常用于分離篩選氨基酸、核苷酸和維生素的產(chǎn)生菌。工具菌是一些相對應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌株。將待檢菌涂布于含高濃度的工具菌并缺少所需營養(yǎng)物的平板上進(jìn)行培養(yǎng)，若某菌株能合成平板所需的營養(yǎng)物，在該菌株的菌落周圍便會形成一個混濁的生長圈。如嘌呤營養(yǎng)缺陷型大腸桿菌（如E.coliP264）與不含嘌呤的瓊脂混合倒平板，在其上涂布含菌樣品保溫培養(yǎng)，周圍出現(xiàn)生長圈的菌落即為嘌呤產(chǎn)生菌。 ④YJ圈法：常用于抗生素產(chǎn)生菌的分離篩選，工具菌采用抗生素的敏感菌。若被檢菌能分泌某些YZ菌生長的物質(zhì)，如抗生素等，便會在該菌落周圍形成工具菌不能生長的YJ圈，很容易被鑒別出來。

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