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  誰要走傲慢的我 2012-12-01 00:00:00

  這是什么問題？是否應(yīng)該完善點(diǎn)？需要原理還是參數(shù)什么的？

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  sunhong1114 2012-12-01 00:00:00

  biolog是根據(jù)微生物利用碳源的情況鑒定微生物多樣性的實(shí)驗(yàn)方法

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  superhuman響 2018-04-28 00:00:00

  Biolog微生物鑒定步驟 一 檢測(cè)原理 Biolog微生物鑒定系統(tǒng)測(cè)試的是微生物在鑒定板中利用或氧化化和物的能力。測(cè)試會(huì)產(chǎn)生特征性的紫色孔模式，組成代謝指紋。所有必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生化試劑都預(yù)先加進(jìn)96孔板中，四唑紫是一種氧化還原染料，指示碳源的利用情況。.鑒定步驟非常簡(jiǎn)單，純化分離到的菌株經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，再制成接種液加到鑒定板中。在培養(yǎng)過程中，一些孔中的化學(xué)物質(zhì)能被氧化并將顯色物質(zhì)成紫色，對(duì)照孔（A-1）和陰性孔仍然為無色。鑒定板在相應(yīng)的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)4-6小時(shí)或16-24小時(shí)即可形成代謝模式。系統(tǒng)軟件自動(dòng)和數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比，如果能找到合適的匹配，就可以得出一個(gè)鑒定結(jié)果。 二 所需器材和消耗品： 培養(yǎng)基、接種液、巰基乙酸鈉、長(zhǎng)棉簽、接種棒、儲(chǔ)液槽、八道移液器、移液器頭、濁度儀、濁度標(biāo)準(zhǔn)品、控溫培養(yǎng)箱和相應(yīng)的鑒定板。其中接種液自行配制，接種棒、儲(chǔ)液槽可選用國(guó)產(chǎn)品牌代替。 三 鑒定步驟： Biolog微生物鑒定樣品處理步驟 分離純化培養(yǎng)基 BUG+B 通用培養(yǎng)基加羊血 BUA+B 厭氧培養(yǎng)基加羊血 BUY 酵母培養(yǎng)基 2%ME 2%的麥芽汁提取物 革蘭氏染色和菌落菌株形態(tài)觀察 革蘭氏染色結(jié)果 革蘭氏陰性 革蘭氏陽(yáng)性 厭氧菌 酵母菌 絲狀真菌 確認(rèn)實(shí)驗(yàn) 氧化酶反應(yīng)陽(yáng)性 氧化酶反應(yīng)陰性、三糖鐵實(shí)驗(yàn)A/A或K/A 需在巧克力培養(yǎng)基上或需要6.5% CO2培養(yǎng) 確認(rèn)實(shí)驗(yàn) 氧化酶反應(yīng)陰性、三糖鐵實(shí)驗(yàn)K/K或K/Aw 微生物類型 GN-NENT 非腸道菌 GN-ENT 腸道菌 GN-FAS 苛生菌 GP-COCCUS-ROD桿球菌、GP-COCCUS球菌、GP-ROD桿菌 GP-ROD （芽孢桿菌） AN 厭氧菌 YT 酵母菌 FF 絲狀真菌 擴(kuò)大培養(yǎng)基 BUG+B BUG+B 巧克力培養(yǎng)基 BUG+B BUG+M+T BUA+B BUY 2%ME 培養(yǎng)溫度 30℃ 35-37℃ 35-37℃ 35-37℃ 30℃ 35-37℃ 26℃ 26℃ 培養(yǎng)氣體 空氣 空氣 6.5% CO2 空氣或6.5% CO2 空氣 無氫氣的厭氧環(huán)境 空氣 空氣 接種液類型 GN/GP-IF GN/GP-IF+T GN/GP-IF+T GN/GP-IF+T GN/GP-IF AN-IF 水 FF-IF 接種濁度/ 濁度標(biāo)準(zhǔn)管 52%T GN-NENT 61%T GN-ENT 20%T GP-COC&GP-ROD&GN-FAS 20%T GP-COC&GP-ROD&GN-FAS 28%T GP-ROD SB 65%T AN 47%T YT 75%T FF 鑒定板類型/ 每孔菌懸液的量 GN2 150μl GN2 150μl GN2 150μl GP2 150μl GP2 150μl AN 100μl YT 100μl FF 100μl 培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)） 4-6，16-24 4-6，16-24 4-6，16-24 4-6，16-24 4-6，16-24 20-24 24，48，72 24，48，72，96 diyi步： 在用戶自己的培養(yǎng)基上純化菌株，如果菌株為凍干或冷凍樣品，需要傳代培養(yǎng)2-3代，讓菌株恢復(fù)活力。 對(duì)純化好的菌株做革蘭氏染色，確定菌株是革蘭氏陰性還是陽(yáng)性。觀察菌落外部形態(tài)或用顯微鏡觀察菌株形態(tài)，確定是酵母還是絲狀真菌，是球菌還是桿菌。 如果是革蘭氏陰性菌，還需要Z終確認(rèn)是腸道菌、非腸道菌或苛生菌。方法是，氧化酶陽(yáng)性或氧化酶陰性但三糖鐵實(shí)驗(yàn)為K/K或K/Aw，則該菌株為非腸道菌(GN-NENT)，氧化酶陰性以及三糖鐵實(shí)驗(yàn)為A/A或K/A，則該菌株為腸道菌(GN-ENT)。如果菌株①需要在巧克力培養(yǎng)基上或需要6.5% CO2培養(yǎng)，②在BUG+B培養(yǎng)基上生長(zhǎng)非常差，形成針尖大小的菌落，那么可以認(rèn)為這些菌是苛生菌(GN-FAS)。大多數(shù)苛生菌都是從哺乳動(dòng)物的呼吸道里分離出來的，如Actinobacillus， Alysiella， Brucella， Capnocytophaga， CDC Group DF-3， CDC Group EF-4， Eikenella， Haemophilus， Kingella， Moraxella， Neisseria， Simonsiella， Suttonella，和Taylorella。 如果是革蘭氏陽(yáng)性菌，用革蘭氏染色可以很容易的區(qū)分球菌和桿菌，推薦再做一個(gè)過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)，Z終確定是球菌還是桿菌。通過革蘭氏染色或觀察菌落形態(tài)可以區(qū)分出芽孢桿菌。 微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)應(yīng)該用Biolog推薦的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，以便使微生物達(dá)到Z佳的代謝活性，進(jìn)而準(zhǔn)確的和數(shù)據(jù)庫(kù)中的代謝模式匹配。 微生物應(yīng)該是新鮮的，確保其處于指數(shù)增長(zhǎng)期，因?yàn)橐恍┚暝谶_(dá)到穩(wěn)定期時(shí)會(huì)失去生存能力或代謝活性，推薦的培養(yǎng)周期為4-24個(gè)小時(shí)。 如果擴(kuò)大培養(yǎng)的量不足以配制相應(yīng)的濁度，可以培養(yǎng)多個(gè)平板，培養(yǎng)時(shí)間可以延長(zhǎng)到48個(gè)小時(shí)。 第二步： 首先確定濁度儀沒開啟電源的時(shí)候，指針應(yīng)指在0%，如果沒有，用螺絲刀調(diào)整。開啟電源，取未開蓋的裝有接種液的試管，擦干凈管壁，放入濁度儀，指針應(yīng)指在，如果沒有，旋動(dòng)右方旋鈕。然后用濁度標(biāo)準(zhǔn)管檢驗(yàn)，讀數(shù)在±2%都是正常的。要使用哪管接種液，就用相應(yīng)的試管做校正，不要在濁度儀的光路中旋轉(zhuǎn)試管。  在鑒定革蘭氏陰性腸道菌和苛生菌的時(shí)候，在接種液里應(yīng)該加準(zhǔn)確三滴巰基乙酸鈉。巰基乙酸鈉的作用是YZ芽孢形成，并且可以部分或完全的YZA-1或其它孔由于微生物利用自身分泌的聚多糖莢膜而出現(xiàn)的紫色。一些非腸道菌液需要添加巰基乙酸鈉。 按照下列步驟制備均勻的菌懸液：用接種液將棉簽稍微浸濕，用棉簽在菌落上面輕輕的滾動(dòng)可以將菌落取到接種液中，從而不會(huì)將培養(yǎng)基或其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)帶入接種液。先取單菌落，不夠再取生長(zhǎng)緊密的菌落。在試管內(nèi)壁接種液液面的上方，旋轉(zhuǎn)擠壓棉簽可以將菌落團(tuán)分散。然后上下移動(dòng)棉簽，將分散的菌落和接種液充分混合形成均一，無菌團(tuán)的菌懸液。如果菌懸液有菌團(tuán)，可以讓菌團(tuán)沉到管底。  調(diào)整濁度直至達(dá)到允許的范圍，增加接種液或添加菌落可以降低或升高菌懸液的密度。  將菌懸液接種到鑒定板上，不要超過20分鐘。如果長(zhǎng)時(shí)間部接種到鑒定板上，一些菌會(huì)失去代謝活性。 第三步：  將鑒定板編上相應(yīng)的號(hào)碼。把菌懸液倒入儲(chǔ)液槽，不要全部倒入，因?yàn)樵嚬艿撞靠赡苡形捶稚⒌木鷪F(tuán)。按照不同的鑒定板所需的加樣量進(jìn)行移液器的程序選擇，將移液器頭安放到移液器上，必要時(shí)可以用手加固，以免造成上方漏氣。吸取菌懸液，觀察每個(gè)移液器頭中的液面是否一致，如果不一致，放出菌懸液，加固移液器頭。加完菌懸液后，蓋上蓋子。 第四步： 培養(yǎng)環(huán)境根據(jù)所鑒定的菌株種類而定。準(zhǔn)備一個(gè)塑料容器，在底部鋪上濕紙巾，把鑒定板放在紙巾上，可以防止鑒定板外緣孔水分的蒸發(fā)。對(duì)于革蘭氏陰性陽(yáng)性菌，鑒定板培養(yǎng)4-6個(gè)小時(shí)可以進(jìn)行一次讀數(shù)，過夜培養(yǎng)（16-24個(gè)小時(shí)）可再進(jìn)行一次讀數(shù)。厭氧菌在培養(yǎng)20-24個(gè)小時(shí)后進(jìn)行一次讀數(shù)即可。酵母和絲狀真菌所需培養(yǎng)時(shí)間稍長(zhǎng)，一般間隔24個(gè)小時(shí)讀一次數(shù)。 第五步： 開啟讀數(shù)儀和電腦，打開Biolog軟件，并對(duì)讀數(shù)儀進(jìn)行初始化，設(shè)置好各項(xiàng)參數(shù)（培養(yǎng)時(shí)間、菌株名稱、菌株編號(hào)、菌株類型），用紙巾擦干凈培養(yǎng)好的鑒定板底部，放入讀數(shù)儀，A-1孔位于左上方。即可點(diǎn)擊“Read This”進(jìn)行讀數(shù)。鑒定結(jié)果自動(dòng)顯示在屏幕下方，將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行保存即可。

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