酶免疫吸附實驗（ ELISA ）的性能指標(biāo)（定性產(chǎn)品）

1）、靈敏度

靈敏度（ sensitivity ）：某一檢測系統(tǒng)檢出極低被檢物質(zhì)的能力。包括兩層意思：

a、檢出被檢物質(zhì)Z低量的能力：

常用檢出Z低量被檢物的含量（即分析靈敏度或Z低檢出限）來表示。比如 0.1ng， 0.1mIu ， 0.1NCU等，意思是在某一檢測方法下，檢測系統(tǒng)能將有用信號和背景信號區(qū)分開來時所對應(yīng)的被檢物的濃度。但這種區(qū)分在目前的條件下是否在臨床上有確切的意義并不能全部的肯定。

評價方式：用標(biāo)準(zhǔn)被檢物持續(xù)稀釋，直到能區(qū)分有用信號和背景信號的Z大稀釋倍數(shù)。也叫滴度。

在 ELISA 實驗里，常用強陽性混合血清系列稀釋，同時用市場反應(yīng)較好的試劑盒同時進行標(biāo)定，選擇這些試劑盒都能檢出的Z大稀釋倍數(shù)的血清作為靈敏度血清，通常會有成系列的幾個血清。在標(biāo)定系列靈敏度血清的時候要非常注意一個問題：要注意基質(zhì)效應(yīng)在不同系統(tǒng)（包括不同廠家的試劑盒、工藝、不同原材料）上對靈敏度血清測量值的影響，在改變系統(tǒng)時，必須重新標(biāo)定靈敏度血清。

b、為試劑對人群或大量樣品中陽性標(biāo)本檢出的能力（假陰性越少越好） ，取決于包被物的全面性和親和力。

選擇原材料一定要選擇親和力高的原料。有些廠家為追求試劑對大多數(shù)陽性標(biāo)本的靈敏度，只選擇Z強的一種或少數(shù)幾種優(yōu)勢表位，而犧牲了在患者人群中較少出現(xiàn)的亞型或者原材料片段，這種做法是非常危險的，是對目標(biāo)人群的不負責(zé)任。

2)、特異性

特異性： 指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力 （無假陽性） ，取決于包被抗原 （體） 及標(biāo)記抗原 （體）的純度及特異性，生產(chǎn)工藝對試劑的特異性也有較大影響。可能影響試劑盒特異性的一些因素有：

操作因素：交叉污染、洗滌不徹底。

試劑盒工藝：試劑盒在生產(chǎn)的時候被污染了。

交叉：相似于被檢物的物質(zhì)交叉反應(yīng)，主要由生物原材料不純造成。

標(biāo)本因素：高度溶血、脂血標(biāo)本。

血清標(biāo)本處理：抗凝劑、反復(fù)凍融。

其它存在于血清中的物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如膽紅素、膽固醇、甘油三酯等。

3）、準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度（ Accuracy）：是指測定結(jié)果與真值（或靶值）接近的程度。準(zhǔn)確度不能以數(shù)字表示，往往用不準(zhǔn)確度來衡量。

在 ELISA 實驗中，真值往往指的是用決定性方法（即 “金標(biāo)準(zhǔn) ”）測量所得到的結(jié)果。準(zhǔn)確度是靈敏度和特異性的綜合指標(biāo)，是試劑盒質(zhì)量Z主要的指標(biāo)之一。

4）、精密性

精密性（ Precision）：是指對同一樣本重復(fù)測定時，每次測定結(jié)果與平均值的接近程度，即重復(fù)測定值之間的符合程度。常用變異系數(shù)來表示。

CV=SD/X ×

其中， X 為檢測均值， SD 為連續(xù)測定的標(biāo)準(zhǔn)差。

變異系數(shù)分為批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)。 ELISA 試劑一般指其批內(nèi)變異系數(shù)（CV ），其值應(yīng)小于 15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍。影響檢測精密性的因素：

操作的水平：要對操作者進行規(guī)范化操作的培訓(xùn)。

環(huán)境的影響：要控制實驗環(huán)境。對室溫、反應(yīng)溫度、強氧化劑、強還原劑、強光照射、劇烈的震蕩等因素應(yīng)進行控制，使其滿足實驗的要求。

試劑的儲運：試劑的運輸和保存一定要符合試劑要求的條件。

試劑本身的質(zhì)量：載體的質(zhì)量（包被板本身的吸附性和均一性） ；活性材料的親和力；生產(chǎn)工藝。

5）、穩(wěn)定性

穩(wěn)定性（ Stability ）：指試劑在其有效期內(nèi)滿足其使用功能的程度。常用某一或某幾個性能指標(biāo)的改變來表示。試劑穩(wěn)定性的考核主要分 4 個方面：

實時穩(wěn)定性：指的是試劑在規(guī)定的貯存條件（ 2~8℃）下，在試劑有效期內(nèi)性能指標(biāo)的改變。

加速破壞實驗：一般采用破壞性試驗即將試劑存放于 37℃保存，定期測定其靈敏度、特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開始下降為止。根據(jù)阿倫尼烏斯公式，認為 37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于 2~8℃保存一個半月。

運輸穩(wěn)定性：必須考慮試劑直接客戶所在地的信息。運輸?shù)哪康牡?、運輸?shù)姆绞健⑦\輸?shù)臅r間等對試劑的性能指標(biāo)都有影響，必須模擬可能的極端的運輸條件，以驗證試劑在這些條件下其質(zhì)量指標(biāo)的下降程度。

實際使用穩(wěn)定性： 試劑在直接客戶的使用過程中， 往往不能一次使用完 96 人份的試劑，而是多次的使用。必須考慮用戶對試劑的使用習(xí)慣。常用的考核方式是做模擬用戶使用習(xí)慣的拆封實驗。

試劑從生產(chǎn)到到達直接客戶手中應(yīng)分為 3 個階段，在考核試劑穩(wěn)定性的時候一定要注意這幾個周期。

貨架期：指的是從半成品生產(chǎn)出來到成品組裝前這段時間，即半成品的在庫時間，這個時間的長短根據(jù)產(chǎn)品的性質(zhì)、銷量等因素可以從 1 個月到 6 個月甚至 1 年不等。

運輸期：指試劑從出廠到試劑到達直接客戶手中這段時間。雖然這段時間可能只有 2 天到 1 周的時間，但由于這段時間試劑外部條件變化較為劇烈，所以需要特別的引起注意。

有效期：指產(chǎn)品從出廠日期到產(chǎn)品有效期截止日期，包含運輸期。

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