上期文章中，我們介紹了活體成像實(shí)驗(yàn)中熒光蛋白的選擇方法，熒光蛋白在腫瘤細(xì)胞株篩選、病毒載體表達(dá)、轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建等應(yīng)用中被廣泛使用（點(diǎn)擊查看詳解）。在藥物分布、納米顆粒示蹤、干細(xì)胞追蹤等實(shí)驗(yàn)中，往往需要用熒光染料對材料或細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。本期為大家介紹活體成像實(shí)驗(yàn)中常用的熒光染料！

Cy5.5（Ex/Em：678/701 nm）和Cy7（Ex/Em：749/776 nm）是對分子標(biāo)記的ZY選擇之一；DiD（Ex/Em：644/663 nm）、DiR（Ex/Em：748/780）染料則常用于活體成像實(shí)驗(yàn)中對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。

 一、Cy5.5 、Cy7

Cy5.5 、Cy7避開了可見光區(qū)，在生物組織中的穿透深度較大。水和血紅蛋白對700～900 nm的光吸收都很少，使得近紅外光可以穿透組織內(nèi)部多達(dá)15 cm。同時，這類染料還擁有紫外光區(qū)染料和同位素標(biāo)記無法具備的生物安全性。

Cyanine 5.5性質(zhì)

• Ex(nm)：678

• Em(nm)：701

• 分子量：1153.20

• 溶劑：DMSO

• 結(jié)構(gòu)式：

• 光譜性質(zhì)

Cyanine7 Hydrazide性質(zhì)

• Ex(nm)：749

• Em(nm)：776

• 分子量：924.92

• 溶劑：DMSO

• 結(jié)構(gòu)式：

• 光譜性質(zhì)

二、DiD、DiR細(xì)胞膜熒光探針 

DiD（紅色熒光染料）是親脂性熒光染料家族成員之一，它可以用來標(biāo)記細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)DiD與細(xì)胞膜結(jié)合后，其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)。這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細(xì)胞染色，會在整個細(xì)胞膜上擴(kuò)散，ZJ濃度可以使整個細(xì)胞膜染色。DiD可以用來對活細(xì)胞進(jìn)行成像和流式分析。

DiR（近紅外熒光染料）是一個親脂性的花青染料。常用于標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜。DiR 的兩個18-碳鏈插入到細(xì)胞膜，從而進(jìn)行特定的、穩(wěn)定的細(xì)胞染色，幾乎不會發(fā)生細(xì)胞間的染料轉(zhuǎn)移。DiR和其他細(xì)胞膜熒光染料如 DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）配合使用，為多色成像和流式細(xì)胞分析提供了有效的工具。

DiD性質(zhì)

• Ex(nm)：644

• Em(nm)：663

• 分子量：1052.1

• 溶劑：可溶于乙醇、DMF和DMSO

• 結(jié)構(gòu)式：

DiR性質(zhì)

• Ex(nm)：748

• Em(nm)：780

• 分子量：1013.39

• 溶劑：可溶于乙醇、DMF和DMSO

• 結(jié)構(gòu)式：

對分子或細(xì)胞成功標(biāo)記后，接下來需要進(jìn)行成像，獲取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。這個環(huán)節(jié)當(dāng)然少不了FOBI整體熒光成像系統(tǒng)，內(nèi)置4種熒光通道和高清真彩色CCD，可對各種常用場景進(jìn)行高質(zhì)量成像！

 三、FOBI應(yīng)用案例

標(biāo)記Cy5.5、Cy7藥物

藥物偶聯(lián)熒光染料后，體外觀察是S要步驟。圖為FOBI整體熒光成像系統(tǒng)標(biāo)記Cy5.5、Cy7的藥物在體外成像的結(jié)果，中間為陰性對照。

將藥物用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，通過活體成像可判斷藥物的腫瘤靶向性。下圖為使用FOBI標(biāo)記Cy5.5的藥物靶向皮下實(shí)體腫瘤。

標(biāo)記DiD染料

使用DiD染料在體外對免疫細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，小鼠足墊注射后，成像觀察免疫細(xì)胞遷移至淋巴結(jié)。下圖為使用FOBI標(biāo)記DiD的免疫細(xì)胞遷移至淋巴結(jié)。

使用DiD染料在體外對干細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，尾靜脈回輸后，成像觀察到干細(xì)胞主要分布在肝臟和肺臟。下圖為使用FOBI標(biāo)記DiD的干細(xì)胞募集至肝臟和肺臟。

以上就是常用熒光染料介紹及FOBI的應(yīng)用案例展示。下期為大家整理關(guān)于活體成像技術(shù)的問題與難點(diǎn)。