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  a340244226 2017-09-05 22:27:40

  DNA測序的方法有很多種. 目前Z常見的是雙脫氧終止法了. 在測序用的緩沖液中含有四種dNTP及聚合酶. 測序時分成四個反應(yīng)， 每個反應(yīng)除上述成分外分別加入2，3-雙脫氧的A， C， G， T核苷三磷酸(稱為ddATP， ddCTP， ddGTP， ddTTP)， 然后進行聚合反應(yīng). 在diyi個反應(yīng)物中， ddATP會隨機地代替dATP參加反應(yīng)一旦ddATP加入了新合成的DNA鏈， 由于其3位的羥基變成了氫， 所以不能繼續(xù)延伸. 所以diyi個反應(yīng)中所產(chǎn)生的DNA鏈都是到A就終止了; 同理第二個反應(yīng)產(chǎn)生的都是以C結(jié)尾的; 第三個反應(yīng)的都以G結(jié)尾， 第四個反應(yīng)的都以T結(jié)尾， 電泳后就可以讀出序列了. 也許這樣說你不一定明白. 舉一個例子， 假如有一個DNA， 互補序列是GATCCGAT， 我們試著做一下: 在diyi個反應(yīng)中由于含有dNTP+ddATP， 所以遇到G， T， C三個堿基時沒什么問題， 但遇到A時， 摻入的可能是dATP或ddATP， 比如已合成到G， 下一個如果參與反應(yīng)的是ddATP則終止， 產(chǎn)生一個僅有2個核苷酸的序列: GA， 否則繼續(xù)延伸， 可以產(chǎn)生序列GATCCG， 又到了下一個A了. 同樣有兩種情況， 如果是ddATP摻入， 則產(chǎn)生的序列是GATCCGA， 延伸終止， 否則可以繼續(xù)延伸， 產(chǎn)生GATCCGAT. 所以在diyi個反應(yīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的都是以A結(jié)尾的片段: GA， GATCCGA， 同理在第二個反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以C結(jié)尾的片段: GATC， GATCC， 在第三個反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以G結(jié)尾的片段: G， GATCCG 在第四個反應(yīng)中產(chǎn)生的都是以T結(jié)尾的片段: GAT， GATCCGAT， 電泳時按分子量大小排列， A反應(yīng)的片段長度為2， 7; C反應(yīng)的為4， 5; G反應(yīng)的為1， 6; T反應(yīng)的為3， 8， 四個反應(yīng)的產(chǎn)物分別電泳， 結(jié)果為 8 7 6 5 4 3 2 1 A | | C | | G | | T | | 我們可以從右向左讀， 為GATCCGAT， 至此， 測序完成(上面這個圖在百度知道中顯示不正常， 因為百度知道的網(wǎng)頁用的是比例字體， 你如果想看它， 拷貝到記事本中， 用等寬的字體來看).

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