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- zhanxtongnk54 2016-11-12 00:00:00
- 目的和要求 1、了解采集土樣的要求和方法。 2、掌握由土壤中分離稀有放線菌的基本原理和操作技術(shù)。 3、學(xué)習(xí)并掌握土壤稀釋法和微生物的純培養(yǎng)技術(shù)。 4、學(xué)習(xí)并掌握抗生菌的鑒別方法。 二、原理 篩選放線菌是新抗研究的重要課題之一。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)的抗生素有80%皆來自于放線菌。放線菌主要存在于土壤中,并在土壤中占有相當(dāng)大的比例。一般地,放線菌在比較干燥、偏堿性、含有機質(zhì)豐富的土壤中數(shù)量居多。通常,隨著地理分布、植被及土壤性質(zhì)的不同,放線菌的種類、數(shù)量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本營,其中的放線菌多以鏈霉菌為主,因此人們通常將除鏈霉菌以外的其它放線菌統(tǒng)稱為稀有放線菌。若以常規(guī)方法進(jìn)行分離,得到的幾乎全部是鏈霉菌。然而,當(dāng)采用加熱處理土樣、選用特殊培養(yǎng)基或添加某種抗生素等方法時,均可提高稀有放線菌的獲得率。由土壤中分離放線菌的方法很多,其中包括稀釋法、彈土法、混土法和噴土法等,本實驗主要采用稀釋法,并通過選用特殊培養(yǎng)基的方法,來獲得少量稀有放線菌。 由土壤中分出的放線菌需進(jìn)一步鑒別是否為需要的抗生菌。首先應(yīng)根據(jù)篩選目的確定試驗?zāi)P?,然后利用培養(yǎng)基平板進(jìn)行拮抗性測定。常用的方法有瓊脂塊法和濾紙片法。其主要依據(jù)是擴(kuò)散原理,即觀察在抗生菌周圍是否會出現(xiàn)明顯的YJ圈。YJ圈的大小和透明度則表明了該菌株KJ活性的強弱。本實驗選用了這兩種方法。 三、實驗材料 1、培養(yǎng)基:葡萄糖天門冬素瓊脂,精氨酸瓊脂,高氏1號瓊脂,以上每種培養(yǎng)基皆用500ml三角瓶分裝250ml。 2、滅菌物品:牛皮紙袋,培養(yǎng)皿,1ml、5ml吸管,250ml三角瓶分裝90ml無菌水(含30粒玻璃珠),18×180mm試管分裝9ml無菌水,牙簽,玻璃刮鏟,18×180mm試管中分裝10 ml 1‰K2Cr2O7母液。 3、試驗菌: (1)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) ?。?)大腸桿菌(Escherichia coli) ?。?)金黃色葡萄球菌(Staphlococcus aureus) ?。?)深紅酵母(Ruodotorula rubra) 4、其它:采土鏟,細(xì)目篩,藥勺,稱量紙,試管架,小天平,記號筆,打孔器,游標(biāo)卡尺、鑷子,圓濾紙片,15×150mm試管分裝5ml無菌水,1ml吸管,無菌漏斗。
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