蜂蜜中喹諾酮類(lèi)藥物多殘留的檢測(cè) 

SPE-UPLC-MS/MS法

喹諾酮類(lèi)藥物是人工合成的抗菌藥物，因其價(jià)格低廉、抗菌作用強(qiáng)被廣泛用于治療畜禽動(dòng)物的細(xì)菌感染疾病。但人體食用含有該類(lèi)藥物的畜禽產(chǎn)品后，會(huì)引起人體分泌系統(tǒng)紊亂、神經(jīng)系統(tǒng)受損，對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害。因此，國(guó)家規(guī)定了畜禽產(chǎn)品中喹諾酮類(lèi)化合物的Z高殘留限量。

參考《GB 31657.2-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 蜂產(chǎn)品中喹諾酮類(lèi)藥物多殘留的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，建立了SPE-UPLC-MS/MS法，可測(cè)定蜂蜜中喹諾酮類(lèi)藥物多殘留。本方案使用磷酸鹽緩沖液提取，ProElut^? PLS凈化，Endeavorsil C18色譜柱分離檢測(cè)，定量限與標(biāo)準(zhǔn)方法一致，回收率在80%-110%之間。

本方案與GB 31657.2-2021相比，增加30%甲醇水淋洗，這樣可以更好的除去雜質(zhì)，提高回收率，同時(shí)，洗脫液由之前的甲酸甲醇、乙酸乙酯洗脫，更換為氨水甲醇洗脫，以此減少氮吹對(duì)目標(biāo)物的影響，進(jìn)而提高回收率和靈敏度。

本方案適用蜂蜜中喹諾酮類(lèi)藥物多殘留的檢測(cè)。

(1) 喹諾酮類(lèi)混標(biāo)儲(chǔ)備液：由標(biāo)準(zhǔn)品部提供，濃度100μg/mL，溶于甲醇。(Cat.#: 47944)

(2) 喹諾酮類(lèi)混標(biāo)中間液Ⅰ：準(zhǔn)確吸取適量喹諾酮類(lèi)混標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋并定容，配置成濃度為1μg/mL的混標(biāo)中間液Ⅰ。

(3) 喹諾酮類(lèi)混標(biāo)中間液Ⅱ：準(zhǔn)確吸取適量喹諾酮類(lèi)混標(biāo)中間液Ⅰ，用甲醇稀釋并定容，配置成濃度為0.1μg/mL的混標(biāo)中間液Ⅱ。

取試樣2g，于50mL離心管中，加磷酸鹽緩沖液^*20mL，渦旋1min，振蕩10min, 10000r/min離心5min，取上清，備用。

*磷酸鹽緩沖液：取十二水磷酸氫二鈉7.16g，二水磷酸二氫鈉3.12g，加水800mL使溶解，用磷酸調(diào)pH至3.0，用水稀釋至1000mL。

ProElut PLS 200mg/6mL (Cat.#: 68012)

(1)活化：用5mL甲醇和5mL水活化；

(2)上樣：備用液全部過(guò)柱，棄去流出液；

(3)淋洗：依次用5mL水，5mL 30%甲醇水淋洗，真空抽干5min，棄去流出液;

(4)洗脫：加入5mL 5%氨水甲醇洗脫，并收集洗脫液；

(5)重新溶解：將洗脫液在40℃水浴下氮吹近干(剩余大約0.1mL)，用5%乙腈甲酸水^*定容到1mL, 混勻，過(guò)Nylon膜(Cat.#: 37177)，上機(jī)分析。 

^*5%乙腈甲酸水: 取乙腈5mL，加入0.1%甲酸溶液95mL，混勻。

取經(jīng)提取和凈化空白試料，加入適量標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，用5%乙腈甲酸水定容1mL，過(guò)Nylon膜(Cat.#: 37177)，上機(jī)分析。

(1) UPLC條件

色譜柱：Endeavorsil^? C18 50x2.1mm, 1.8μm (Cat.#:87002)

流速：0.3mL/min

進(jìn)樣量：10μL

柱溫：35℃

流動(dòng)相：A: 0.1%甲酸水  B:甲醇

(2) 質(zhì)譜條件

電離模式：ESI

掃描方式：正離子掃描

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

電噴霧電壓：5500V

霧化氣壓力：50psi

輔助氣壓力：50psi

氣簾氣壓力：20psi

離子源溫度：500℃