冠狀病毒和新冠狀病毒肺炎COVID-19

圖 1

2019-nCoV 病毒顆粒渲染圖

冠狀病毒是屬于冠狀病毒科-網(wǎng)巢病毒目的一種包膜型正義RNA病毒，廣泛存在于人類和其他哺乳動物體內(nèi)。這些病毒是帶有正單鏈RNA基因組和螺旋對稱的核衣殼的包膜病毒。冠狀病毒的基因組大小大約在26到32千堿基之間，是RNA病毒中ZD的一種。

COVID-19 檢測的RT-QPCR 工作流

逆轉(zhuǎn)錄QPCR(RT-QPCR)結(jié)合RT-PCR和QPCR，通常用于檢測呼吸道分泌物中的致病病毒。

臨床呼吸道樣本或其他可接受的樣本，并按以下步驟進(jìn)行測試。(圖2)

圖 2 

COVID-19的RT-QPCR工作流

PIPETMAX 和 RT-QPCR 的自動化

Gilson PIPETMAX^?全自動液樣平臺消除了液樣轉(zhuǎn)移的人為錯(cuò)誤風(fēng)險(xiǎn)。單次液樣操作量程范圍為1μL -1200μL，可以同時(shí)運(yùn)行1至8個(gè)通道?？梢苿邮酵斜P能夠適配96和384孔板。(圖 3) 雙在線移液頭可以隨時(shí)自動切換步驟所需的不同量程，在運(yùn)行中移液頭無需硬件更換。如果選配更多的移動托盤，可以滿足在運(yùn)行方法的同時(shí)進(jìn)行下一輪配置，節(jié)約時(shí)間。（圖 4）

圖 3 

PIPETMAX^? 和TRILUTION^?micro軟件

圖 4

PIPETMAX 移動托盤

Pipetmax 的特點(diǎn)

PIPETMAX^? 是一套理想的高通量生物分析自動化液樣處理方案。桌面式的尺寸可以輕松地適配任何實(shí)驗(yàn)室。通過外置式UV/HEPA系統(tǒng)，能夠滿足不同實(shí)驗(yàn)規(guī)范的需求。PIPETMAX^?可以提升操作人員的精確度、重現(xiàn)性，以及不同病毒樣品之間的一致性。

?PIPETMAX^? 可以消除用戶間的誤差

?保護(hù)操作人員遠(yuǎn)離病原體

?采用Gilson PIPETMAN^? 技術(shù)，確保JZ度

?DIAMOND 帶濾芯吸嘴(圖 5)可以防止氣溶膠污染

?一套真正意義上適合任意試劑、試劑盒及方法的開放系統(tǒng)

RT-QPCR 工作流

核酸提取

RT-QPCR的實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增結(jié)果取決于樣品模板RNA的質(zhì)量和總量。在進(jìn)行樣品測試前，應(yīng)該對RNA提取的回收率和純度進(jìn)行驗(yàn)證。 

根據(jù)商品化的提取試劑盒制造商的建議方法提取樣品，可以得到高度純化的RNA。

質(zhì)量控制

由于RT-PCR的敏感性，所有檢測應(yīng)該采用嚴(yán)格的質(zhì)量控制和質(zhì)量保證流程。所有移液吸嘴均僅使用帶濾芯型號。（圖5）檢測控制應(yīng)與所有測試樣品同時(shí)進(jìn)行。

圖5

Gilson 易拉裝吸嘴（帶濾芯）

RT-QPCR實(shí)驗(yàn)

RT-QPCR儀的參數(shù)(AB 7500 Fast DX)。

混合總管和孔板配置

TaqPath? 一步法RT-qPCR 混合總管

添加樣品模板

小心地加入5.0 μL 樣品至樣品孔。

添加對照模板

加入5 μL的nCoVPC(CDC 陽性對照) RNA 模板至樣品孔。

數(shù)據(jù)分析及結(jié)果

運(yùn)行完成后，按照儀器廠家的說明對數(shù)據(jù)進(jìn)行保存和分析，并在CDC的指導(dǎo)下對數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步的分析和解讀。

其他自動化應(yīng)用

QPCR方法，尤其是使用TaqMan探針或類似的熒光雜交探針方法，被廣泛的應(yīng)用于各類病原體檢測。（圖6）

圖 6

常規(guī)病原體檢測實(shí)驗(yàn)

從發(fā)表報(bào)道中看，利用磁珠技術(shù)對腸道病毒、乙型肝炎、丙型肝炎、Epstein-Barr病毒、皰疹病毒、人乳頭瘤病毒、乙型流感和SARS病毒的核酸檢測方法已經(jīng)實(shí)現(xiàn)自動化。 

總結(jié)

Gilson 的不同液樣處理產(chǎn)品，例如 PIPETMAX 自動液樣平臺，可以和COVID-19疾病中RT-QPCR工作流結(jié)合，滿足自動化需求。不斷增長的檢測量以及檢測方法對提GX率以降低成本并保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有了越來越高的要求，因此分子診斷實(shí)驗(yàn)室也向著自動化、集成式、用戶操作降低的方向不斷發(fā)展。 

Gilson 自動化液樣處理產(chǎn)品可應(yīng)用于樣品處理的各個(gè)流程，包括分析前的樣品處理、核酸提取、PCR實(shí)驗(yàn)，具有寬泛的自動化和靈活度，提升了測試效率和標(biāo)準(zhǔn)化。(圖 7)

圖 7

分子診斷和篩選應(yīng)用中不同級別的自動化方案

*本文中的RT-QPCR流程參考于美國CDC在2020年2月4日發(fā)布的指引，由于情況的不斷變化可能與實(shí)際環(huán)境的操作流程有所不同。本文展示了PIPETMAX可以被用于協(xié)助完成RT-QPCR方法。