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  惟惜戀鬼飄飄 2017-09-10 21:03:41

  答：蛋白質(zhì)失活的原因是去垢劑中的表面活性劑能夠通過(guò)包含蛋白質(zhì)的半透膜，而其強(qiáng)堿性離子能夠使蛋白質(zhì)變性. 去垢劑(表面活性劑)是一類(lèi)即具有親水基又具有疏水基的物質(zhì)，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分陰離子、陽(yáng)離子和中性去垢劑等多種類(lèi)型，中性去垢劑在蛋白提取鐘應(yīng)用的較多. A．中性去垢劑 又稱(chēng)非離子表面活性劑，對(duì)蛋白質(zhì)的變性作用影響較少，宜于蛋白質(zhì)或酶提取之用.一般市售中性去垢劑有聚乙二醇類(lèi)，如PEG200；多元醇類(lèi)表面活性劑，如山梨醇、司盤(pán)類(lèi)和吐溫類(lèi)；聚氧乙烯脂肪醇醚，如芐澤類(lèi)、平平加類(lèi)；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如Igepal CO、乳化劑OP、Triton、Pluronic(用作消泡劑、潤(rùn)濕劑、增溶劑)、泡敵.中性去垢劑作用后可通過(guò)Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱層析分離目的蛋白，不必先除去去垢劑. B．陰離子去垢劑 常見(jiàn)的有十二烷基硫酸鈉和十二烷基璜酸鈉.前者可促進(jìn)核蛋白的溶解，將核酸釋放出來(lái)，并對(duì)核酸酶有一定YZ作用，常用于核酸的提取. C．陽(yáng)離子去垢劑 如潔爾滅、新潔爾滅、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒凈（TMPB）、杜滅芬等，消毒滅菌類(lèi)居多. D．天然表面活性劑 又稱(chēng)為生物表面活性劑，包括種類(lèi)較為廣泛，如各種樹(shù)膠（阿拉伯膠、杏膠、桃膠、果膠）、明膠、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、瓊脂、海藻酸鈉、酪蛋白、膽甾醇、膽酸類(lèi)、多糖類(lèi)（如環(huán)糊精）等. E．兩性表面活性劑 在堿性水溶液中呈陰離子表面活性劑的性質(zhì)，起泡性好，去污力也強(qiáng)；在酸性溶液中則呈現(xiàn)陽(yáng)離子表面活性劑特征，其殺菌性很強(qiáng). 蛋白質(zhì)變性劑的作用是破壞蛋白質(zhì)的次級(jí)鍵，如氫鍵、鹽鍵和疏水力，引起天然構(gòu)象的解體；它們并不破壞共價(jià)鍵，如肽鍵和二硫鍵，故不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變.變性劑有溶解型和沉淀型兩類(lèi)，SDS、尿素和胍鹽是有效的溶解型變性劑，而三、甲醇、和氯仿/異戊醇是有效的沉淀變性劑.一般而言，變性劑應(yīng)用時(shí)常大大過(guò)量，破壞氫鍵的變性劑用量至少兩倍于氨基酸的克分子數(shù)，如1克蛋白質(zhì)可可結(jié)合1.4g.SDS溶于水可達(dá)25%，對(duì)溫度敏感，W/V貯存液Z為方便.需要注意的是SDS的鉀鹽是不溶性的，所以SDS溶液中要避免混入鉀鹽.尿素極易溶于水，可達(dá)10mol/L，在8mol/L以上要注意溫度以防止沉淀.尿素在水中緩慢分解形成氨及高度活性的氰酸離子，故要防止高溫.三與過(guò)氯酸（TCA，PCA）都是極好的沉淀劑，能沉淀蛋白質(zhì)和核酸，前者應(yīng)用更為廣泛.

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