熒光素和ICG熒光血管造影改變了血管神經(jīng)外科醫(yī)生的手術(shù)方式，它提供具有豐富信息的術(shù)中視圖。2021神經(jīng)可視化峰會(huì)是一個(gè)匯集quan球神經(jīng)外科醫(yī)生的特別活動(dòng)，在此期間，A教授在一次家du網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)上分享了他在熒光引導(dǎo)下的神經(jīng)外科手術(shù)經(jīng)驗(yàn)，介紹了幾個(gè)臨床案例。

學(xué)習(xí)要點(diǎn)

• 了解熒光素鈉和ICG的歷史以及它們?cè)谘苌窠?jīng)外科的首次應(yīng)用

• 探討熒光技術(shù)在神經(jīng)外科的優(yōu)勢(shì)，及其如何為神經(jīng)外科醫(yī)生提供有價(jià)值的信息

• 觀看熒光引導(dǎo)下的神經(jīng)外科手術(shù)視頻，包括動(dòng)靜脈畸形（AVM）、搭橋和動(dòng)脈瘤手術(shù)的臨床案例

熒光成像在神經(jīng)外科的應(yīng)用：

熒光素鈉和ICG的歷史及其首次應(yīng)用

熒光素鈉自20世紀(jì)60年代末以來(lái)一直用于神經(jīng)外科，最初由醫(yī)生對(duì)其進(jìn)行了描述，醫(yī)生在開(kāi)顱時(shí)進(jìn)行了硬膜外血管造影術(shù)。吲哚菁綠（ICG）在很久以后才被應(yīng)用于評(píng)估腦血流。它是由醫(yī)生在21世紀(jì)初引入的，并決定將這種廣泛應(yīng)用于眼科的技術(shù)轉(zhuǎn)移到神經(jīng)外科。

ICGzui早用于神經(jīng)外科評(píng)估動(dòng)脈瘤，并逐步應(yīng)用于幾種神經(jīng)外科病癥：評(píng)估旁路通透性、AVM手術(shù)、評(píng)估海綿狀血管瘤手術(shù)和神經(jīng)腫瘤學(xué)中靜脈引流異常。目前，腦熒光血管造影使用ICG的情況更為普遍。

熒光造影引導(dǎo)下的神經(jīng)外科：

熒光素鈉與ICG的優(yōu)缺點(diǎn)

熒光素鈉視頻血管造影有一些優(yōu)勢(shì)，包括成本較低，精細(xì)細(xì)節(jié)的可視化，以及可以直接在顯微鏡下通過(guò)熒光過(guò)濾器進(jìn)行觀察。ICG需要單獨(dú)的紅外攝像機(jī)，可以將信息顯示在不同的屏幕上。熒光素?zé)晒庖矠闊o(wú)牽開(kāi)器手術(shù)提供了有用的價(jià)值，這與手術(shù)創(chuàng)傷的降低密切相關(guān)。

熒光素鈉的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是作為一種相對(duì)惰性的染料，急性毒性研究顯示盡管會(huì)誘發(fā)一些嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)，但它對(duì)人類沒(méi)有特殊危害。此外，成本也非常低。熒光素鈉的缺點(diǎn)：它在血液中至少停留一小時(shí)，需要長(zhǎng)時(shí)間等待后才能重復(fù)使用。

ICG的半衰期為3至4分鐘，因此可以在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行第二次或第三次注射。但在某些病人群體中，如對(duì)碘過(guò)敏的病人或甲狀腺功能亢進(jìn)的病人，它是禁用的。而且它價(jià)格昂貴。

熒光造影在動(dòng)靜脈畸形（AVM）手術(shù)中的應(yīng)用

在一名患有左額葉動(dòng)靜脈畸形的患者中，選擇了對(duì)側(cè)入路，以避免優(yōu)勢(shì)半球，并更好地控制進(jìn)料器。使用FL560術(shù)中熒光素?zé)晒饽K，可通過(guò)顯微鏡在手術(shù)野內(nèi)精確地顯示時(shí)間、給藥器、靜脈和AVM周圍的短血管，并具有清晰的對(duì)比度。

但在使用ICG時(shí)，用戶必須查看另一個(gè)屏幕，而且無(wú)法看到AVM的周圍環(huán)境。必須通過(guò)從顯示器轉(zhuǎn)移到手術(shù)野來(lái)進(jìn)行解釋。熒光素?zé)晒飧菀自谑中g(shù)野中直接識(shí)別供血血管，并將實(shí)質(zhì)圖像更好地可視化。

圖1：用FL560熒光素?zé)晒饽K觀察AVM與用ICG觀察AVM。圖片由A教授提供。

熒光造影在搭橋手術(shù)中的應(yīng)用

在一例煙霧病患者中，施行了顳淺動(dòng)脈-大腦中動(dòng)脈搭橋術(shù)(STA-MCA)。熒光素鈉熒光對(duì)探索和檢查STA以及在手術(shù)野直接看到動(dòng)脈的功能非常有用。這是了解搭橋手術(shù)工作方式的一種非常有效的技術(shù)。它提供了良好的血管和組織灌注的可視化，盡管厚壁血管不太明顯。

圖2：在搭橋手術(shù)中使用FL560熒光素?zé)晒饽K。圖片由A教授提供。

熒光造影在動(dòng)脈瘤手術(shù)中的應(yīng)用

在一名患有中動(dòng)脈小動(dòng)脈瘤的患者中，使用熒光素?zé)晒庵С謯A閉。造影劑有助于暴露動(dòng)脈瘤，并在手術(shù)野中直接觀察到穿支及其灌注情況。使用ICG可能會(huì)忽略這一點(diǎn)，因?yàn)樗枰榭戳硪粋€(gè)屏幕，且呈現(xiàn)的是黑白圖像。在熒光素?zé)晒庀?，閉塞的動(dòng)脈瘤清晰可見(jiàn)。但由于動(dòng)脈瘤手術(shù)往往很快，而且厚壁血管也不太明顯，所以無(wú)法進(jìn)行重復(fù)使用。熒光素鈉可與ICG結(jié)合使用，兩者并不相互排斥。

圖注：利用FL560熒光素?zé)晒饽K進(jìn)行動(dòng)脈瘤夾閉。圖片由A教授提供。

綜上所述，熒光素視頻血管造影具有手術(shù)野三維可視化的優(yōu)勢(shì)，可以實(shí)時(shí)進(jìn)行手術(shù)操作，尤其是對(duì)狹窄視野內(nèi)的小血管。此外，它的成本更低。熒光素血管造影的缺點(diǎn)是無(wú)法觀察到厚壁血管中的血流，而且染料在血液中停留的時(shí)間較長(zhǎng)。ICG血管造影技術(shù)和熒光素血管造影技術(shù)為神經(jīng)外科醫(yī)生提供了重要優(yōu)勢(shì)。

脂肪組織在機(jī)體能量穩(wěn)態(tài)調(diào)控和體溫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用。脂肪組織由不同類型的脂肪細(xì)胞以及脂肪細(xì)胞前體、免疫細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管和神經(jīng)投射物組成。目前分析脂肪組織的免疫組織化學(xué)和免疫熒光方法主要是基于對(duì)具有相對(duì)高倍率成像的薄切片。然而，這種方法存在著明顯的局限性。首先，復(fù)雜的絲狀結(jié)構(gòu)，如交感神經(jīng)和脈管系統(tǒng)，已知在脂肪功能中起著重要的作用，薄切片僅捕獲一小部分組織，這可能導(dǎo)致結(jié)論因分析的組織部分不同而產(chǎn)生差異，很難通過(guò)薄切片進(jìn)行評(píng)估。其次，由于脂肪組織獨(dú)特的無(wú)定形形態(tài)特征，很難僅根據(jù)切片染色來(lái)評(píng)估脂肪組織的三維結(jié)構(gòu)。鑒于這些因素，非常需要一種可提供整個(gè)脂肪組織的三維可視化并且保持高分辨率的方法。

锘海生命科學(xué)自主研發(fā)的平鋪光片顯微鏡具有三維成像速度快、對(duì)比度高、低光毒性、低光漂白等諸多優(yōu)點(diǎn)。此外，依托于顯微鏡測(cè)樣服務(wù)工作積累的豐富的組織透明化、組織免疫熒光染色及成像經(jīng)驗(yàn)，锘海生命科學(xué)自主研發(fā)出了快速高效的锘海組織透明化試劑盒，大大提高樣本組織透明化的效率，為廣大科研工作者提供一套更為專業(yè)、完整的服務(wù)解決方案！

我們使用TH對(duì)脂肪組織的神經(jīng)進(jìn)行標(biāo)記，如下圖1、2所示，為小鼠附睪脂肪神經(jīng)成像3D重構(gòu)結(jié)果。該脂肪組織大小為6.0x8.5x2.5 mm，成像分辨率為橫向4 μm，縱向10 μm，成像時(shí)長(zhǎng)僅4分鐘。

圖1 小鼠附睪脂肪組織神經(jīng)成像

圖2 小鼠附睪脂肪組織神經(jīng)成像（局部圖）

我們使用SM22對(duì)脂肪組織的大血管進(jìn)行標(biāo)記，如下圖3、4所示，為小鼠附睪脂肪組織大血管成像3D重構(gòu)結(jié)果。該脂肪組織大小為6.0x8.5x4.0 mm，成像分辨率為橫向2 μm，縱向10 μm，成像時(shí)長(zhǎng)僅10分鐘。

圖3 小鼠附睪脂肪組織大血管成像

圖4 小鼠附睪脂肪組織大血管成像（局部圖）

參考文獻(xiàn)：

[1] Chi J, Crane A, Wu Z, Cohen P. Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue. J Vis Exp. 2018 Jul 28;(137):58271. doi: 10.3791/58271. PMID: 30102289; PMCID: PMC6126572.

[2] Wang P, Loh KH, Wu M, Morgan DA, Schneeberger M, Yu X, Chi J, Kosse C, Kim D, Rahmouni K, Cohen P, Friedman J. A leptin-BDNF pathway regulating sympathetic innervation of adipose tissue. Nature. 2020 Jul;583(7818):839-844. doi: 10.1038/s41586-020-2527-y. Epub 2020 Jul 22. PMID: 32699414.

　　天津本生|PCR八聯(lián)管在實(shí)驗(yàn)中的八個(gè)優(yōu)勢(shì)

　    PCR八聯(lián)管，許多科研人員在實(shí)驗(yàn)中遇到了問(wèn)題，要么是蓋子蓋得不嚴(yán)密，要么是大部分都蒸發(fā)掉了。很多進(jìn)口產(chǎn)品雖然好用，但由于資金有限，他們可能會(huì)選擇國(guó)產(chǎn)。針對(duì)這一現(xiàn)象，接下來(lái)由八聯(lián)管供應(yīng)天津本生的小編來(lái)講解一下PCR八聯(lián)管可帶來(lái)的一些優(yōu)勢(shì)，希望能夠?qū)Υ蠹矣兴鶐椭?/p>

　　1、PCR八聯(lián)管采用光學(xué)平蓋，使整個(gè)蓋看起來(lái)光滑明亮，沒(méi)有任何痕跡，大大提高了PCR檢測(cè)器的時(shí)間通過(guò)率。

　　2、高拋光精密技術(shù)，增加管蓋透光率，廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。蓋子的凹形設(shè)計(jì)可以有效防止光學(xué)表面的劃傷和交叉污染。

　　3、管道清潔度高，不易變形，吸附性低。

　　4. 進(jìn)口醫(yī)用級(jí)PP材料，不含RNase、DNase、外源DNA/RNA、內(nèi)毒素、熱原，樣品和試劑吸附極低，保證反應(yīng)體系的耐高溫和準(zhǔn)確度，加熱至125℃ 任何變形。

　　5、PCR八聯(lián)管具有蒸發(fā)率低、密封性高、管蓋啟閉方便等特點(diǎn)。

　　6、管子與管蓋特殊的聯(lián)鎖工藝設(shè)計(jì)，蒸發(fā)率低，密封性能好，管蓋也能輕松開(kāi)合，操作方便。

　　7、實(shí)驗(yàn)可以重復(fù)進(jìn)行。

　　8、生產(chǎn)質(zhì)量控制比較嚴(yán)格，既保證了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，也保證了每批產(chǎn)品的性能穩(wěn)定。

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　　2、高拋光精密技術(shù)，增加管蓋透光率，廣泛應(yīng)用于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。蓋子的凹形設(shè)計(jì)可以有效防止光學(xué)表面的劃傷和交叉污染。

　　3、管道清潔度高，不易變形，吸附性低。

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什么是核酸檢測(cè)？

核酸檢測(cè)是指通過(guò)特殊的技術(shù)手段檢測(cè)臨床樣本中是否存在特定的病原體核酸，從而診斷患者的感染原因。新型肺炎核酸檢測(cè)主要是看它的核酸，通過(guò)實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)，即RT-PCR方法來(lái)檢測(cè)。檢測(cè)的樣本鼻拭子或咽拭子從鼻腔或者口腔用棉簽沾取樣本再出來(lái)做一個(gè)檢測(cè)，這是目前簡(jiǎn)單、快捷的一個(gè)方法。

核酸檢測(cè)中病毒滅活樣本保存液的優(yōu)勢(shì)是什么呢？

1.降低RNA降解造成假陰性

核酸樣本保存條件苛刻，RNA極易裂解，4℃僅可存放24h，運(yùn)輸過(guò)程過(guò)長(zhǎng)RNA就會(huì)出現(xiàn)提前被降解的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致檢測(cè)假陰性增多。病毒樣本保存液是采樣管內(nèi)一種病毒樣本保護(hù)性運(yùn)輸介質(zhì)，防止病毒采樣后不能及時(shí)檢測(cè)在送檢過(guò)程中病毒降解，避免因病毒在檢測(cè)途中提前降解造成假陰性。

2.減小核酸提取過(guò)程的感染

所有人都知道新冠肺炎的傳染性高，檢測(cè)過(guò)程中稍有不慎會(huì)被感染。核酸檢測(cè)需要有專門的儀器和標(biāo)準(zhǔn)的分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，需要PCR認(rèn)證人員操作，步驟繁瑣，全程需要5~8個(gè)小時(shí)，過(guò)程中感染風(fēng)險(xiǎn)大。

病毒滅活樣本保存液采用裂解鹽可以快速對(duì)呼吸道病原體進(jìn)行滅活、保存，使樣品失去感染性。由于是滅活病毒而不用培養(yǎng)病毒，首先需要的就是對(duì)病毒進(jìn)行裂解失活、破壞其膜蛋白釋放核酸，大大降低了核酸提取過(guò)程中被感染的危險(xiǎn)度。

德晟研發(fā)生產(chǎn)的病毒樣本保存液分為病毒滅活樣本保存液和非滅活型，非滅活型病毒樣本保存液可以完整保護(hù)好病毒的蛋白，可用于細(xì)胞培養(yǎng)。針對(duì)不同的需求所適用的病毒樣本保存液也會(huì)有所不同，有需求的可直接來(lái)電咨詢。