——高性能的PCR增強劑

為提高含高GC含量或連續(xù)多個A/T的復雜基因的PCR擴增效率及擴增特異性，科研人員通常會嘗試在PCR反應體系中添加增效劑。翌圣生物現(xiàn)為廣大科研人員提供質(zhì)量高、適用性廣的兩種PCR增效劑：甜菜堿與海藻糖。

 

甜菜堿

 

甜菜堿是一種從甜菜中發(fā)現(xiàn)的生物堿，是膽堿氧化代謝的終產(chǎn)物，參與甲硫氨酸（蛋氨酸）生物合成路徑，是非常重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。翌圣生物提供的甜菜堿有兩類，鹽酸甜菜堿和甜菜堿水合物，后者分子式為C5H11NO2 H2O，是分子生物學級別，純度（TLC）≥99%，可用于分子生物學實驗。

 

產(chǎn)品介紹

 

翌圣生物是在工具酶及其反應輔助試劑方面極具經(jīng)驗，確保原裝進口高品質(zhì)甜菜堿，并大量現(xiàn)貨，可保證批次間產(chǎn)品的穩(wěn)定性。該產(chǎn)品可作為原料用于PCR、RT-PCR、qPCR等實驗反應優(yōu)化的添加劑成分，大大改善擴增效率和擴增特異性、改善逆轉(zhuǎn)錄效率等。

 

甜菜堿特點

 

1. 甜菜堿可幫助DNA聚合酶順利通過DNA某些復雜二級結(jié)構(gòu)，防止DNA聚合酶的從模板DNA中解離。DNA局部區(qū)域因含有多個復雜堿基（Py-G-C），會促使DNA聚合酶的停滯，最終導致DNA聚合酶停止有效延伸。而甜菜堿可提高DNA小溝中富含鳥嘌呤和胞嘧啶區(qū)域的鳥嘌呤和胞嘧啶的水合作用，影響DNA分子結(jié)構(gòu)，改變DNA靈活性，幫助DNA聚合酶沿著DNA模板延伸[1]。

2. 甜菜堿可消除變性溫度對堿基的依賴性。濃度依賴性降低高GC含量序列的Tm，并使PCR兩引物的Tm相接近，最終降低DNA Tm值[2]。

3. 高濃度的甜菜堿溶液可穩(wěn)定DNA-蛋白復合物。

4. 在逆轉(zhuǎn)錄溫度條件下，甜菜堿可減少RNA二級結(jié)構(gòu)的形成。在甜菜堿和海藻糖聯(lián)合用于逆轉(zhuǎn)錄實驗時，甜菜堿減少RNA分子內(nèi)復雜二級結(jié)構(gòu)的形成，降低RNA溶解溫度；海藻糖穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)錄酶，保持逆轉(zhuǎn)錄酶活性。通過二者聯(lián)合，確保更長cDNA的合成長度[3]。

 

主要應用

 

1. 可應用于DNA的測序反應實驗中，提升含有重復序列(連續(xù)多個A或T)的測序精準性。

2. 提升長片段DNA的PCR成功率。

3. 適用于復雜模板的PCR擴增，如高GC含量DNA的PCR擴增。

4. 適用于某些粗糙模板的直接測序，如經(jīng)NaOH溶液裂解的細胞裂解物。

5. 適用于較長cDNA的逆轉(zhuǎn)錄反應。

6. 作為LAMP環(huán)介導等溫擴增的添加劑。

 

甜菜堿參數(shù)

 

中文別名（Chinese Synonym）	甜菜堿一水合物，一水甜菜堿，三甲基甘氨酸一水合物
英文別名（English Synonym）	Betaine monohydrate;(Carboxymethyl) trimethylammonium hydroxide monohydrate
CAS號（CAS NO.）	590-47-6
分子式（Formula）	C5H11NO2 H2O
分子量（Molecular Weight）	135.16g/mol
外觀（Appearance）	晶體粉末
純度（Purity）	≥99%
溶解性（Solubility）	溶于水，可配置成10%水溶液
結(jié)構(gòu)式（Structure）

 

溶液配制

 

溶于水。濃度為10%水溶液，質(zhì)量體積比。溶液無色透明。

 

參考文獻

 

[1]. Mytelka DS,Chamberlin MJ. Analysis and suppression of DNA polymerase pauses associated with a trinucleotide consensus. Nucleic Acids Res.1996 Jul 15;24(14):2774-81.

[2]. Rees WA,Yager TD,Korte J,von Hippel PH. Betaine can eliminate the base pair composition dependence of DNA melting. Biochemistry.1993 Jan 12;32(1):137-44.

[3]. Spiess AN,Ivell R. A highly efficient method for long-chain cDNA synthesis using trehalose and betaine. Anal Biochem.2002 Feb 15;301(2):168-74.

 

相關鏈接

 

海藻糖在分子生物學實驗中的應用可參看：分子級別海藻糖（Trehalose）的特點及在分子實驗中的應用——高效的酶穩(wěn)定劑

 

訂購信息

 

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	價格（元）
60391ES60	Betaine 甜菜堿（分子生物學級別）	100g	286.00
60391ES76	Betaine 甜菜堿（分子生物學級別）	500g	956.00