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液相色譜做樣不出峰?從樣品到分析方法系統(tǒng)排查解決,讓色譜峰不再 “隱身”!

來(lái)源:浙江福立分析儀器股份有限公司 更新時(shí)間:2025-06-20 17:30:17 閱讀量:161
導(dǎo)讀:液相色譜做樣不出峰?從樣品到分析方法系統(tǒng)排查解決,讓色譜峰不再 “隱身”!

2025

液相色譜儀

分析時(shí)不出峰

LC5190低壓超高效液相色譜儀

LC5090Plus高效液相色譜儀

福立液相色譜儀系列

L75液相全能冠軍家族


在液相色譜分析中,色譜峰的出現(xiàn)是獲取有效數(shù)據(jù)的首要前提。無(wú)論是進(jìn)行痕量定量、多組分定性,還是后續(xù)的制備純化,整個(gè)分析流程都建立在清晰、穩(wěn)定色譜峰的基礎(chǔ)之上。


當(dāng)實(shí)驗(yàn)遭遇“不出峰”的困境,意味著從樣品注入到信號(hào)輸出的分析鏈條出現(xiàn)了斷裂。這種現(xiàn)象絕非單一原因所致,其根源可能隱藏在樣品制備、進(jìn)樣過(guò)程、流動(dòng)相輸送、色譜柱分離或檢測(cè)器響應(yīng)等任一環(huán)節(jié)。


系統(tǒng)性地從樣品、儀器到方法逐一排查,正是破解“不出峰”之謎的關(guān)鍵鑰匙。以下是常見(jiàn)原因及解決方案的詳細(xì)分析:


1

樣品問(wèn)題


樣品濃度過(guò)低

可能原因:樣品稀釋過(guò)度或原始濃度不足。


解決方案:提高進(jìn)樣量或濃縮樣品;確認(rèn)檢測(cè)器的靈敏度設(shè)置(如UV檢測(cè)器的AUFS值)。


樣品未溶解或穩(wěn)定性差

可能原因:溶劑選擇不當(dāng)(如流動(dòng)相與樣品溶劑不兼容),或樣品在流動(dòng)相中析出/降解。


解決方案:更換溶劑(如用流動(dòng)相溶解樣品);檢查樣品穩(wěn)定性(避光、低溫保存等)。



溶劑干擾(UV檢測(cè)器常見(jiàn))

可能原因:樣品溶劑在檢測(cè)波長(zhǎng)下有強(qiáng)吸收(如THF在低波長(zhǎng)下吸收強(qiáng)),導(dǎo)致基線(xiàn)抬高掩蓋峰。


解決方案:更換溶劑(如用甲醇、乙腈替代);調(diào)整檢測(cè)波長(zhǎng)避開(kāi)溶劑吸收峰。





2

進(jìn)樣問(wèn)題


未成功進(jìn)樣

可能原因:手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)未推到底;自動(dòng)進(jìn)樣器針頭堵塞或程序錯(cuò)誤。


解決方案:檢查進(jìn)樣針是否堵塞;確認(rèn)自動(dòng)進(jìn)樣器程序(如吸取體積、進(jìn)樣位置)。


樣品瓶問(wèn)題

可能原因:樣品瓶墊片穿刺過(guò)多次導(dǎo)致漏液;瓶?jī)?nèi)樣品量不足。


解決方案:更換新墊片;確保樣品體積足夠(通常需超過(guò)進(jìn)樣針插入深度)。



3

流動(dòng)相與泵系統(tǒng)問(wèn)題


流動(dòng)相配制錯(cuò)誤

可能原因:比例錯(cuò)誤(如有機(jī)相與水相顛倒)、pH值偏差。


解決方案:重新配制流動(dòng)相,核對(duì)比例和pH值。


泵流速異?;蛲A?/span>

可能原因:泵頭內(nèi)有氣泡、密封墊磨損、單向閥堵塞。


解決方案:用高流速(5 mL/min)沖洗泵;超聲清洗單向閥;更換密封墊。



流動(dòng)相未脫氣

可能原因:氣泡進(jìn)入檢測(cè)器,導(dǎo)致信號(hào)噪聲大或基線(xiàn)不穩(wěn)定。


解決方案:超聲脫氣或使用在線(xiàn)脫氣機(jī)。




4

色譜柱問(wèn)題


柱效喪失或污染

可能原因:長(zhǎng)期使用導(dǎo)致柱床塌陷或填料污染。


解決方案:用強(qiáng)溶劑沖洗(如95%乙腈);必要時(shí)更換新色譜柱。


色譜柱與樣品不匹配

可能原因:反相柱用于強(qiáng)極性化合物,或正相柱用于疏水性物質(zhì)。


解決方案:根據(jù)樣品性質(zhì)選擇合適色譜柱(如C18、HILIC等)。



柱溫異常

可能原因:柱溫箱溫度設(shè)置錯(cuò)誤(如高溫導(dǎo)致熱不穩(wěn)定化合物降解)。


解決方案:確認(rèn)柱溫設(shè)置,必要時(shí)降低溫度。




5

檢測(cè)器問(wèn)題


檢測(cè)波長(zhǎng)錯(cuò)誤(UV檢測(cè)器)

可能原因:未設(shè)置在樣品的最大吸收波長(zhǎng)。


解決方案:通過(guò)紫外掃描確定最佳波長(zhǎng),或使用多波長(zhǎng)檢測(cè)(如DAD檢測(cè)器)。


檢測(cè)器光源故障

可能原因:氘燈或鎢燈壽命耗盡。


解決方案:檢查燈能量,必要時(shí)更換光源。


流通池污染或氣泡

可能原因:池內(nèi)殘留顆?;驓馀菡趽豕饴?。


解決方案:用異丙醇或硝酸溶液沖洗流通池;輕敲流通池排出氣泡。




6

系統(tǒng)泄漏或管路堵塞


管路泄漏

可能原因:接頭未擰緊或色譜柱安裝不當(dāng),導(dǎo)致樣品未進(jìn)入檢測(cè)器。


解決方案:用紙巾檢查各接口是否滲液;重新安裝色譜柱。


保護(hù)柱或在線(xiàn)過(guò)濾器堵塞

可能原因:顆粒物積累導(dǎo)致背壓升高、流速降低。


解決方案:更換保護(hù)柱或清洗過(guò)濾器。




7

方法參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤


運(yùn)行時(shí)間過(guò)短

可能原因:峰保留時(shí)間超出預(yù)設(shè)的運(yùn)行時(shí)間。


解決方案:延長(zhǎng)分析時(shí)間,或通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定保留時(shí)間范圍。


積分參數(shù)不當(dāng)

可能原因:峰閾值(Threshold)設(shè)置過(guò)高,忽略小峰。


解決方案:降低積分閾值或手動(dòng)積分。




8

快速排查流程



具體排查流程

確認(rèn)樣品:用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣,若出峰則問(wèn)題在樣品。


檢查流動(dòng)相:更換新配制的流動(dòng)相,排除污染或比例錯(cuò)誤。


測(cè)試泵流速:用量筒測(cè)量泵的實(shí)際輸出流速。


旁路色譜柱:將色譜柱替換為兩通,觀察檢測(cè)器基線(xiàn)是否正常。


檢測(cè)器自檢:運(yùn)行燈能量測(cè)試或查看流通池透光率。



首先,檢查樣品,確認(rèn)濃度和溶解度,樣品過(guò)期或者樣品不穩(wěn)定;檢查進(jìn)樣步驟,手動(dòng)進(jìn)樣的話(huà)確認(rèn)針是否堵塞,自動(dòng)進(jìn)樣器檢查程序。


接著檢查流動(dòng)相配制是否正確,脫氣是否充分,泵的流速是否準(zhǔn)確;然后檢查色譜柱是否適用,是否有柱壓異常,必要時(shí)更換柱子。


檢測(cè)器方面,確認(rèn)波長(zhǎng)設(shè)置,檢查燈的使用壽命,流通池狀態(tài)。檢查系統(tǒng)是否有泄漏,特別是高壓部分。最后,確認(rèn)方法參數(shù)是否正確,運(yùn)行時(shí)間是否足夠,數(shù)據(jù)處理是否有誤。


通過(guò)逐步排查,通??啥ㄎ粏?wèn)題所在。若仍無(wú)法解決,建議聯(lián)系售后服務(wù):400-168-6988,進(jìn)行系統(tǒng)維護(hù)。



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浙江福立分析儀器有限公司成立于1998年,是一家專(zhuān)注于色譜質(zhì)譜研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè),是國(guó)家重點(diǎn)扶持的專(zhuān)精特新“小巨人”企業(yè),也是國(guó)產(chǎn)色譜儀器領(lǐng)軍企業(yè),公司擁有現(xiàn)代化的生產(chǎn)基地和省級(jí)企業(yè)研究院,致力于為客戶(hù)提供高效、精準(zhǔn)、可靠的分析儀器和解決方案。

公司聚焦色譜近三十年,從色譜零部件到整機(jī),全產(chǎn)業(yè)鏈的色譜研發(fā)布局,承擔(dān)并順利完成了科技部國(guó)家重大科學(xué)儀器專(zhuān)項(xiàng),突破色譜關(guān)鍵技術(shù),引領(lǐng)國(guó)產(chǎn)色譜技術(shù)發(fā)展邁入新的篇章。

2023年6月,蘇州納微科技股份有限公司(股票代碼:SH 688690)入股,攜手打造集色譜填料、分析儀器及整體解決方案于一體的色譜質(zhì)譜創(chuàng)新平臺(tái),雙方戰(zhàn)略合作邁入全新階段,開(kāi)啟色譜技術(shù)發(fā)展新征程。


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