------支原體檢測、預(yù)防、去除，一步到位！

支原體   

支原體（Mycoplasma）又稱霉形體，是目前發(fā)現(xiàn)的最小、最簡單的原核生物，直徑大小0.1~0.3μm，能通過濾膜且呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠在細(xì)胞培養(yǎng)過程中易受到支原體污染，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：支原體污染在儲(chǔ)存細(xì)胞系中發(fā)生率約為 15%-35%，在生物制藥行業(yè)中約為0.44%-6.70% ^[1]。

 

 

  

圖1：支原體的形態(tài)

 

支原體污染的影響

細(xì)菌和真菌污染相對(duì)較容易檢測、預(yù)防和去除，但支原體造成的污染卻很難察覺，即使生長密度高達(dá) 10⁷-10⁹CFU/ml，也很難有污染跡象（比如溶液渾濁、pH變化等）。支原體污染后能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生多種變化（見圖2）。

      

圖2：受支原體污染后細(xì)胞出現(xiàn)的相關(guān)狀態(tài)的改變
 

支原體污染解決方案——Yeasen三位一體幫您解決細(xì)胞支原體污染問題

翌圣生物（YEASEN）經(jīng)過匠心開發(fā)并多次的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，推出了清除支原體的試劑，包括：支原體檢測系列、支原體清除（培養(yǎng)箱、水浴鍋、超凈臺(tái)和細(xì)胞房）和支原體預(yù)防相關(guān)等。 

 

圖3：yeasen支原體污染整體解決方案
 

一、支原體檢測

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

一步法恒溫支原體檢測：

Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，無需特殊儀器，1h就可以通過顏色判定檢測結(jié)果。檢測靈敏度是普通恒溫檢測的1000倍并添加了防污染組分，杜絕假陽性現(xiàn)象的發(fā)生。

圖4：一步法支原體檢測操作流程

PCR法支原體檢測：

Yeasen巢式PCR支原體檢測不同于普通的PCR檢測方法，將原有的1對(duì)引物提高至3對(duì)引物，針對(duì)支原體16s和23s保守區(qū)進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確度和靈敏度的雙重突破。 

圖5: PCR法擴(kuò)增含不同濃度支原體樣品獲得的凝膠電泳圖

qPCR法支原體檢測：
 

Yeasen的qPCR支原體檢測試劑盒（探針法）是基于EP藥典推薦NAT法推出超簡便快捷檢測方法，克服了普通PCR靈敏度低和培養(yǎng)法耗時(shí)久的問題，將結(jié)果精準(zhǔn)度和使用便捷度有了質(zhì)的提升！3h內(nèi)可快速、簡便檢測支原體存無，優(yōu)于培養(yǎng)法的28天耗時(shí)檢測過程。

圖6: qPCR法測試流程

產(chǎn)品數(shù)據(jù)

靈敏度和擴(kuò)增效率測試

10 CFU/mL口腔支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果          
 

               
10 CFU/mL肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果

10 CFU/mL豬鼻支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果                        


10 CFU/mL精氨酸支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果

 試劑盒擴(kuò)增效率：101-108 copies/uL               
 

擴(kuò)增效率≥96%，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.996      
                      

不同檢測方法對(duì)比

產(chǎn)品名稱	所需設(shè)備	檢測支原體種類	所需時(shí)間	檢測靈敏度	結(jié)果觀察
LAMP等溫?cái)U(kuò)增法	PCR儀或水浴鍋	27種	1h	103	肉眼觀察
巢式PCR法	PCR儀和電泳儀	13種	3h	10個(gè)拷貝	凝膠觀察
qPCR法	PCR儀和定量PCR儀	105種	3h	單拷貝	Ct值判定

 

 

二、支原體去除

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

翌圣MycAway^TM 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過抑制支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來達(dá)到支原體清除效果且對(duì)細(xì)胞無傷害，最大程度上挽救您的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來的損失。
 

     

圖6：細(xì)胞去除效果的展示

支原體去除試劑的特點(diǎn)：

毒性低：對(duì)細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞活力檢測和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等；

穩(wěn)定性強(qiáng)：-20℃試劑能較長時(shí)間保存并保持高效能；

操作簡單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；

起效快：“立竿見影”、最快3天即可見效；

去除范圍廣：能去除實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)支原體類型

圖7：支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測圖示
 

 

三、支原體預(yù)防

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

提前做好支原體預(yù)防工作是降低支原體感染幾率的最有效的方法，yeasen開發(fā)的支原體預(yù)防系列產(chǎn)品，具有操作簡單、方便、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。

 

TIPS

1）源頭預(yù)防

對(duì)于新引進(jìn)或者原代分離的細(xì)胞，需要進(jìn)行支原體檢測，檢測結(jié)果為陰性才可進(jìn)入無菌室培養(yǎng)

2）實(shí)驗(yàn)操作流程規(guī)范

穿戴細(xì)胞房專用實(shí)驗(yàn)服并及時(shí)處理廢棄物

3）污染物的處理

一旦發(fā)現(xiàn)已經(jīng)污染支原體的細(xì)胞，滅活后棄之并更換新的細(xì)胞，避免支原體大規(guī)模散播。

4）無菌室的維護(hù)

無菌室應(yīng)每周做一次消毒，用0.1%新潔爾滅擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角，開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌半小時(shí)。每月做一次全面清潔工作，先用去污染劑洗刷地面，再用含1%新潔爾滅的清水清洗地面，最后再滅菌30min。

 

文獻(xiàn)引用

[1] Fratz-Berilla EJ, Angart P, Graham RJ, et al. Impacts on product quality attributes of monoclonal antibodies produced in CHO cell bioreactor cultures during intentional mycoplasma coNATmination events. Biotechnol Bioeng. 2020;117(9):2802-2815.

 

 

訂購信息

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

類別	產(chǎn)品	貨號(hào)	規(guī)格
檢測	MycAway™  -Color One-Step Mycoplasma Detection Kit Hot MycAway™ 一步法快速支原體檢測試劑盒	40612ES25/60	25/100 T
	MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit  Hot MycAway™ 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法）	40618ES25/60	25/100 T
	GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit    GMyc-PCR支原體檢測試劑盒	40601ES10/20	10/20 assays
去除	MycAway™  Spray (Ready-to-use)  支原體噴霧劑（即用型）	40605ES02/03	1/2×500 mL
	MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原體去除試劑（1000×）	40607ES03/08	1/5×1 mL
預(yù)防	MycAway™Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention Reagent MycAway™ 支原體預(yù)防試劑（2000×）	40608ES03/08	1/5×1 mL
	MycGuard™ -1 Solution (100×) 細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤1號(hào)消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防）	40609ES60	100 mL
	MycGuard™-2 Solution (500×)  水浴鍋2號(hào)消毒衛(wèi)士（支原體污染預(yù)防）	40610ES60	100 mL