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DNA復(fù)制時,為什么要連接酶

上不上班888 2015-12-22 15:27:41 1185  瀏覽
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全部評論(2條)

  • jy827981568 2015-12-23 00:00:00
    DNA的復(fù)制是半不連續(xù)復(fù)制,一條前導(dǎo)鏈?zhǔn)沁B續(xù)合成的,而另一條滯后鏈?zhǔn)窍群铣刹贿B續(xù)的若干岡崎片段,再由鏈接酶將其連接在一起合成一條完整鏈。

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  • CH68453622 2017-12-15 12:53:28
    DNA的復(fù)制事實上是半不連續(xù)復(fù)制 即只有一條鏈的合成是連續(xù)的 這聽起來很神奇 但確實是這樣 連續(xù)合成的鏈叫做前導(dǎo)鏈 另一條鏈稱為后隨鏈 它的合成是不連續(xù)的 以它為模板的合成 需要一段一段地進(jìn)行 所合成的片段叫做岡崎片段 產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的兩條鏈又是反向分布的 所以就造成了只有一條鏈合成可以連續(xù)地進(jìn)行下去(以它為模板的子鏈生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后隨鏈要盤繞成回環(huán) 反扭過來 才能合成 再合成起始的時候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中這一引物是由dnaQ(一種酶)在已解旋的單鏈5'端合成,真核生物中也有對應(yīng)的酶 由于后隨鏈的合成不連續(xù) 所以每個片段都要有引物 在DNA合成結(jié)束的時候 這些引物要被切除 因而留下缺口 這時又要特定的酶去填補(bǔ)缺口(比如 大腸桿菌中的DNA聚合酶I)可是填補(bǔ)序列和周圍序列間會有缺刻 也就是說他們交界處的3'-5'磷酸二脂鍵是斷開的 這時需要DNA連接酶發(fā)揮作用 將其連好 所以 后隨鏈上的缺刻多 還真夠DNA連接酶忙一陣的 前導(dǎo)鏈上只有一開始有RNA引物 因此 Z后也基本只有這個地方會用到連接酶

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我們使用STED超高分辨率顯微鏡進(jìn)行測量,INO80和R環(huán)之間具有前所未有的精密共定位。


標(biāo)題圖像:INO80(藍(lán)色)和R環(huán)(黃色)的3D體表面模型


在我們的實驗中,相比共聚焦成像(250?nm),STED能達(dá)到大約50?nm的分辨率,這使我們能夠有較高的確定性區(qū)分真假共定位事件。使用STED可以輕松觀察到INO80亞基和R環(huán)亞基之間的共定位,而通過共聚焦成像觀察到的INO80和R環(huán)之間的多個共定位事件,經(jīng)STED觀察是分離的不同亞基。


在所有分析的細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)相比非共定位R環(huán),INO80共定位的R環(huán)明顯更加緊密、體積和長度也更大。這些數(shù)據(jù)表明,INO80復(fù)合物與細(xì)胞核中最 大、最濃縮的R環(huán)域相關(guān)。



圖1:STED解析INO80和R環(huán)的相對位置。


閱讀完整文章:

Prendergast L., McClurg U.L., Hristova R., Berlinguer-Palmini R., Greener S., Veitch K., Hernandez I., Pasero P., Rico D., Higgins J.M.G., Gospodinov A. & Papamichos-Chronakis M.:

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Nature Communications volume 11, Article number: 4534 (2020)

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