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- 王者大漢上卿 2014-12-11 00:00:00
- 我是一枚,確切的說是一枚空對空用途的格斗。我的個頭,或者說長度大概兩米多接近三米,腰圍大約有十幾厘米粗,我的樣子本來很普通,但和家族中其他兄弟姐妹比起來,我還是很“小巧玲瓏”的。我的上半身由“制導艙”和“引信艙”組成;下半身是由“戰(zhàn)斗部”和“發(fā)動機”組成。 制導艙是我的眼睛所在部位,而我的眼睛就是紅外探測器,它也是我Z重要Z敏感的地方,對紅外線有強烈反應。 聽人家說,在我之前出世的幾位大哥大姐,他們的眼睛是用一種叫做硫化鉛的材料制造的、也有采用熱敏電阻器件的,不過后來人們在使用中發(fā)現(xiàn),這些材料或者器件制造的紅外線探測器反應比較遲鈍,而且它們工作的時候因為容易受外界影響而“走神”,指揮它們在空中運動的時候經(jīng)常丟失目標,或者目標一玩花樣就跟不上了,于是人們沒多久就讓他們退休了。 后來我?guī)讉€二哥二姐等出世接替了大哥大姐們的工作,他們的眼睛是用銻化銦、鍺摻汞或者碲鎘汞紅外探測器制造的,比起大哥大姐,它們的反應可要迅速多了,而且工作的時候也沒以前那么容易受外界影響,所以它們也受人歡迎得多。它們的工齡也是我們這家子當中比較長的。 隨著科技的進步,漸漸的,二哥二姐們工作起來也有點力不從心了---工作的時候,人為的“影響”干擾越來越嚴重了,而人們又對我們這家子提出了更高的要求,于是我這一代出世了。 我的眼睛紅外焦平面列陣紅外探測器。怎么說呢,我的哥哥姐姐們的眼睛都只有一只,我的眼睛看起來也是一只,但實際上有很多只。說不好聽點,有點象蒼蠅的眼睛---復眼,也就是同時排列了多個單個的紅外探測器組成陣面。 當然,不管是我的眼睛還是我的哥哥姐姐們的眼睛,作為紅外探測器這一基礎部件的工作原理都是一樣的, 它就是一個能夠把入射的微弱紅外光轉(zhuǎn)換為電子線路可以測量的電信號的光電轉(zhuǎn)換器件。知道太陽能電池吧?我的眼睛和它有一點點相似---只不過它是感受可見光,我是感受紅外線。 我們的眼睛通常工作在一個特定的紅外波長范圍內(nèi),不同的材料制造的紅外探測器件的工作場合是不同的,比如說 近紅外(0.7~1.1μm)是硅光電二極管 (Si)的工作范圍,短波紅外(1~3 μm)是銦鎵砷(InGaAs)、硫化鉛探測器(PbS)的工作范圍,中波紅外(3~5 μm)是銻化銦(InSb)、碲鎘汞探測器(HgCdTe)的工作范圍,長波紅外、熱紅外(8~14 μm)是碲鎘汞探測器(HgCdTe)的工作范圍...... 不過,這一類基于光電物理學原理的紅外探測器,尤其是中、長波紅外探測器,通常要求工作于深低溫,所以一般要采用制冷機或者液氮將他們的工作溫度降到零下190℃左右,這給一般應用增加了一些麻煩。所以采用這種部件作為眼睛的兄弟姐妹的眼睛有時侯實際工作時間并不長,而且維護保養(yǎng)也挺考人的。但這類光電探測器因為響應速度快[通常是微秒或者納秒級別]又是一般探測器件做不到的,這也算人無完人吧? 前邊說過我的哥哥姐姐們都只有一只眼睛,我的一只眼睛實際上是很多只,比如我是128單元的,所以呢,以往我的哥哥姐姐們所看到的只是一個點的目標信號,在我看來能夠分辨出是飛機,還是氣球,或者是什么其他東西,甚至能夠分清楚是飛機的尾巴,還是飛機的腦袋。 不過我這個128單元探測器件比起我的表哥---2048*2048單元的紅外面陣器件,簡直就是小巫見大巫了,因為我表哥看東西幾乎就是象看照片那么清楚! 我的眼睛后邊是大腦神經(jīng)---引信艙。 我用的是無線電近炸引信,當我飛到目標附近的時候,根據(jù)引信獲得的目標信號適時引爆戰(zhàn)斗部,來殺傷目標。 不過我的大腦也是可以更換的,無線電干擾嚴重的時候,我可以換上激光近炸引信,不過這個可是細活,得專業(yè)人員在專業(yè)車間里邊才能做,我的孿生兄弟它的大腦神經(jīng)就是激光引信。 引信艙后邊就是我的戰(zhàn)斗部,這部分可別小看,我的哥哥姐姐們有的是Z普通的破片戰(zhàn)斗部,利用爆炸后的破片摧毀目標。Z老的幾位甚至有的是爆破戰(zhàn)斗部,利用爆炸形成的沖擊波來摧毀目標。有的是離散桿戰(zhàn)斗部,采用了聚焦定向能技術使離散桿戰(zhàn)斗部的離散桿均勻形成環(huán)狀破片散布。我的是連續(xù)桿戰(zhàn)斗部---爆炸開后環(huán)狀破片象鋸子一樣將目標的結(jié)構(gòu)“鋸”斷。 戰(zhàn)斗部破片由原始的戰(zhàn)斗部外殼體破裂件到預制破片,再到桿狀破片等,也發(fā)展了好幾代,一代比一代厲害。 戰(zhàn)斗部后邊是我的發(fā)動機艙,我的發(fā)動機單獨看,就好比是一枚無制導,除了能飛,啥都不能。 不過這也不能隨便就忽略呀,這發(fā)動機也是很有講究的,比如殼體制造,推進劑澆鑄等等都是技術活兒。 我的整體結(jié)構(gòu),就是配合了大腦等器官的聰明的“火箭”,所以發(fā)動機制造技術也從很大程度上影響了我的外形結(jié)構(gòu)。 人們把我的結(jié)構(gòu)設計成表面光滑的流線形箭體外殼,使我首先具有良好的空氣動力外形和飛行性能。我和我的兄弟姐妹們的結(jié)構(gòu)主要有硬殼式結(jié)構(gòu)、半硬殼式結(jié)構(gòu)、整體壁板結(jié)構(gòu)和夾層結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)設計方法主要有可靠性設計、優(yōu)化設計等。現(xiàn)在的人們都用結(jié)構(gòu)優(yōu)化設計法、結(jié)構(gòu)可靠性設計法和計算機輔助設計法(CAD)等來設計我們家族成員們的結(jié)構(gòu)。 我的內(nèi)臟介紹完了,也說到了結(jié)構(gòu),那就該看看我外表究竟如何了。 我的腦袋附近長了四個“小翅膀”,也就是鴨式翼,這個是受眼睛大腦綜合控制的活動翼面,我的鴨式翼為三角形,對稱分布在我身體軸線四個方向上,位置比較靠前。我的兄弟姐妹中有的鴨式翼是雙三角的,有的一個翼面就是兩個翼組成,有的甚至沒有---比如說我的一個小弟弟AIM132。鴨翼后邊是我光滑的外殼,通常是圓柱形,我有幾個兄弟在身體外殼上還有幾片細長對稱分布的翼面,這種翼面除了提供空氣動力學方面的操縱之外,還可以加強身體結(jié)構(gòu)強度。再看下去,就是我的尾巴了,我的尾巴附近也以軸線對稱長了四個大一些的翼面,不過這個是固定的,我的兄弟姐妹們的也通常是這樣,除了象TY90這幾個小家伙[它的尾翼是可以繞軸心旋轉(zhuǎn)的],這個翼面的作用是讓我在飛行的時候確保前進轉(zhuǎn)彎并與鴨翼一起提供升力,確保我飛行時不會發(fā)生腳前頭后的倒載蔥的情形。 另外我的殼體上還有幾個插孔一樣的東西,那是用來接駁搭載我的平臺的各種電路線路和掛勾的。 從我被設計到被制造出來,經(jīng)歷了數(shù)年也許數(shù)十年的光陰,現(xiàn)在我正躺在一個裝了空調(diào)的地下室,戴著我那頂特殊的帽子在一個高級的箱子里享受著和平的安寧。 不過我知道我是兵器的一種,我的使命是去廝殺,是去盯住制造我使用我的人們讓我盯住的目標并摧毀它,哪怕自身也同時灰飛煙滅也在所不惜。 據(jù)說那是一枚空空Z好的歸宿,但我無法分辨。 我也不知道什么時候人們會來給我身上插滿奇怪的儀器給我做體檢,然后將我推到機場,掛到排列在那里的眾多飛機中的某一架的翼下,也許人們還會在我的身上寫上奇怪的語言文字,也許那個飛行員起飛前會來表示一下人類的親熱---比如說扭扭我的小翅膀,拍拍我的屁股,或者什么其他... 也許我跟著飛機上天后什么也不做,只是旅游一般逛一圈就回來,也許會再被送進這個空調(diào)室內(nèi);也許,也許就再也回不來了。 不過不管怎么樣,從我被飛行員從彈射軌上發(fā)射出去的那一瞬間起,所有的一切都將化為一個短暫的永恒。
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大家好!首先跟大家做一個自我介紹:
我是擴增曲線,來自熒光定量PCR,是用于描述qPCR動態(tài)進程的曲線,我有兩種形態(tài),一種是線性圖譜:橫坐標是循環(huán)數(shù),縱坐標是熒光強度值;另一種是對數(shù)圖譜:橫坐標是循環(huán)數(shù),縱坐標是熒光強度值的對數(shù)。大家根據(jù)我來確定Cq值,最終確定初始模板的含量。新冠疫情以來,我可是發(fā)揮了重要的作用,診斷技術的金標準,驕傲的很呢。
在引物、模板、緩沖液、酶等都充足的理想狀態(tài)下,PCR擴增產(chǎn)物理論上是呈2的倍數(shù)增長的,所以我應該是長這個樣子的:
▲ 圖1. 理論的擴增曲線線性圖譜
但是呢,理想很美好,現(xiàn)實卻很骨感,隨著PCR循環(huán)數(shù)的增加,DNA聚合酶的失活、dNTP和引物的枯竭等諸多因素影響了PCR擴增效率,實際的我是長這樣的:
▲ 圖2. 實際的擴增曲線線性圖譜
不過S型的曲線,曼妙的身材,我還是很滿意的。
大家也根據(jù)我將PCR進程分為4個時期,分別為基線期,指數(shù)增長期,線性增長期和平臺期。我的特征還是很明顯的:基線期平整;指數(shù)期起峰,陡度較大;線性期慢慢趨于平整;平臺期基本平整。
▲ 圖3. 擴增曲線的各個時期
如果大家在每次實驗中都能遇到如此美麗的我,那就是“你好我好大家好”的歡快場景了。但是在實驗過程中,大家可能會看到各種奇形怪狀的我,分析不出原因,導致實驗止步不前,因此茶飯不思,郁郁寡歡。
其實主要還是大家對我不太了解。我,作為大家的科研小助手,單純善良,心思簡單,沒有那么多套路的。之所以出現(xiàn)奇奇怪怪的我,都是有原因的。接下來可都是滿滿的干貨吆!筆記要做起來了吆!
一. 沒有Cq值出現(xiàn)
1. 反應循環(huán)數(shù)不夠:一般設定在35個循環(huán)以上,也可根據(jù)實驗情況增加循環(huán)數(shù)。
2. 引物/探針設計不當或發(fā)生降解:優(yōu)化引物/探針的設計;或通過PAGE電泳檢測其完整性。
3. 模板濃度低或降解導致:對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;同時樣品制備時盡量避免引入雜質(zhì)和反復凍融。
二.Cq值偏大
1. 模板濃度低:建議提高樣本的上樣量。
2. 擴增效率低:反應條件不適宜或引物探針設計不當,建議通過繪制標準曲線確認擴增效率,同時對反應條件和引物探針設計進行優(yōu)化。
3. PCR產(chǎn)物太長:一般采用80-150bp的產(chǎn)物長度。如果擴增產(chǎn)物過長,建議用三步法程序擴增或優(yōu)化引物。
4. 反應體系中可能有PCR反應抑制物:建議將模板梯度稀釋后加入反應體系,或者重新制備純度更高的模板。
三.擴增曲線末尾起跳,但沒有完整擴增
1. 可能存在污染:建議對樣本進行復檢。
2. 如果是陰性對照,可能是引物二聚體或污染導致;如果是正常樣本,說明濃度過低或者加樣量不足。
四.復孔重復性差
1. 加樣誤差導致:定期校準移液器;同時可先配制除模板以外的其他試劑的預混液,然后進行分裝再加入模板,其次加大模板上樣體積,以上均可降低移液誤差的影響。
2. 模板濃度越低,重復性越差。建議提高模板量,使Ct值在15-30之間。
現(xiàn)在大家對我的了解是不是又多了一些呢?是不是對qPCR實驗又充滿了信心呢?那就趕緊行動起來吧!Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng),沒有他就沒有我那么多標致的圖片,快快申請試用,感受它的魅力呀!
▲ 圖4. Azure Cielo? 實時熒光定量PCR系統(tǒng)
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