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病原微生物學(xué)免疫診斷技術(shù)綜述

溪堓 2014-10-15 11:50:14 529  瀏覽
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  • superhuman響 2014-10-16 00:00:00
    摘要:病原微生物種類繁多,變異迅速,快速鑒定病原微生物的檢驗技術(shù)也在不斷發(fā)展前進(jìn)著。目前,應(yīng)用比較廣泛的病原微生物檢測方法主要有直接涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)、血清學(xué)反應(yīng)、核酸分子雜交、基因芯片、多聚酶鏈反應(yīng)等,該文對這些檢測技術(shù)進(jìn)展做一綜述。 對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物,又稱病原體,有病毒、細(xì)菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過敏、腫瘤、癡呆等疾病,也是危害食品安全的主要因素之一。近年來出現(xiàn)的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強(qiáng),往往造成世界性大流行,因此對病原體的檢測必須做到快速、準(zhǔn)確。常規(guī)病原學(xué)檢測方法操作繁瑣,檢測周期長,而且對操作人員技術(shù)水平要求比較高。隨著醫(yī)學(xué)微生物學(xué)研究技術(shù)的不斷發(fā)展,病原學(xué)診斷已不再局限于病原體水平,深入到分子水平、基因水平的檢測手段不斷出現(xiàn)并被應(yīng)用于臨床和實驗室 J。核酸分子雜交技術(shù)、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)等檢測方法,自動化程度高,快速省時、無污染、結(jié)果精確,可以準(zhǔn)確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統(tǒng)的病原微生物的檢測方法傳統(tǒng)的病原微生物學(xué)實驗室檢查以染色、培養(yǎng)、生化鑒定等為主,將標(biāo)本直接涂片染色鏡檢和接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)是對細(xì)菌或真菌感染性疾病進(jìn)行病原學(xué)診斷的常用方法。1.1 直接涂片鏡檢病原微生物體形體積微小,大多無色半透明狀,將其染色后可借助顯微鏡觀察其大小、形態(tài)、排列等。直接涂片染色鏡檢簡便快速,對那些具有特殊形態(tài)的病原微生物感染仍然適用,例如淋球菌感染、結(jié)核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接涂片鏡檢不需要特殊的儀器和設(shè)備,在基層實驗室里仍然是十分重要的病原微生物檢測手段。1.2 分離培養(yǎng)與生化反應(yīng) 分離培養(yǎng)主要用于臨床標(biāo)本(如血液、痰、糞便等)或培養(yǎng)物中有多種細(xì)菌時對某一種細(xì)菌的分離。細(xì)菌的生長繁殖需要一定時間,檢測周期較長,不能同時處理批量樣本。為解決這一問題,各種自動化培養(yǎng)和鑒定系統(tǒng)不斷產(chǎn)生,傳統(tǒng)鑒定方法也在逐步改進(jìn),大大加快了檢驗速度。例如Microscan WalLCAway全自動微生物分析儀,可同時做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗,檢驗500多個菌種。苛養(yǎng)菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對營養(yǎng)要求比較高,常規(guī)培養(yǎng)陽性率低。雍剛 等將不要同比例的葡萄糖、玉米淀粉、生長因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養(yǎng)基中制成了新型淋病奈瑟菌培養(yǎng)基,大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養(yǎng)率。蘇盛通等在營養(yǎng)瓊脂中加人了中藥紅棗、赤小豆培養(yǎng)甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌等細(xì)菌,生長指數(shù)明顯高于血平板。1.3 組織細(xì)胞培養(yǎng) 活組織細(xì)胞培養(yǎng)適于專營活組織細(xì)胞內(nèi)生存的病原體,包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細(xì)胞是不一樣的,將活細(xì)胞從病原體敏感的動物組織中取出在體外進(jìn)行原代培養(yǎng)或用病原體敏感細(xì)胞系進(jìn)行傳代培養(yǎng),再將病原體接種于相應(yīng)的組織細(xì)胞中后,病原體可在其中繁殖增長,引起特異性的細(xì)胞病變效應(yīng)。也可以將病原體直接接種于敏感動物體內(nèi),引起相應(yīng)組織器官出現(xiàn)特異的病理學(xué)改變。往往可以根據(jù)這些特異的病變對病原體進(jìn)行鑒定。2 血清學(xué)與免疫學(xué)檢測血清學(xué)檢測是通過已知的抗體或抗原來檢測病原體的抗原或抗體從而對病原體進(jìn)行快速鑒定的技術(shù),簡化了鑒定步驟,常用的方法包括血清凝集技術(shù)、乳膠凝集實驗、熒光抗體檢測技術(shù)、協(xié)同凝集試驗、酶聯(lián)免疫測試技術(shù)等。酶聯(lián)免疫技術(shù)的應(yīng)用大大提高了血清學(xué)檢測的敏感性和特異性,不僅可檢測樣本中病原體抗原,也可檢測機(jī)體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國人群感染率高達(dá)50% ~80% ,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測唾液中抗HP抗體來診斷HP感染,其結(jié)果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國人群中感染率極高,ELISA應(yīng)用于乙型肝炎病人早期血清學(xué)診斷的效果Z為明顯。臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起,如何從這些細(xì)菌中分離出目標(biāo)菌是關(guān)鍵。免疫磁珠分離技術(shù)(IMBS)是近年來發(fā)展起來的在微生物檢測領(lǐng)域中一種新技術(shù)。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯(lián)到磁珠微球上,通過抗原抗體反應(yīng)形成磁珠一目標(biāo)病原體復(fù)合物或磁珠一一抗一目標(biāo)病原體復(fù)合物,在外部磁場磁力的作用下,將目標(biāo)病原體分離出來。目前已經(jīng)開發(fā)出了針對各種病原體的免疫磁珠,如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團(tuán)菌等,廣泛應(yīng)用到各級科研和實驗室 。經(jīng)IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測,檢測時間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測技術(shù)聯(lián)合來檢測病原菌,免疫磁珠分離得到的目標(biāo)菌可繼續(xù)用于分離培養(yǎng)使大腸埃希菌0157Z低檢測限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g~;IMBS結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)(IMBS—PCR)可對培養(yǎng)條件比較特殊的細(xì)菌如苛養(yǎng)菌、厭氧菌進(jìn)行快速檢測,肉類中的產(chǎn)毒素型產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)IMBS.PCR檢測,檢測時間縮短到10 h,Z低檢測限可達(dá)10cfu·g~,有研究者利用IMBS結(jié)合實時熒光定量PCR(IMBS—RT—PCR)成功檢測出了水中的輪狀病毒和草莓的諾如病毒,檢測時間大大縮短;Leon—Velarde等利用IMB8結(jié)合酶聯(lián)檢測,大大提高了沙門菌的檢測效率。3 基因檢測隨著科技水平發(fā)展,分子生物學(xué)檢測技術(shù)日新月異,對病原微生物的鑒定已不再局限于對普通外部形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理生化特性等的一般檢驗上,而是深入到了分子水平、核酸水平。病原微生物的核酸序列即基因片段都是特異的,有別于其他種或?qū)?,檢測其特有的基因片段序列可用來鑒別病原微生物。隨著科技的發(fā)展,基因檢測技術(shù)逐漸代替其它檢測技術(shù),成為臨床檢驗科和基礎(chǔ)實驗室對病原體的主流檢測技術(shù)。3.1 核酸雜交技術(shù)具有一定互補(bǔ)序列的核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補(bǔ)配對原則締成異質(zhì)雙鏈的過程叫核酸雜交,其雜交雙方是所使用探針和要檢測的核酸。在病原微生物檢測中核酸分子雜交主要包括膜上印跡雜交和核酸原位雜交兩種。膜上印跡雜交是指將核酸從微生物細(xì)胞中分離出來,純化后在體外結(jié)合到一定的固相支持物上,與存在于液相中標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交。核酸原位雜交是指標(biāo)記的核酸探針直接與細(xì)胞或組織切片中的核酸進(jìn)行雜交。探針還可以用熒光標(biāo)記,在熒光顯微鏡或激光掃描共聚焦顯微鏡下即可鑒別病原體還可顯示在三維空間中的位置。核酸分子雜交檢測技術(shù)與其它方法相比顯著地優(yōu)點是簡便、敏感、快速、特異。Wong 等用熒光標(biāo)記2個不同的寡核苷酸探針從血液標(biāo)本中檢測出假單胞菌屬和不動桿菌屬的細(xì)菌,Z低檢測限為10 cfu·mL~,特異度為100% ,檢測時間不到2 h。寡核苷酸探針是針對病原體特異基因序列設(shè)計的,可以將待檢測的病原體定位在不同的分類等級,如科、屬、種、亞種“ 。(病原微生物檢測技術(shù)進(jìn)展)3.2 基因芯片技術(shù)基因芯片(DNA chip)又稱為DNA微陣列(DNA microarray)或DNA芯片,是生物芯片的一種 j,是核酸分子雜交技術(shù)發(fā)展延伸而來的。通過微加工技術(shù),將數(shù)以萬計甚至百萬計的基因探針即DNA片段有規(guī)律地排列成二維DNA探針陣列,固定到硅片、玻片等固態(tài)支持物上,與標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行核酸雜交,用于基因檢測工作。其測序原理與核酸雜交一樣,但解決了傳統(tǒng)核酸雜交技術(shù)操作繁雜、檢測效率低、自動化程度不高的缺點?;蛐酒诓≡⑸锔腥驹\斷上的應(yīng)用,大大縮短了確診所需要的時間,而且能檢測出病原體是否耐藥、對那些抗生素耐藥、對那些抗生素敏感。Naas 等設(shè)計的基因芯片可以檢測出銅綠假單胞菌、腸桿菌屬、鮑氏菌屬中各型B一內(nèi)酰胺酶類耐藥基因。蔡挺等設(shè)計的基因芯片檢測出大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑氏不動桿菌、陰溝腸桿菌對l7種KJ藥物的耐藥率。Batchelor 等開發(fā)的基因芯片可以檢測出編碼耐超廣譜8.內(nèi)酰胺酶、磺胺類、四環(huán)素類、氨基糖甙類等47個耐藥基因的大腸埃希菌和沙門氏菌?;蛐酒夹g(shù)同樣還有些問題有待解決,如提高芯片的特異性和檢測信號的敏感性,降低芯片的制作成本等,而且多數(shù)芯片都需要昂貴的檢測儀器,這些問題使得基因芯片到目前主要局限于實驗室研究而未能廣泛應(yīng)用于臨床病原微生物的檢測與鑒定。(病原微生物檢測技術(shù)進(jìn)展)3.3 PCR技術(shù)聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一種在體外是用已知寡核苷酸引物引導(dǎo)未知片段中微量待測基因片段并進(jìn)行擴(kuò)增的技術(shù)。由于PCR可以對待測基因進(jìn)行擴(kuò)增,特別適用于病原體感染早期的診斷,但是如果引物特異性不強(qiáng),可能會造成假陽性的出現(xiàn)。PCR技術(shù)在近20年里發(fā)展迅速,從基因擴(kuò)增到基因的克隆和改造以及遺傳分析,可靠性逐步提高。Jbara 用PCR和傳統(tǒng)法直接檢測75例樣本中的流感嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌,與傳統(tǒng)方法相比,PCR檢測的特異度和靈敏度分別為87.3% 和100% 。1988年Chamberian等提出了多重PCR的概念,同一PCR反應(yīng)體系里加上二對以上引物,可同時擴(kuò)增出多個核酸片段,適合大量樣本的分析與鑒定。多重PCR具有:(1)GX性,在同一反應(yīng)體系內(nèi)可同時檢出多種病原微生物,或?qū)ν徊≡⑸锏牟煌蛣e進(jìn)行分型;(2)系統(tǒng)性,多重PCR很適宜于成組病原體的檢測,如幾種肝炎病毒同時感染;淋球菌、梅毒螺旋體、艾滋病病毒等多重性病病原體的感染;需特殊培養(yǎng)的無芽胞厭氧菌感染;破傷風(fēng)桿菌,炭疽桿菌,產(chǎn)氣莢膜桿菌,鼠疫耶爾森菌等戰(zhàn)傷感染細(xì)菌感染;(3)經(jīng)濟(jì)簡便性,多種病原體在同一反應(yīng)管內(nèi)同時被檢出,節(jié)省試劑、節(jié)約費(fèi)用、節(jié)省時間,為臨床提供更快更多更準(zhǔn)確的診斷信息。Reyes等 用多重PCR從90例發(fā)熱但培養(yǎng)陰性的兒童細(xì)菌性腦膜炎腦脊液樣本中檢測出了腦膜炎奈瑟球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌,特異度100% ,敏感度89%。實時熒光定量PCR,在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程。具有高度靈敏、高度特異、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點。實時熒光定量PCR對性病病原體早期確診、窗口期篩查、LX檢測、基因變異分析和預(yù)后評估等具有重要價值,為流行病學(xué)調(diào)查提供幫助 J。王娉等 建立了多重實時熒光定量PCR反應(yīng)體系,同一體系能同時快速檢測出耐甲氧西林和產(chǎn)腸毒素A的金黃色葡萄球菌。熒光基團(tuán)標(biāo)記的特異性引物可準(zhǔn)確反映病原體感染和藥物L(fēng)X,特別適用于不可人工培養(yǎng)和難以培養(yǎng)的病原體如病毒、衣原體等感染的診斷?;蛐酒夹g(shù)與多重PCR結(jié)合可以通過PCR對目的基因進(jìn)行放大,通過基因芯片的熒光探針增加檢測的靈敏性和特異性,使得兩種檢測技術(shù)的優(yōu)勢互補(bǔ),已廣泛應(yīng)用于病原微生物的檢測。將病原體特異性基因作為靶基因設(shè)計出引物與探針,進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,制備出寡核苷酸芯片,再對待測樣本靶基因進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物與病原菌多重PCR基因芯片檢測體系雜交,可根據(jù)雜交信號直觀地判讀樣品中所含病原體的種類、型別、毒力、侵襲力,從而對病原體進(jìn)行檢測和鑒定。(病原微生物檢測技術(shù)進(jìn)展)3.4 其它基因檢測技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展,各種新的基因檢測手段不斷出現(xiàn)。Notomi等于2000年開發(fā)出一種新的環(huán)介導(dǎo)恒溫核酸擴(kuò)增法(1oop—mediated isothermal amplifi—cation of DNA,簡稱LAMP),針對靶基因序列上6或8個特異區(qū)域設(shè)計出4或6條引物,在具有鏈置換活性的DNA聚合酶的作用下形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)和鏈置換對目標(biāo)DNA大量擴(kuò)增。短短幾年LAMP已被廣泛應(yīng)用于疾病診斷、食品檢驗、環(huán)境監(jiān)測、生物安全等各方面心 ]。李蒙等 運(yùn)用LAMP法60 min檢測了16例開放性傷口深部傷口感染分泌物中的破傷風(fēng)芽孢梭菌,其中陽性為4例,Z低檢測限為4 x 10 。有研究報道l2 用LAMP技術(shù)快速檢測了200例肺結(jié)核患者的痰標(biāo)本,結(jié)核分枝桿菌的陽性檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于培養(yǎng)法和染色法。多位點可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列分析(Multiple—locus Variable—nun—ber Tandem repeat Analysis,MLVA)是一種根據(jù)病原體基因組中可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列的特征來對病原體基因分型的一種技術(shù),廣泛應(yīng)用于金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、炭疽芽胞桿菌等的基因分型與鑒定 ⋯。4 小結(jié)與展望對病原體進(jìn)行快速準(zhǔn)確的檢測和鑒定是傳染病FZ工作的首要問題。隨著生物學(xué)研究由宏觀領(lǐng)域向微觀領(lǐng)域的發(fā)展,病原體檢測方法也從組織形態(tài)學(xué)水平深入到分子水平、基因水平。近年來發(fā)展起來的病原微生物高通量檢測技術(shù)樣本需要量少、快速省時、無污染、診斷結(jié)果精確、自動化程度高,相信隨著研究的不斷進(jìn)展和深入,這些高通量診斷技術(shù)和方法必將在病原微生物的診斷分析方面起到越來越重要的作用,而多種檢測技術(shù)的聯(lián)合和綜合更是有著廣闊的應(yīng)用前景。

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掃描熱探針刻寫技術(shù)-綜述

本文轉(zhuǎn)載自  微系統(tǒng)與納米工程

Thermal scanning probe lithography—a review

Samuel Tobias Howell, Anya Grushina, Felix Holzner & Juergen Brugger 

 ( Microsystems Laboratory, école Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL), 1015, Lausanne, Switzerland)

          

Microsystems & Nanoengineering: volume 6, Article number: 16 (2020)

引用本文:https://www.nature.com/articles/s41378-019-0124-8


本文亮點:

1.  探討了掃描熱探針刻寫技術(shù)(thermal scanning probe lithography,t-SPL)的常規(guī)和獨特功能,尖細(xì)的探針快速準(zhǔn)確的溫控實現(xiàn)納米級分辨率的材料表面加工。 

2. 總覽了t-SPL用于納米器件制備案例,從量子技術(shù)到材料科學(xué)t-SPL改進(jìn)納米制備的過程。更多新興課題有待發(fā)掘。                                                                          

3. 探討用t-SPL去除材料,改變樣品材料的理化屬性或者在樣品表面沉積其他材料的實驗方法,參數(shù)和具體案例。


內(nèi)容簡介:

納米工作中需要制備各種納米器件,尤其是器件尺寸的進(jìn)一步縮小需要使用高分辨率的刻寫制備工具。電子束刻蝕(EBL)是目前唯yi可以選用的工具,其價格昂貴使用難度高。使用EBL可以制備高精度的納米結(jié)構(gòu)和器件,多年來在科研領(lǐng)域廣泛使用。由于需要復(fù)雜的電子兼容光學(xué)器件來聚焦電子束為幾個納米的斑點,使得EBL系統(tǒng)價格相對昂貴,對操作者的經(jīng)驗要求比較高。電子束在曝光光刻膠時產(chǎn)生的鄰近效應(yīng)需要使用復(fù)雜的軟件進(jìn)行校正以達(dá)到高分辨率曝光。尤其是在灰度曝光制備3D表面的納米器件時,操作過程更是復(fù)雜,縱向精度無法有效控制。另有文獻(xiàn)報道高能電子束損傷樣品或者將電子注入樣品導(dǎo)致其物理屬性的變化從而導(dǎo)致實驗失敗。因此值得探討高分辨率刻寫工具領(lǐng)域的新技術(shù)和其他選擇。

掃描探針刻寫(SPL)在30年前就展示了納米級的高分辨率,利用不同原理的SPL技術(shù)在不同實驗室得到開發(fā)應(yīng)用,但是刻寫速度慢功能單一。熱探針掃描刻寫(t-SPL)技術(shù)利用熱探針大大提高了刻寫速度,目前商業(yè)化的t-SPL系統(tǒng)在速度和分辨率上均和EBL系統(tǒng)媲美,為高分辨率刻寫工具領(lǐng)域提供了新的選擇。t-SPL在完成EBL相同的刻寫任務(wù)時還提供了其他的獨特功能,為科學(xué)研究開創(chuàng)新的思路。瑞士洛桑聯(lián)邦理工學(xué)院 Juergen Brugger教授團(tuán)隊回顧了熱掃描探針刻寫技術(shù)的現(xiàn)狀,綜述收集匯總了熱探針刻寫的工作和文獻(xiàn),介紹了t-SPL的原理和應(yīng)用案例及納米制備相關(guān)參數(shù)。探討了t-SPL在納米制備的功能和局限。力求為科研工作者在納米制備方面提供一個有關(guān)t-SPL的知識數(shù)據(jù)庫。

t-SPL系統(tǒng)優(yōu)點如下:t-SPL在常溫常壓或者其他氣體環(huán)境下使用。使用t-SPL可以去除樣品表面材料,改變樣品表面材料的物理化學(xué)特性,或者在樣品表面沉積其他材料,無需圖形轉(zhuǎn)移直接刻寫金屬或者其他材料的納米結(jié)構(gòu)。作為納米刻寫工具的t-SPL利用熱探針分解熱敏膠為氣態(tài)單體,直接在熱敏膠中生成納米結(jié)構(gòu)。探針在幾微秒內(nèi)冷卻下來用于實時檢測熱敏膠中的納米結(jié)構(gòu)。實時檢測的形貌圖可實現(xiàn)無標(biāo)記套刻,或者在3D表面刻寫時由閉環(huán)系統(tǒng)控制縱向刻寫誤差小于2 nm,達(dá)到高精度灰度刻寫。熱敏膠內(nèi)的納米結(jié)構(gòu)可以通過各種常規(guī)方法進(jìn)行圖形轉(zhuǎn)移比如剝離,高深寬比干法刻蝕,納米壓印,電鍍復(fù)制,制備架空結(jié)構(gòu),納米顆粒組裝或捕獲等。也可以直接使用熱敏膠內(nèi)納米結(jié)構(gòu)進(jìn)行納米顆粒定向運(yùn)輸,干細(xì)胞生長等實驗。熱探針不使用高能帶電粒子,有效保護(hù)樣品不受損傷或者變性。高精度3D表面刻寫和熱探針改變表面材料屬性促使新興課題的研究成為可能。


圖文展示1:用熱探針進(jìn)行納米制備的各種原理和方法。

使用熱探針引起材料升華或者機(jī)械壓印去除樣品表面材料,通過局部改變材料物理特性來改變樣品的結(jié)晶度或磁偶極子方向,或改變材料化學(xué)特性, 用熱探針融化黏附在針尖上的材料并沉積在樣品表面,或者在氣體環(huán)境中通過化學(xué)反應(yīng)將氣體中的元素沉積到樣品表面。

熱探針在納米制備中有很多不同的原理,方法和用途。使用熱探針可以在探針和樣品的接觸點局部去除或者改變樣品表面材料,或者沉積材料到樣品表面。去除材料的方法可以使用探針的機(jī)械壓力或者熱探針引起的化學(xué)反應(yīng)。材料變性是樣品表面材料在加熱的條件下可以發(fā)生物理或者化學(xué)特性的變化從而達(dá)到改變材料屬性的目的。熱探針也可以融化事先存儲或者黏附在探針上的材料,使其通過針尖沉積在樣品表面,沉積結(jié)構(gòu)的粗細(xì)通常由探針相對樣品移動的速度來控制?;蛘呃肅VD的原理在氣體環(huán)境中局部加熱樣品表面可以在任何基片上沉積高質(zhì)量的任意形狀的金屬納米結(jié)構(gòu)。由于針尖尺寸極小,熱探針誘導(dǎo)局部變性的區(qū)域可以達(dá)到納米等級的分辨率。


圖文展示2:影響熱探針下材料納米尺度的溫度和熱反應(yīng)動力學(xué)的傳熱模型和參數(shù)。

a 電阻式加熱的熱探針傳熱模型:熱量從加熱源通過探針尖和空隙傳導(dǎo)到樣品材料和基質(zhì)。b探針的尺寸和開口角度對針尖樣品接觸點的溫度以及分辨率的關(guān)系。通常,針的尺寸和開口角度越大,以犧牲分辨率來獲得更高的接觸溫度。c 典型情況下即薄膜(例如聚合物)的熱導(dǎo)率低于基材(例如Si)的熱導(dǎo)率時薄膜厚度對溫度的影響。針尖樣品點的接觸溫度隨著膜厚度的減小而降低。d薄膜材料中的溫度分布與被轉(zhuǎn)換的材料體積的定性示意圖。對于大多數(shù)與t-SPL有關(guān)的反應(yīng),熱轉(zhuǎn)化體積小于材料內(nèi)的熱量散布,這將有利于提高橫向分辨率。e一級反應(yīng)和針尖溫度的對應(yīng)曲線,即被轉(zhuǎn)化物質(zhì)相對于材料總量的百分比對應(yīng)針尖溫度變化的曲線。標(biāo)注了材料轉(zhuǎn)化率為1%,50%和99%的數(shù)據(jù)點。隨后的曲線顯示了針尖溫度受到活化能,針尖樣品接觸時間和針尖樣品接觸力的影響。f當(dāng)熱驅(qū)動過程的活化能增加時,需要更高的針尖溫度來觸發(fā)材料改性。g針尖接觸樣品的時間越長,那么觸發(fā)改性所需的溫度越低并且改性發(fā)生的溫度范圍越窄(x軸為對數(shù)坐標(biāo))。h通過增加壓力可以降低某些化學(xué)反應(yīng)完成所需的溫度。在t-SPL中,可以通過增加針尖和樣品的接觸力來實現(xiàn)。

在實際使用中,典型的情況是用熱探針改變基片上有機(jī)物薄膜材料的特性。這里對熱量從熱源,通過針尖和樣品的接觸間隙,傳導(dǎo)到薄膜和樣品的物理模型進(jìn)行了分析。當(dāng)針尖尺寸和張角越大,從熱源傳導(dǎo)到薄膜材料中的熱量就越多(接觸點的溫度較高)。厚度小的薄膜材料將更多的熱量傳導(dǎo)到基片導(dǎo)致熱量損失引起探針和薄膜材料接觸點的溫度降低。被熱探針改性的材料體積總是小于熱量傳導(dǎo)入薄膜材料的體積。針尖溫度越高,可以使得更多的材料發(fā)生改性。高活化能的材料需要高的針尖溫度觸發(fā)改性。針尖和樣品的接觸時間越長,接觸力越大,引起材料改性所需的針尖溫度則越低。


圖文展示3:熱探針去除熱敏膠后產(chǎn)生的納米結(jié)構(gòu)的應(yīng)用總覽。

熱探針去除熱敏膠后產(chǎn)生的納米結(jié)構(gòu)的應(yīng)用總覽。a. 2D或3D結(jié)構(gòu)可以直接用作生物兼容的模板進(jìn)行細(xì)胞生長59或用于傳輸和捕獲納米顆粒。納米顆粒完成組裝后,可以通過加熱55去除PPA膠。b直接用PPA膠中的納米結(jié)構(gòu)作為母版模制各種柔軟的透明聚合物,或者電鍍金屬作為摸具31,60。c直接使用PPA中的納米結(jié)構(gòu)作為蝕刻掩??梢詫?D和3D納米結(jié)構(gòu)通過蝕刻轉(zhuǎn)移(濕法或干法蝕刻)到各種材料中去。d使用熱敏膠下面的另一層掩模版可以放大Z終蝕刻的深度以及轉(zhuǎn)移3D納米結(jié)構(gòu)。e在熱敏膠下面使用另一層有機(jī)材料可在濕化學(xué)中有選擇地去除從而產(chǎn)生底切便于剝離。f熱敏膠下面的功能層可以在熱敏膠被熱探針去除時被熱探針熱激活或在后續(xù)氧等離子體操作步驟中激活。g由熱敏膠,無機(jī)硬掩模薄層和有機(jī)膠組成的三層堆疊轉(zhuǎn)移層適用于高深寬比和高分辨率蝕刻。h三層堆疊轉(zhuǎn)移層適用于高分辨率納米結(jié)構(gòu)剝離7。(注:數(shù)字為參考文獻(xiàn)序號)

使用熱探針在熱敏膠內(nèi)產(chǎn)生的2D和3D的納米結(jié)構(gòu)可以通過多種方式進(jìn)行圖形轉(zhuǎn)移或者直接作為納米器件使用。熱敏膠中的3D結(jié)構(gòu)可直接用于干細(xì)胞生長的3D模板。也可以作為納米壓印的模板。大多數(shù)情況下,熱敏膠中的納米結(jié)構(gòu)通過常規(guī)的剝離或者刻蝕方法轉(zhuǎn)移到金屬或者其他基片材料中去。用離子反應(yīng)刻蝕可以直接使用熱敏膠作為模板將3D結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到基片材料比如硅材料中?;蛘呤褂?層或者3層的膠層堆疊, 2層堆疊類似常用的濕法剝離制備金屬納米結(jié)構(gòu)。3層堆疊多用于高深寬比和高分辨率納米結(jié)構(gòu)。使用不同的犧牲層材料可以提高刻蝕轉(zhuǎn)移或者剝離后納米結(jié)構(gòu)的深度。當(dāng)犧牲層為功能性材料時,熱探針可以局部激活功能性材料產(chǎn)生功能材料的納米結(jié)構(gòu)。


圖文展示4:使用t-SPL去除材料所實現(xiàn)的納米結(jié)構(gòu)應(yīng)用示例。

a. 直接由熱探針寫入PPA膠層中的3D納米流體振動布朗馬達(dá)納米顆粒篩選軌道。經(jīng)參考文獻(xiàn)作者許可轉(zhuǎn)載56(原文參考文獻(xiàn)號,下同),AAAS。b上圖:PPA中的32級3D全息圖結(jié)構(gòu),下圖:300 nm波幅正弦波結(jié)構(gòu)用于紫外光納米壓印的母版。經(jīng)考文獻(xiàn)作者許可轉(zhuǎn)載31。c 熱探針寫入PPA中的高斯形光學(xué)微腔以及隨后刻蝕轉(zhuǎn)移形成布拉格鏡作為光學(xué)分子。根據(jù)參考文獻(xiàn)CC BY 4.0許可改編54,版權(quán)所有2017 Springer Nature。d將熱探針在PPA膠中形成的納米圓錐形結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移入硅材料形成原子尺度的存儲器。根據(jù)參考文獻(xiàn)CC BY 4.0許可改編。65,版權(quán)2019 Springer Nature。e單層MoS2頂柵晶體管,具有創(chuàng)紀(jì)錄的低接觸電阻和高開/關(guān)比。經(jīng)許可轉(zhuǎn)載自參考文獻(xiàn)68,版權(quán)2019 Springer Nature。f選擇性去除PPA以暴露下層功能材料來研究納米顆粒組裝過程。經(jīng)參考文獻(xiàn)作者許可轉(zhuǎn)載72,版權(quán)所有2018 ACS。g左:蝕刻到Si中的14 nm半線寬線條圖案。轉(zhuǎn)載自參考文獻(xiàn)29,版權(quán)所有2017 ACS。右:t-SPL寫入由Al2O3注入處理的PPA膠內(nèi)并轉(zhuǎn)移到硅材料的鰭(場效應(yīng)管)的TEM圖像。改編自參考文獻(xiàn)75,版權(quán)所有2018 ACS。h t-SPL刻寫制備的InAs納米線晶體管金屬頂部柵電極。經(jīng)參考文獻(xiàn)作者許可轉(zhuǎn)載76,77,版權(quán)所有2019 IEEE。i將t-SPL與激光直寫聯(lián)用制備的基于硅材料的室溫單電子晶體管。經(jīng)參考文獻(xiàn)許可轉(zhuǎn)載43,版權(quán)2018 IOP Publishing。

t-SPL制備的3D納米結(jié)構(gòu)為物理實驗提供了新的手段和方法。創(chuàng)新獨特的納流控布朗馬達(dá)可以對直徑相差1納米的納米顆粒進(jìn)行分離捕獲。jing準(zhǔn)的無標(biāo)記套刻和3D刻寫使得原子尺度的存儲器成為可能?;?D光學(xué)微腔的布拉格透鏡大大提高了器件的質(zhì)量系數(shù)。MoS2晶體管得益于t-SPL清潔無損傷的刻寫過程,將電極和2D材料的接觸電阻降低2個數(shù)量級并檢測到肖特基勢壘為零。t-SPL制備的納米管器件的頂柵電極解決了電極和納米管絕緣層的充電問題。使用Al2O3注入處理的PPA將用于解決半導(dǎo)體行業(yè)使用超薄掩模版轉(zhuǎn)移細(xì)小納米結(jié)構(gòu)到硅材料的難題。t-SPL與激光直寫聯(lián)用將提高整體的刻寫速度,簡化有高和低分辨率的納米器件的制備過程。


圖文展示5:熱探針進(jìn)行材料屬性轉(zhuǎn)換工作原理。

a 對功能性表面基團(tuán)的脫保護(hù)作用32,33,78–82,84,85。b 將前體材料轉(zhuǎn)換為功能材料42,45,86–92,94,95。c 通過短暫加熱和快速淬火來實現(xiàn)非晶化以獲得無序相96,97。d 局部非晶態(tài)材料的結(jié)晶21,98–102。e磁偶極通過熱輔助局部對準(zhǔn)104-107

使用熱探針可以通過接觸加熱樣品表面對樣品材料進(jìn)行局部改變其物理和化學(xué)屬性。比如改變原子排序局部晶化非晶體材料或者非晶化晶體材料。在前體材料中引入熱來產(chǎn)生物理或者化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生物質(zhì)新的物理化學(xué)特性。熱能也可以打斷分子鏈對功能性表面產(chǎn)生脫保護(hù)作用。用熱探針局部加熱的同時改變外加磁場的方向來翻轉(zhuǎn)磁偶極子的導(dǎo)向,在磁性薄膜材料中規(guī)劃出不同的磁疇區(qū)域。凡是對熱敏感的材料都可以用熱探針進(jìn)行局部變性在樣品上制備屬性不同的納米結(jié)構(gòu)。納米結(jié)構(gòu)的分辨率可以接近探針針尖的尺寸。在這個領(lǐng)域還有很多可以探討的實驗和材料。


圖文展示6:熱探針進(jìn)行材料屬性轉(zhuǎn)換應(yīng)用實例。

a 用熱探針對THP封端的功能性胺基進(jìn)行脫保護(hù)來實現(xiàn)樣品表面納米尺度的化學(xué)梯度。改編自參考文獻(xiàn)33,版權(quán)所有2013 ACS。b用熱探針熱脫保氨基后再組裝蛋白質(zhì)分子來實現(xiàn)樣品表面蛋白質(zhì)密度梯度。轉(zhuǎn)載自參考文獻(xiàn)82,版權(quán)所有2016 IOP Publishing。c用熱探針對氧化石墨烯的表面進(jìn)行化學(xué)改性來研究材料在納米尺度的反應(yīng)機(jī)理。改編自參考文獻(xiàn)45,版權(quán)所有2017 ACS。d用熱探針激發(fā)前體材料制備并五苯納米線。經(jīng)參考文獻(xiàn)轉(zhuǎn)載92,2013年,John Wiley&Sons版權(quán)所有。e用熱探針對熱致變色超分子聚合物進(jìn)行熱淬火來降解準(zhǔn)分子部分以獲取樣品內(nèi)的不同熒光特性。經(jīng)參考文獻(xiàn)的許可轉(zhuǎn)載96,版權(quán)所有2017 ACS。f用熱探針對GeTe相變材料進(jìn)行局部結(jié)晶以產(chǎn)生導(dǎo)電納米結(jié)構(gòu)。經(jīng)參考文獻(xiàn)許可重新發(fā)布98,版權(quán)所有2017 RSC Pub。g用熱探針結(jié)晶熱解非晶體凝膠前體直接刻寫鐵電PZT納米結(jié)構(gòu)。經(jīng)參考文獻(xiàn)許可轉(zhuǎn)載99,版權(quán)所有2011 John Wiley&Sons。h用熱探針對CoFe2O2薄膜的局部結(jié)晶形成納米尺度的磁渦旋。經(jīng)參考文獻(xiàn)許可轉(zhuǎn)載。101,版權(quán)所有2018 Elsevier。i在外加磁場下重新定向t-SPL加熱區(qū)域可以重構(gòu)磁性納米結(jié)構(gòu)來制備自旋波電路。根據(jù)參考文獻(xiàn)CC BY 4.0許可改編106

用t-SPL對樣品表面材料改性有著非常廣泛的應(yīng)用前景。用熱探針打斷,脫保樣品分子的末端基團(tuán),隨后根據(jù)需要組裝其他功能性分子以局部改變樣品表面的化學(xué)物理特性。被改變的區(qū)域可以用做熒光標(biāo)識或者捕獲其他分子的傳感器。通過多次重復(fù)制備過程,可以集裝不同傳感器類型在同一個樣品上。用探針直接刻寫納米管或者鐵電材料,導(dǎo)電材料,磁性材料的納米結(jié)構(gòu)將大大簡化各類納米器件的制備過程。用熱探針對晶體和非晶體材料的互相轉(zhuǎn)換,可以開發(fā)新型防偽技術(shù)等。熱探針在外加磁場的輔助下規(guī)劃磁性薄膜內(nèi)磁疇的形狀和導(dǎo)向來制備磁自旋波電路。比如產(chǎn)生和控制渦流/反渦流對和Bloch線來引導(dǎo)自旋波。將材料在無外加磁場時加熱到160度可以刪除磁疇結(jié)構(gòu)。


圖文展示7:用熱探針在樣品表面沉積材料后的相關(guān)納米加工過程概述。

a 直接沉積被熱探針融化的材料108,111–116,127或載體基質(zhì)(例如含納米顆粒的聚合物),載體可以在沉積后去除117。b直接將干法蝕刻的抗蝕劑沉積到基底材料上118,121。c沉積的結(jié)構(gòu)可用作模制的母盤118。d直接沉積納米結(jié)構(gòu)作為蝕刻掩模用于無溶劑圖形轉(zhuǎn)移工藝119,120。e沉積保護(hù)性掩膜結(jié)構(gòu)來選擇性地對低維材料進(jìn)行局部功能化110。f沉積納米結(jié)構(gòu)作為干法刻蝕下層材料的掩膜,隨后去除更下層犧牲層材料來形成架空的納米結(jié)構(gòu)122

用熱探針在樣品表面沉積材料可以大大簡化納米器件的制備過程。材料可以沉積在任何基片上不需要使用任何溶劑。除了有機(jī)物以外低熔點的金屬也可以用熱探針沉積在樣品上,對沉積任意形狀的液體金屬納米結(jié)構(gòu)非常有用。利用熱探針可以直接沉積保護(hù)性或者功能性納米結(jié)構(gòu)模板用于后續(xù)的刻蝕圖形轉(zhuǎn)移過程。在樣品表面沉積保護(hù)性模板可以選擇性地保護(hù)樣品區(qū)域不受后續(xù)實驗步驟的影響以保持材料原有屬性。類似t-SPL去除熱敏膠后形成的納米結(jié)構(gòu),用熱探針沉積產(chǎn)生的納米結(jié)構(gòu)也可以用做納米壓印等的摸具母版。利用多層堆疊膠層可以使用t-SPL來制備架空納米結(jié)構(gòu)。


圖文展示8:用熱探針沉積材料制成的納米結(jié)構(gòu)的示例。

a 用預(yù)加載的探針通過熱輔助沉積PDDT納米結(jié)構(gòu),沉積厚度通過探針?biāo)俣瓤刂?。根?jù)CC BY 2.0參考文獻(xiàn)許可轉(zhuǎn)載113。b用熱探針沉積熔融的銦。經(jīng)參考文獻(xiàn)許可轉(zhuǎn)載116,版權(quán)所有2006 AIP出版。c用熱探針沉積含納米顆粒的聚合物,隨后用氧等離子體處理去除聚合物基質(zhì)僅留下納米顆粒在樣品表面。改編參考文獻(xiàn)117,版權(quán)所有2010 ACS。d直接沉積PMMA納米結(jié)構(gòu)作為XeF2等離子體蝕刻的掩模用于刻蝕MoS2樣品。改編自參考文獻(xiàn)120,Copyright 2019 ACS。e沉積PS作為Bosch蝕刻的蝕刻掩模以及后續(xù)的金屬輔助蝕刻。經(jīng)參考文獻(xiàn)許可轉(zhuǎn)載121,2013年AVS版權(quán)所有。f直接沉積PS蝕刻掩模隨后進(jìn)行干法蝕刻和隨后的濕法蝕刻在SOI基底上形成架空的納米結(jié)構(gòu)。經(jīng)參考文獻(xiàn)許可轉(zhuǎn)載122,版權(quán)所有IOP 2014出版

用熱探針沉積不同的材料在樣品表面形成納米結(jié)構(gòu)在實驗室中已有很多嘗試。加熱探針使得預(yù)先附著在探針上的固態(tài)材料融化沉積在表面并通過速度來控制納米結(jié)構(gòu)的橫向尺度。后續(xù)可以直接使用沉積的納米結(jié)構(gòu)作為刻蝕的掩膜制備金屬或者2D材料的器件。2D材料器件還將受益于材料無充電損傷和無殘留光刻膠污染樣品的優(yōu)點。納米顆粒可以融入液態(tài)聚合物通過熱探針沉積在樣品上,隨后通過氧等離子體處理去除聚合物留下納米顆粒散布在樣品表面。使用多層有機(jī)材料堆疊制備任意形狀的架空納米結(jié)構(gòu)非常有新意。這類實驗的關(guān)鍵是更好地控制熔融材料由探針沉積在樣品表面的流速和流量,通過特殊的探針的設(shè)計有望改善對流速流量的控制。


原文摘要

Fundamental aspects and state-of-the-art results of thermal scanning probe lithography (t-SPL) are reviewed here. t-SPL is an emerging direct-write nanolithography method with many unique properties which enable original or improved nano-patterning in application fields ranging from quantum technologies to material science. In particular, ultrafast and highly localized thermal processing of surfaces can be achieved through the sharp heated tip in t-SPL to generate high-resolution patterns. We investigate t-SPL as a means of generating three types of material interaction: removal, conversion, and addition. Each of these categories is illustrated with process parameters and application examples, as well as their respective opportunities and challenges. Our intention is to provide a knowledge base of t-SPL capabilities and current limitations and to guide nanoengineers to the best-fitting approach of t-SPL for their challenges in nanofabrication or material science. Many potential applications of nanoscale modifications with thermal probes still wait to be explored, in particular when one can utilize the inherently ultrahigh heating and cooling rates.

作者單位簡介

Prof. Juergen Brugger (corresponding author)

Email: juergen.brugger@epfl.ch

MicrosystemsLaboratory, école Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) , Switzerland

Juergen Bruggeris Professor of Microengineering and co-affiliated to Materials Science. Beforejoining EPFL he was at the MESA Research Institute of Nanotechnology at theUniversity of Twente in the Netherlands, at the IBM Zurich Research Laboratory,and at the Hitachi Central Research Laboratory, in Tokyo, Japan. He receivedhis Master in Physical-Electronics and his PhD degree from NeuchatelUniversity, Switzerland.

Research in Juergen Brugger’s laboratory focuses on various aspects of MEMS and Nanotechnology. The group has made several important contributions to thefield, at the fundamental level as well as in technological development, asdemonstrated by the start-ups that spun off from the lab. In his research, keycompetences are in micro/nanofabrication, additive micro-manufacturing, newmaterials for MEMS, increasingly for biomedical applications. He published over 200 peer-refereed papers and supervised 20 PhD students. Juergen Brugger hasbeen appointed in 2016 Fellow of the IEEE “For contributions to micro and nanomanufacturing technology”. In 2017 he was awarded an ERC AdvG in the field ofadvanced micro-manufacturing.


Dr. Samuel Howell (first author)

Email: samuel.howell@epfl.ch

MicrosystemsLaboratory, école Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) , Switzerland 

Our laboratory’s research and education arecentered around Microsystems (MEMS), Materials Science, and Nanotechnology toaddress engineering challenges at the mesoscopic scale. We are alsoinvestigating innovative detection methods and microdevices for nuclearmagnetic resonance (NMR), electron spin resonance (ESR), ferromagneticresonance (FMR) spectroscopy and imaging on small samples.

Samuel Howell is a Postdoctoral Researcher atEPFL. During his postdoctoral work, he co-authored an extensive review paperabout thermal scanning probe lithography (t-SPL). His main research focusduring his PhD at EPFL was t-SPL and nanoscale thermometry. With a materialsscience background, he was focusing on phase changes in organic materialsthrough rapid heating and cooling of nanoscopic volumes by t-SPL. Samuel hasbeen a visiting researcher at the Institute of Industrial Sciences in Tokyo,Japan. He obtained his Master’s degree in Materials Science at ETH Zurich.

Dr. Felix Holzner (co-author)

Email: felix.holzner@himt.ch

HeidelbergInstruments Nano -SwissLitho AG, Zürich,Switzerland

Heidelberg Instrument Nano/SwissLitho is a young andinnovative high-tech company with an expertise in Scanning Thermal ProbeLithography (STPL), a technology realized with their NanoFrazor systems. In2018, SwissLitho Joined Heidelberg Instruments and together, Heidelberg Instrumentsand SwissLitho are now able to provide customers with an additional choice oftools and options in the Nano-and Microlithography field. In the NanoFrazor,heatable silicon tips are used for direct patterning of arbitrary 2D and 3Dnanostructures and for simultaneous imaging of the tiny resultingnanostructures.

Felix Holzner is a physicist by training with universitydegrees from Germany and New Zealand and a PhD from ETH Zurich .He worked onthe NanoFrazor technology at IBM Research Zurich for three years, before heinitiated and advanced its commercialization with the incorporation ofSwissLitho AG in 2012. Felix Holzner received numerous awards and is a frequentinvited speaker at scientific and technology conferences. In 2018, SwissLithoAG joined forces with Heidelberg Instruments in order to become the world-leadingprovider of innovative direct-write lithography solutions.

Felix leads Heidelberg Instruments Nano as CEO.

Dr. Anny Grushina (co-author)

Email: anya.grushina@himt.ch

HeidelbergInstruments Nano - SwissLitho AG, Zürich, Switzerland

HeidelbergInstrument Nano/SwissLitho is a young and innovative high-tech company with anexpertise in Scanning Thermal Probe Lithography (STPL), a technology realizedwith their NanoFrazor systems. In 2018, SwissLitho Joined HeidelbergInstruments and together, Heidelberg Instruments and SwissLitho are now able toprovide customers with an additional choice of tools and options in the Nano-and Microlithography field. In the NanoFrazor, heatable silicon tips are usedfor direct patterning of arbitrary 2D and 3D nanostructures and for simultaneousimaging of the tiny resulting nanostructures.

Anya Grushina holds a B.Sc in AppliedPhysics and Mathematics from the South Ural State University in Russia and aM.Sc in Nanobiophysics from the Dresden University of Technology, Germany. In2015, she received a PhD in Physics from the University of Geneva where sheworked on quantum electronics and graphene physics in the group of Prof.Morpurgo. Anya was working as an application engineer for FemtoTools before shejoined Heidelberg Instruments Nano in 2018.

At Heidelberg Instruments, Anya Grushina ispart of the sales and marketing team and is responsible to make the uniquecapabilities of our product portfolio known to a broad community. She is alsothe editor-in-chief of the newly launched magazine “The Lithographer”.

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