高磷驅動：高磷環(huán)境通過激活氧化應激和鐵死亡（SLC7A11/GPX4軸抑制），促進鈣鹽沉積。

信號通路失控：CXCL5-TGF-β受體1、TLR4-NF-κB、NR4A3-糖酵解等通路推動成骨轉化。

表觀遺傳調(diào)控：乳酸誘導的組蛋白H3K18乳酰化直接激活成骨基因（如Phospho1）。

性別差異：雌激素通過PI3K/Akt通路抑制Runx2，保護絕經(jīng)前女性血管健康。

細胞選擇：大鼠主動脈VSMCs（如A7R5細胞系）或原代細胞，傳代≤5代以維持分化能力。

誘導試劑組合：β-甘油磷酸鹽（β-GP 10 mmol/L+氯化鈣（CaCl?2-6 mmol/L）模擬高磷血癥。

誘導時間：1-3周（鈣結節(jié)肉眼可見）。

慢性腎病模型：5/6腎切除聯(lián)合高磷飼料（CKD模型）。

急性模型：維生素D3（50萬單位/kg，皮下注射3天）或華法林誘導（150 mg/kg，皮下注射3周）。

基因編輯：CRISPR/Cas9敲除Arntl基因可加劇鈣化，而過表達則抑制成骨轉分化。

代謝干預：鐵死亡抑制劑（Ferrostatin-1）或乳酸脫氫酶抑制劑（FX-11）可逆轉鈣化。

動態(tài)監(jiān)測：活細胞成像追蹤鈣結節(jié)形成，單細胞測序解析異質性。

細胞接種：密度1×10^5 cells/孔，預鋪促貼壁試劑（如明膠等）防止細胞脫落。

培養(yǎng)基配制：基礎培養(yǎng)基+鈣化因子（上海富衡，WWL-Y030），嚴格無菌操作。

換液策略：每2天全量換液，換液時動作輕柔避免機械損傷已形成的鈣結節(jié)。

茜素紅染色：鈣結節(jié)呈橘紅色，適用于細胞模型。

Von Kossa染色：磷酸鹽沉積顯黑色，用于動物組織切片。

鈣含量測定：鄰-甲酚酞絡合法檢測總鈣濃度。

成骨標志物：Western blot檢測Runx2、ALP、骨鈣素表達。