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問(wèn)答社區(qū)

的技術(shù),能不能對(duì)細(xì)菌這樣的微生物進(jìn)行基因測(cè)序

uohvzpgjr 2017-04-17 12:06:09 323  瀏覽
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參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

  • 墩烙肇偈鶴壩 2017-04-18 00:00:00
    能不能對(duì)細(xì)菌這樣的微生物進(jìn)行基因測(cè)序 基因組DNA測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建 1. 對(duì)收到的DNA樣品進(jìn)行檢測(cè),取2-3ul樣品,用1%的瓊脂糖膠檢測(cè),對(duì)于純度不夠(含RNA或蛋白)的DNA樣品需要柱純化后重新檢測(cè)。 對(duì)于細(xì)菌基因組需要擴(kuò)增16S全長(zhǎng)序列,進(jìn)行驗(yàn)證。 對(duì)于噬菌體或者質(zhì)粒樣品,若用16S全長(zhǎng)引物擴(kuò)增,無(wú)目的條帶則無(wú)細(xì)菌基因組污染,若出現(xiàn)目的條帶則存在污染,需要去除后建庫(kù)。 2. 用Qubit檢測(cè)DNA樣品濃度。 3. 吸取部分DNA樣品,用TE或Elution Buffer稀釋,終濃度在10ng/ul-30ng/ul之間,體積為130ul。用Covaris破碎,破碎時(shí)請(qǐng)根據(jù)需要片段大小,按標(biāo)準(zhǔn)操作流程操作。 4. 樣品足夠多的情況下,可以取適量破碎后的產(chǎn)物進(jìn)行PAGE 膠或者瓊脂糖膠檢測(cè)。 5. 對(duì)破碎后的產(chǎn)物進(jìn)行柱式法(5倍體積的B3+100-200ul異丙醇)濃縮回收,加入50-100ul TE或Elution Buffer洗脫?;厥债a(chǎn)物用Qubit測(cè)值。 6. 修平和磷酸化

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