如何判斷細胞被污染？

第一步——用肉眼觀察培養(yǎng)基狀態(tài)

先看培養(yǎng)細胞的器皿有沒有裂縫，如果有則污染幾率非常大。

再看培養(yǎng)基顏色，正常情況下，培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色，如果是橙色或黃色，則可能是污染或者細胞過密。

最后，觀察培養(yǎng)基是否澄清，如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細胞凋亡，如果培養(yǎng)基很渾濁，甚至出現絮狀物，則污染幾率非常大。

圖：肉眼可見渾濁有絮狀物的培養(yǎng)基，細胞已被污染

第二步——靜置細胞 1～2 h，使用顯微鏡觀察

菌類污染通常分為細菌、真菌霉菌和支原體，形態(tài)特征如下：

五種可能會出現污染的場景及解決方案

▲ 細胞實驗過程中所涉及的試劑及耗材沒有消毒完全

首先對所有可清洗的設備和容器進行清潔，以清除任何污垢或碎屑，接著使用高壓滅菌器或化學消毒劑進行正確滅菌及消毒操作，玻璃器皿應倒置存放，塑料制品應存放在干凈、干燥的地方。

▲ 超凈臺臟亂，操作空間里還有廢物

在超凈臺內擺放過多的器材容易阻擋氣道，還會阻礙紫外線對操作空間的滅菌。所以，超凈臺只擺放當次操作需要的用具，其余物品在操作結束后應及時取出。操作臺面的物品應按照 “新月形” 布局進行調整（如下圖）。

圖：合理布置的超凈臺

▲ 細胞處理方式不當，產生氣泡引入微生物

細胞培養(yǎng)瓶中的氣泡可能導致培養(yǎng)基污染、細胞生長抑制、氧氣供應不足、二氧化碳積累和細胞貼壁困難。進行細胞培養(yǎng)時，應定期檢查培養(yǎng)瓶以監(jiān)測氣泡情況，并輕輕旋轉或使用過濾器來減少氣泡。

▲ 培養(yǎng)箱中補充蒸餾水時容易導致污染

如果不取出承液盤而直接倒入蒸餾水，污染物依舊會殘留。應該定期（每周 1-2 次）將承液盤整體移出并清空，然后用 70% 的酒精或異丙醇溶液擦拭消毒，待干燥后添加無菌蒸餾水，再放回培養(yǎng)箱內。

圖：正確更換蒸餾水

▲ 培養(yǎng)箱長時間不清理造成污染

由于培養(yǎng)箱中高溫高濕的環(huán)境非常適于微生物繁殖，且生長速度較快，長時間不進行箱體內部的清潔消毒會容易造成污染和交叉感染。因此，要對培養(yǎng)箱的內部腔體進行定期清洗、消毒操作。