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  FreedomByKira 2009-04-06 00:00:00

  葉綠素a只吸收少量綠光

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  Dr佻54k汗f犯6 2009-04-06 00:00:00

  a．在葉綠素提取液中的紅光吸收峰只有 662 am，葉綠素b的645 am 吸收峰不明顯．這可 能是由于黃連翹葉片中葉綠素a和b的含量比約 為7：3，葉綠素b的吸收峰被掩蓋在葉綠素a的 662 am強(qiáng)峰之下． b．精測的2種葉綠素在藍(lán)紫光區(qū)的吸收強(qiáng)度 都大于紅光區(qū)，但用提取液測得的紅光區(qū)吸光度 反而較大．這可能是wGD-6型光學(xué)多通道分析 儀測量范圍的限制所致． C．提取液中藍(lán)紫光區(qū)的峰值位置與葉綠素a 和b的吸收峰位置均不一致，這是因?yàn)樘烊坏闹?物葉子不可避免地含有多種植物色素，多種成分 的植物色素的吸光性能疊加后，峰值點(diǎn)偏離了原 來位置． 把圖4與表1中峰值比較，由于TU一 1800SPC型紫外一可見分光光度計(jì)的測量誤差不 應(yīng)達(dá)到2O am，筆者認(rèn)為文獻(xiàn)中的數(shù)據(jù)存在爭議． 葉綠素b一丙酮溶液在435 am 處不存在吸收峰， 吸收峰應(yīng)位于456 am 處．而且葉綠素a一丙酮溶 液的藍(lán)紫光區(qū)吸收峰也不位于420 am，而應(yīng)是 431 am．至于紅光區(qū)的吸收峰，實(shí)測值與文獻(xiàn)數(shù) 據(jù)相吻合． 1)用汞燈的發(fā)射光譜對光學(xué)多道分析儀定 標(biāo)．用以定標(biāo)的汞燈發(fā)射譜線數(shù)據(jù)如下：紅光區(qū) 的定標(biāo)起始波長為574 nm，定標(biāo)發(fā)射譜線分別是 576．96 nm，578．97 nm和730．96 nm；藍(lán)紫光區(qū) 的定標(biāo)起始波長為400 nm，定標(biāo)發(fā)射譜線分別是 404．67 nm，435．83 nm 和546．07 nm． 2)配制葉綠素提取液和參比溶液，對其進(jìn)行 吸收光譜的測量(使用WGD-6型光學(xué)多通道分 析儀)． 本實(shí)驗(yàn)所用的葉片是黃連翹葉的新芽部分． 其葉綠素的提取方法是[5]： a．取新鮮的、洗凈擦干的黃連翹葉片0．5 g， 去中脈，剪碎后放人研缽中，加石英砂和碳酸鈣粉 (少量)及2～3 mL 8O 丙酮(或95 乙醇)，冰浴 中研磨至組織變白，再加丙酮1O mL，研成勻漿， 暗處靜置約10 min． b．將提取液過濾到5O mL棕色容量瓶(或替 代物)中，用丙酮反復(fù)沖洗研缽與研棒數(shù)次，并用 少量丙酮反復(fù)沖洗濾紙和殘?jiān)?，直至無綠色為止， 以使色素全部轉(zhuǎn)移人容量瓶．Z后用丙酮定容至 5O mL，搖勻，保存于暗處備用． 在進(jìn)行光度測量時，使用參比溶液可以消除 由于吸收池壁及溶劑對入射光的反射和吸收帶來 的誤差，并扣除干擾的影響．作為簡化實(shí)驗(yàn)，我們 不采用顯色劑，故參比溶液采用含有與待測溶液 相同摩爾濃度溶劑的無色溶液[1]． 3)把葉綠素晶體溶解在丙酮溶液中，對此溶 液進(jìn)行吸收光譜的測量，比較所得結(jié)果(使用 TU一1800SPC型紫外一可見分光光度計(jì))． 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 各種光合色素在有機(jī)溶劑(包括8O 丙酮溶 液)中的吸收峰位置 如表1所示．表1 光合色素在有機(jī)溶劑中的吸收峰位置 葉綠素種類 峰值／nm 葉綠素a 葉綠素b 胡蘿卜素 胡蘿卜素 葉黃素 420，660 435，643 420．440．470 425，450。480 425．445．475 丙酮提取液中色素濃度計(jì)算公式 如下 C。一12．21A 663— 2．81A646 Cb一2O．13A646— 5．03A 663 ， 、 CT— C。+ Cb一17．32A646— 7．18A663 Cx ．c一(1 O00A47o一3．27C。一1O4Cb)／229 式中 ，C ，CT分別為葉綠素a和b的濃度及葉 綠素總濃度，單位為mg·L_。；C ． 為類胡蘿卜素 的總濃度，單位為mg·L_。；A 。，A ，A 。分別 是提取液在663 nm，646 nm，470 nm 下的吸光 度． 1)探測葉綠素提取液在整個可見光波段的吸 收曲線(使用WGD-6型光學(xué)多通道分析儀) 探測的結(jié)果見圖2，圖中縱坐標(biāo)值的計(jì)算公 式為(適用于圖2～4)． = 100A = 1001n A = ln 式中J。( )是入射光通過8O 丙酮溶液后的光強(qiáng) 值，J( )是入射光通過葉綠素丙酮溶液后的光強(qiáng) 值，A是葉綠素在該波長的吸光度． 由圖2可得出，在紅光區(qū)，吸收峰位于 662．1 nm 處，該處的吸光度為A662—0．741 ． 藍(lán)紫光區(qū)的吸收峰有3個：442．0 nm，458．6 nm 和474．5 nm，其中以474．5 nm 的吸光度Z大，為 人八 ＼ 380 420 460 500 540 580 620 660 700 740 ／nm 圖2 葉綠素提取液在可見光區(qū)(380~740 nm)的 吸收光譜A 474． - - 0．574．(※表示2次測量值的平均數(shù)) 對照表1和式(1)的精確測量峰值表及各種 葉綠素含量的計(jì)算公式，筆者認(rèn)為： a．實(shí)測的662 nm 強(qiáng)吸收峰正是葉綠素a在 660 nm[3 (或663 nm[5 )的吸收峰，葉綠素b在 643 nm【3 (或646 nm[5 )的吸收峰在被測溶液中 沒有被測量到． b．吸收峰442．0 nm，458．6 nm，474．5 nm有 可能是a一胡蘿卜素、D一胡蘿卜素和葉黃素吸收峰 累加后的結(jié)果，其中442．0 nm，474．5 nm兩峰與 Q一胡蘿卜素的440 nm，470 nmL3 和葉黃素的 445nm，475nm[3 峰值比較一致． C．由式(1)計(jì)算，實(shí)驗(yàn)用的黃連翹葉子的色素 含量如表2所示． 表2 黃連翹葉子中色素含量 mg／L-1 濃度 數(shù)值 C日 Cb CT Cx． c 7．75 3．39 11．14 0．74 注：葉綠素a和b的含量比約為7：3 2)探測不同濃度的葉綠素提取液在吸收峰附 近的吸收曲線(使用WGD-6型光學(xué)多通道分析 儀) 為了測出葉綠素提取液的濃度對吸收峰的影 響，對不同濃度的葉綠素提取液在吸收峰附近的 吸收曲線進(jìn)行了探測．假設(shè)提取液的起始濃度為 100 ，然后采用逐次稀釋的方法測出濃度為 5O ，25 ，1O％時溶液的吸收曲線． 測得的2個主要吸收峰(662 nm和436 nm) 的吸光度隨濃度變化的曲線見圖3．可以看出，溶 液的濃度對吸收峰的波長幾乎沒有影響，光的吸 收與溶液濃度的關(guān)系遵從Lambert-Beer定律． 3)探測葉綠素晶體在可見光與近紫外光區(qū)的 吸收曲線(使用TU-1800SPC型紫外一可見分光光 度計(jì)) 為了將實(shí)驗(yàn)所得的曲線與標(biāo)準(zhǔn)值比較，使用 了葉綠素a(Fluka，純度95 )和葉綠素b(Fluka， 純度95 )配制的丙酮溶液進(jìn)行測量，并將測得 的吸收曲線與提取液的吸收曲線進(jìn)行了比較． 實(shí)驗(yàn)采用葉綠素a為0．24 mg(使用BP221D

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  孤影落寒花0 2017-10-07 00:00:00

  葉綠素含有2種呀，請看下面的 葉綠素a在645nm和663nm 處均有吸收，在645nm處吸光系數(shù)較小，為16.75，在663nm 處較大，為82.04；葉綠素b 在645nm和663nm 處亦都有吸收，但在645nm處吸光系數(shù)較大，為45.60，在663nm 處較小，為9.27。由此可知：葉綠素a的吸收峰值出現(xiàn)在663nm 處，該吸收曲線延伸到645nm處，在此波長處的吸收系數(shù)不如在663 nm 處大，因此在計(jì)算公式中求算葉綠素a的含量時，需扣除葉綠素b在663nm和645nm 處的吸光度值，再進(jìn)行計(jì)算。 標(biāo)準(zhǔn)分析方法要求，葉綠體色素提取液不可渾濁，在710nm或750nm波長下測量吸光度，其值應(yīng)小于葉綠素a吸收峰的吸光度值的5％，否則應(yīng)重新過濾。假定樣品在663nm處的吸光度值為0.03，則在750nm處的吸光度值不得大于0.0015，對試液的清澈程度要求很高，測量710nm或750nm的目的是避免懸浮物質(zhì)的干擾，一般測量水中的渾濁度所采用的波長為680nm，為避免在680nm處仍有葉綠素a產(chǎn)生的吸收值，故將測量渾濁度的波長選在710nm以上。在計(jì)算公式中，凡參與計(jì)算的各吸光度值都應(yīng)減去710nm處的吸光度值，以扣除懸浮物質(zhì)的干擾。 采用分光光度法測定葉綠素含量，對測量儀器分光光度計(jì)的波長精確度要求較高。如果波長與原吸收峰波長相差1nm，則葉綠素a的測定誤差為2％，葉綠素b為19％，使用前必須對分光光度計(jì)的波長進(jìn)行校正。校正方法除按儀器說明書外，還應(yīng)以純的葉綠素a和b來校正。

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