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  挽歌捚嬐 2013-07-04 00:00:00

  熒光分析法 熒光分析法 附錄Ⅳ E. 熒光分析法 某些物質(zhì)受紫外光或可見光照射激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光波長較長的熒光。物質(zhì)的 激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長、所用溶 劑及溫度等條件固定時，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度 成正比關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法 為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，以及由于在液面附近溶液會吸收激發(fā)光， 使發(fā)射光強(qiáng)度下降，導(dǎo)致發(fā)射光強(qiáng)度與濃度不成正比，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中 進(jìn)行。 所用的儀器為熒光計或熒光分光光度計，按各藥品項下的規(guī)定，選定激發(fā)光波長和 發(fā)射光波長，并配制對照品溶液和供試品溶液。 由于不易測定熒光強(qiáng)度，故熒光分析法都是在一定條件下，用對照品溶液測定 熒光強(qiáng)度與濃度的線性范圍后，再在每次測定前，用一定濃度的對照品溶液校定儀器的 靈敏度；然后在相同的條件下，分別讀取對照品溶液及其試劑空白的熒光讀數(shù)與供試品 溶液及其試劑空白的熒光讀數(shù)，用下式計算供試品濃度： R<[i]>-R<[ib]> C<[i]>＝×C<[r]> R<[r]>－R<[rb]> 式中 C<[i]>為供試品溶液的濃度； C<[r]>為對照品溶液的濃度； R<[i]>為供試品溶液的熒光讀數(shù)； R<[ib]>為供試品溶液試劑空白的熒光讀數(shù)； R<[r]>為對照品溶液的熒光讀數(shù)； R<[rb]>為對照品溶液試劑空白的熒光讀數(shù)。 因熒光分析法中的濃度與讀數(shù)的線性較窄，故(R<[i]>－R<[ib]>)/(R<[r]>－R<[rb ]>)應(yīng)為0.50～2.0；如有超過，應(yīng)在調(diào)節(jié)溶液濃度后再測。 對易被光分解的品種，為使儀器靈敏度定標(biāo)準(zhǔn)確，避免因激發(fā)光多次照射而影響熒 光強(qiáng)度，可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長與之近似而對光穩(wěn)定的物質(zhì)配成適當(dāng)濃度的溶 液，作為基準(zhǔn)溶液，例如藍(lán)色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液，黃綠色熒光可用熒光素 鈉水溶液，紅色熒光可用羅丹明B水溶液等，在測定供試品溶液時用基準(zhǔn)溶液代替對照品 溶液校定儀器的靈敏度。 熒光分析法因靈敏度高，故干擾因素也多。溶劑不純會帶入較大誤差，應(yīng)先作空白 檢查，必要時，應(yīng)用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。溶液中的懸浮物對光有散射作用，必 要時，應(yīng)用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。所用的玻璃儀器與測定池等也必須保持 高度潔凈。溫度對熒光強(qiáng)度有較大的影響，測定時應(yīng)控制溫度一致。溶液中的溶氧有降 低熒光作用，必要時可在測定前通入惰性氣體除氧。

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