在分子檢測領(lǐng)域，技術(shù)的革新與產(chǎn)品的優(yōu)化始終是推動行業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵力量。早期國內(nèi)凍干技術(shù)多用于制藥領(lǐng)域，分子診斷試劑凍干發(fā)展相對緩慢，PCR凍干試劑是指將PCR反應(yīng)所需的各種組分（包括DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTPs、MgCl2、緩沖液和引物等）進行凍干處理，制備成穩(wěn)定的粉末狀/凍干球制品。加水復(fù)溶后，即可直接進行PCR反應(yīng)。與傳統(tǒng)的液態(tài)PCR試劑相比，凍干試劑穩(wěn)定性強，便攜性、易用性高且可適配自動化設(shè)備，大大拓展了PCR技術(shù)在病原體快速診斷、基因檢測、法醫(yī)鑒定等領(lǐng)域真實場景的應(yīng)用范圍。
隨著政策鼓勵醫(yī)療資源下沉，持續(xù)推進基層衛(wèi)生工作，以及針對發(fā)展中國家和資源匱乏地區(qū)，尤其是廣闊海外市場的拓展，PCR凍干試劑的應(yīng)用范圍也將進一步擴大，它的運輸穩(wěn)定性和成本優(yōu)勢將發(fā)揮更大的作用，為疾病防控和公共衛(wèi)生事業(yè)做出重要貢獻。
翌圣生物提供優(yōu)質(zhì)可凍干原料—
讓核酸檢測更加高效、便捷、經(jīng)濟
凍干原料的篩選不是單純?nèi)サ舨豢蓛龈晌镔|(zhì)，原料選擇環(huán)節(jié)需要針對每一個組份進行篩選或調(diào)試。翌圣生物Zyme Editor?酶改造平臺通過理性設(shè)計和定向進化獲取性能優(yōu)異的酶原料，再結(jié)合儲液優(yōu)化、反應(yīng)buffer調(diào)試、凍干保護劑的篩選及組合測試、凍干參數(shù)的測定等，實現(xiàn)凍干產(chǎn)品性能不差于常規(guī)液體PCR試劑、凍干成品形態(tài)完整、儲存穩(wěn)定的RT-qPCR可凍干試劑。
凍干是通過冷凍干燥的方法將液體中的水分移除，是一個多步驟的過程。冷凍干燥主要包括預(yù)凍、退火、一次干燥和二次干燥等關(guān)鍵階段。精確調(diào)控每個步驟的條件及參數(shù)，對于確保酶制劑在凍干后的生物活性和穩(wěn)定性至關(guān)重要，這其中預(yù)凍階段的凍結(jié)溫度、一次干燥階段的崩解溫度和加熱速率和二次干燥階段的溫度和時間尤為重要。
表1. 凍干各個環(huán)節(jié)中的影響因素
可凍干反應(yīng)體系的調(diào)整
Buffer中不可含有可揮發(fā)和易氧化成分。
需對鹽離子濃度進行調(diào)試：過高可能造成凍干形態(tài)差；過低可能影響擴增性能。
凍干可能造成pH值變化，影響擴增性能，可針對凍干保護劑進行甘氨酸等添加劑的梯度添加測試，既可以起到緩沖pH的作用又是比較好的填充物。
凍干原料體系中的保護劑含量，針對不同體積的凍干，保護劑的使用量要相應(yīng)變化。
凍干對酶有一定損傷，可通過補酶量、增加底物dNTPs等進行凍干體系的最適條件測試。
凍干試劑溶解后，局部濃度極高，需要混勻，保證復(fù)溶試劑體系均勻。若擴散不均勻，反應(yīng)效率就會降低，CT值延后。此外，試劑濃度局部過高還會影響熒光信號的激發(fā)與采集，導(dǎo)致背景熒光強度過高。
產(chǎn)品推薦
Hifair Lyo-Ready I Multiplex One Step RT-qPCR Kit（UDG plus)（Cat#16645）
一種無甘油、即用型的分子診斷試劑，含有RT-qPCR反應(yīng)所需的所有組分以及凍干保護劑，使用 UDG-dUTP 防污染體系，能有效防止擴增產(chǎn)物氣溶膠污染的風(fēng)險。此外，提供參考凍干工藝、兼容多種凍干形式，既可作為常規(guī)液體PCR體系的開發(fā)原料，亦可作為凍干PCR體系的開發(fā)原料。
產(chǎn)品優(yōu)勢
凍干后依然保持酶活性完整，性能和液體試劑一樣；
采用基因改造的抗體法熱啟動 Taq 酶，靈敏度高，5 copies/T可穩(wěn)定檢出；
含引物探針的凍干球，在50℃熱加速33天，性能不受影響；
快速程序下性能不受影響，30min即可出結(jié)果；
引入了dUTP/UDG防污染系統(tǒng)，可有效防止氣溶膠污染。
凍干形態(tài)
圖2.原位凍干及凍干球圖片展示
結(jié)果：16645適用于原位凍干及凍干球凍干，原位凍干時凍干品處于管底部，且無塌陷；凍干球外觀潔白光滑有光澤，無明顯發(fā)黃、坍塌和收縮，且復(fù)溶迅速。
凍干前后性能比較
圖3. 16645液體試劑和其凍干球性能測試
結(jié)果：16645凍干后復(fù)溶的試劑性能依舊穩(wěn)定。
熱加速實驗后性能驗證
圖4. 16645凍干球性能及穩(wěn)定性測試
結(jié)果：將含HPIV引物探針的16645體系按說明書上凍干工藝和條件進行凍干，凍干球在50℃條件下加熱30天，與同批次剛出箱凍干球相比，擴增曲線峰形、Ct值、低濃度檢出率（1copy/uL，20個重復(fù)，檢出率均為100%）均沒有差異，凍干球穩(wěn)定性好。
IVD RDC服務(wù)
翌圣生物深耕分子酶領(lǐng)域多年，除了一如既往提供高標準及穩(wěn)定的原料外，也基于IVD產(chǎn)業(yè)鏈展開思考，以期產(chǎn)業(yè)鏈上下游以更好的合作模式實現(xiàn)產(chǎn)品快速產(chǎn)出，讓IVD企業(yè)釋放更多產(chǎn)能服務(wù)于核心業(yè)務(wù)。因此，翌圣生物設(shè)立了IVD RDC（IVD Research Development Center），通過深度參與IVD客戶的研發(fā)與工藝反應(yīng)體系的改進，提供更好的服務(wù)與解決方案，幫助客戶解決痛點問題，簡化IVD生產(chǎn)流程，加速產(chǎn)品的商業(yè)化。
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翌圣生物
翌圣生物科技（上海）股份有限公司成立于2014年，是一家聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事核苷酸、蛋白、細胞和類器官四大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)。公司兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)和規(guī)?；a(chǎn)能力，核心產(chǎn)品數(shù)量達數(shù)千種，覆蓋分子克隆、qPCR、NGS、體外轉(zhuǎn)錄、抗體、蛋白純化及分析、細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、報告基因檢測和類器官等多種系列，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
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