蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能需要在合適的pH值環(huán)境中才能維持，因此在蛋白的制備及純化過程中，生物緩沖液的選擇非常重要，只有合適的緩沖液才能保證蛋白的活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

蛋白純化過程緩沖液作用

用于蛋白純化的緩沖劑有很多種，在維持體系的pH同時，要保證蛋白在純化過程中不能失活，或者是盡量減少蛋白失活的量，在蛋白純化的每一個步驟中都要保持蛋白的可溶性和活性。

蛋白純化緩沖液要求

蛋白純化過程中的緩沖液既要防止蛋白降解，也要防止蛋白聚合，其對實驗結(jié)果影響顯著。在選擇和試劑緩沖液時應(yīng)考慮以下幾個因素：pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個因素都要根據(jù)所純化的目標(biāo)蛋白進行優(yōu)化，并以目標(biāo)蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標(biāo)準(zhǔn)。

了解蛋白穩(wěn)定性條件

蛋白的種類很多，不同的蛋白適應(yīng)的pH值有差異，需根據(jù)其最適pH值來選擇緩沖液。很多時候采用的是pH是7.4，這是模仿的生物條件，大多數(shù)蛋白在這個pH值下是穩(wěn)定的。不過也有一些是例外的，這就需要調(diào)整pH值，以保持蛋白是可溶的且不會降解。

蛋白純化常用的緩沖劑

蛋白純化過程中常用的緩沖液有Tris、Tricine、Bis-Tris、MOPS等，其中普遍的是用Tris，它的緩沖范圍接近生理pH值，且有著較低的離子強度，是蛋白質(zhì)的良好溶劑，能保證蛋白的穩(wěn)定性。需注意的是配制緩沖液時，盡量避開目標(biāo)蛋白的等電點pl。因為蛋白在其等電點的pH溶液中表面沒有靜電荷，帶百分子間排斥力減小，容易聚集，溶解度降低。

現(xiàn)在需純化的蛋白的適應(yīng)pH值、等電點、以及緩沖液的緩沖范圍都是可以查到的，直接按對應(yīng)要求匹配即可。德晟是體外診斷試劑生產(chǎn)型企業(yè)，可提供大包裝的生物緩沖劑Tris、MOPS、Bicine等。

HEPES中文名：羥乙基哌嗪乙磺酸 分了式：C8H18N2O4S。HEPES 它是一種兩性離子有機化學(xué)緩沖劑，對細胞無毒性作用，同時它也是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的PH值范圍，在PH值為7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。

HEPES的使用方法有兩種:

1、按照所需濃度直接加入到配置的培養(yǎng)溶液中，過濾除jun，每1000毫升培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，溶解后用1N NaOH調(diào) PH至7.2，過濾除jun后可使用。此時 HEPES的使用濃度為10mmol/L。  

2、配成100x貯存液(1mol/L)，取23.8gHEPES溶于90ml的雙蒸水中，用1NNaOH調(diào)PH至7.5-8.0，然后用水定容至100ml,過濾除jun分小瓶裝，4攝氏度至20攝氏度保存。使用前取99ml培養(yǎng)液加入1ml貯存液終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。

HEPES是一種兩性緩沖液，溶于水，不與金屬離子形成穩(wěn)定的配合物，其在pH7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。多數(shù)情況下，不會干擾生物化學(xué)過程，可廣泛應(yīng)用于多種生物化學(xué)反應(yīng)：

1、HEPES常用于各種類型生物體的細胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑，細胞-細胞黏附，細胞短期聚集培養(yǎng)，清洗組織、細胞所用緩沖液；

2、在蛋白質(zhì)研究中，PIPES常用作陽離子交換色譜法中結(jié)合緩沖液的組分和洗脫習(xí)液； 

3、在DNA研究中，PIPES用作磷酸鈣和 DNA沉淀物形成體系的綏沖滴 AFM以及電穿孔實驗中的緩沖液。

德晟生化是一家專業(yè)生產(chǎn)生物緩沖劑的廠家，產(chǎn)品種類很多。2005年成立至今已經(jīng)有十幾年的研發(fā)生產(chǎn)經(jīng)驗，德晟所生產(chǎn)的HEPES緩沖劑，純度高、適用范圍廣。如有需要歡迎與我們?nèi)〉寐?lián)系！