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2025-01-10 10:49:44德國(guó)伯克勒標(biāo)簽: “德國(guó)伯克勒標(biāo)簽”（Bruker Label）通常指的是德國(guó)布魯克（Bruker）公司旗下產(chǎn)品或技術(shù)的標(biāo)識(shí)。布魯克公司是一家在科學(xué)儀器領(lǐng)域具有全球影響力的企業(yè)，專(zhuān)注于提供高性能的分析、測(cè)試和測(cè)量解決方案。其產(chǎn)品線廣泛，涵蓋核磁共振（NMR）、質(zhì)譜（MS）、X射線衍射（XRD）、光學(xué)光譜儀等多個(gè)領(lǐng)域。德國(guó)伯克勒標(biāo)簽代表了高品質(zhì)、高精度和前沿技術(shù)的結(jié)合，是科研和工業(yè)領(lǐng)域用戶(hù)信賴(lài)的選擇。該公司不斷創(chuàng)新，致力于推動(dòng)科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展。

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德國(guó)伯克勒標(biāo)簽問(wèn)答

2024-01-19 16:09:13Trx標(biāo)簽蛋白：深度解析與常見(jiàn)問(wèn)題解答: 硫氧還蛋白（Thioredoxins）是一系列廣泛存在于生物體內(nèi)的氧化還原酶，它能通過(guò)置換硫代二硫化物來(lái)減少二硫鍵的結(jié)合。常用作融合表達(dá)標(biāo)簽的硫氧還蛋白A(TrxA), 分量為11.6kDa，來(lái)源于大腸桿菌。 TrxA標(biāo)簽最獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)是它的熱穩(wěn)定性。TrxA本身不作為親和標(biāo)簽來(lái)進(jìn)行重組蛋白優(yōu)化，而是通過(guò)在高溫條件下將雜蛋白變性去除而重組蛋白得以保存。TrxA也具有極好的促溶效率，用作促溶標(biāo)簽時(shí)可將重組蛋白的可溶性表達(dá)從12%提高至95%。下面是針對(duì)trx標(biāo)簽常見(jiàn)問(wèn)答解析： ①trx標(biāo)簽蛋白序列 MSDKIIHLTD DSFDTDVLKA DGAILVDFWA EWCGPCKMIA PILDEIADEY QGKLTVAKLN IDQNPGTAPK YGIRGIPTLL LFKNGEVAAT KVGALSKGQL KEFLDANLAG SGSGHMHHHH HHSSGLVPRG ②帶有trx標(biāo)簽會(huì)不會(huì)影響蛋白的抗原性有可能的，trx標(biāo)簽是比較大的融合標(biāo)簽，有20多KDa，非常有可能改變蛋白的抗原決定簇。一般為了不影響蛋白的功能，會(huì)在trx標(biāo)簽和目標(biāo)蛋白之間加一個(gè)酶切位點(diǎn)，比如腸激酶的位點(diǎn)DDDDK，把trx標(biāo)簽去除掉。 ③TRX標(biāo)簽蛋白怎么純化一般這個(gè)載體中都會(huì)有His 標(biāo)簽，直接用鎳柱純化即可 ④常見(jiàn)的蛋白標(biāo)簽有哪些？有什么特點(diǎn)？常見(jiàn)的蛋白標(biāo)簽有His-Tag、FLAG-Tag、HA-Tag、Myc-Tag、SUMO-Tag…… His-Tag主要應(yīng)用：蛋白純化優(yōu)選，也可用于檢測(cè)。特點(diǎn)：? 分子量小，不影響目的蛋白的可溶性、結(jié)構(gòu)和功能。? 可在非離子型表面活性劑存在/變性條件下純化，前者在純化疏水性強(qiáng)的蛋白得到應(yīng)用，后者在純化包涵體蛋白時(shí)表現(xiàn)突出。? 可應(yīng)用于多種表達(dá)系統(tǒng)，純化的條件溫和。? 可以和其它的親和標(biāo)簽一起構(gòu)建雙親和標(biāo)簽。? 免疫原性相對(duì)較低。 FLAG-Tag主要應(yīng)用：廣泛的應(yīng)用于蛋白表達(dá)、純化、鑒定、功能研究及其蛋白相互作用等相關(guān)領(lǐng)域，在真核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)效率更高。特點(diǎn)：? 分子量小，不影響融合蛋白功能，比同類(lèi)標(biāo)簽更具親水性。? 目的蛋白可直接通過(guò)FLAG標(biāo)簽進(jìn)行親和層析，此層析為非變性純化，可以純化有活性的融合蛋白且純化效率高。? 可以被抗FLAG抗體所識(shí)別，便于通過(guò)WB、ELISA等方法對(duì)含有FLAG標(biāo)簽的融合蛋白進(jìn)行檢測(cè)、鑒定。? 融合在目的蛋白N端的FLAG標(biāo)簽，其可以被腸激酶切除（DDDK），從而得到特異的目的蛋白。更多關(guān)于蛋白標(biāo)簽詳情可以參看：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag 義翹神州：蛋白與抗體的專(zhuān)業(yè)引領(lǐng)者，歡迎通過(guò)百度搜索“義翹神州”與我們?nèi)〉寐?lián)系。

2024-01-11 16:24:37深入了解GST標(biāo)簽：作用機(jī)理、優(yōu)勢(shì)與劣勢(shì)以及常見(jiàn)問(wèn)題解析: 胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）是由多基因編碼、具有多種功能的超家族酶，GST廣泛存在于細(xì)菌、真菌、動(dòng)物和植物體內(nèi)的一種解-毒系統(tǒng)中，其專(zhuān)一性催化還原型的谷胱甘肽巰基與其他化合物的親電基團(tuán)，生成谷胱甘肽衍生物，具有降低化學(xué)反應(yīng)活性的效應(yīng)。在各種生物體內(nèi)，GSTs是由多個(gè)基因編碼的、具有多種功能的一組同工酶，分子量為23∽29kDa，由200∽240個(gè)氨基酸組成。有膜結(jié)合和胞液兩種形式，以胞液GSTs為主。根據(jù)蛋白酶的一級(jí)序列、免疫原性、酶動(dòng)力學(xué)和三、四級(jí)結(jié)構(gòu)的性質(zhì)，GST又可以分為多個(gè)亞類(lèi)。 GST標(biāo)簽作用機(jī)理 1）應(yīng)用于原核表達(dá)，作為一種高度可溶的蛋白，能增加外源蛋白的可溶性，在大腸桿菌中大量表達(dá)，起到提高表達(dá)量的作用； 2）GST標(biāo)簽蛋白可在溫和、非變性條件下洗脫，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性； 3）GST在變性條件下會(huì)失去對(duì)谷胱甘肽樹(shù)脂的結(jié)合能力，因此不能在純化緩沖液中加入強(qiáng)變性劑（如：鹽酸胍或尿素等）； 4）GST融合蛋白已經(jīng)成為分子生物學(xué)領(lǐng)域的基本工具，其廣泛用于研究蛋白質(zhì)-DNA及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用，也可作為抗原用于免疫學(xué)或疫苗的研究。 5）GST標(biāo)簽的切除：①凝血酶：一種應(yīng)用很廣泛的蛋白酶，主要特點(diǎn)是經(jīng)凝血酶切割后的重組蛋白在切割位點(diǎn)的C端會(huì)保留兩個(gè)氨基酸殘基。凝血酶可以識(shí)別兩種類(lèi)型的氨基酸序列，分別為X4-X3-P-P[K]-X1?-X2?和X2-R[K]-X1?，凝血酶對(duì)前一種序列的識(shí)別效果更為理想。②Xa因子：Xa因子是一種較高效的去除融合標(biāo)簽的工具酶，可特異性識(shí)別I-E[D]-G-R-X1序列，并將融合標(biāo)簽從其C末端切除。 GST標(biāo)簽純化蛋白的優(yōu)劣勢(shì)：優(yōu)勢(shì)：1. 適用范圍廣，可在不同宿主中表達(dá)；2. 增強(qiáng)外源蛋白可溶性；3. 可用不同的蛋白酶進(jìn)行去除；4. 有助于保持蛋白的抗原性與生物活性，提高外源蛋白的穩(wěn)定性；5. 特異性好，純化方便且溫和。劣勢(shì)：1. 分子量較大，可能會(huì)影響蛋白質(zhì)的功能和下游實(shí)驗(yàn)；2. 僅能純化可溶性蛋白，若蛋白不可溶，則很難用變性的方法純化。 GST標(biāo)簽純化蛋白常見(jiàn)問(wèn)題解析：問(wèn)題一：GST 融合蛋白的產(chǎn)量低或無(wú)法檢測(cè)到1、原因：融合蛋白形成包涵體解決方案：①采用低溫（16∽25℃）培養(yǎng)細(xì)胞，或者誘導(dǎo)過(guò)程中降低誘導(dǎo)劑的終濃度至1mM，或者縮短誘導(dǎo)時(shí)間。②純化前需要完全融解和復(fù)性。將裂解液與GST標(biāo)簽蛋白純化瓊脂糖凝膠在搖床上輕搖2個(gè)小時(shí)或者更長(zhǎng)時(shí)間（過(guò)夜），充分結(jié)合后上柱純化。 2、原因：融合蛋白可能失活解決方案：采用溫和的超聲破碎條件或者其他的裂解條件，比如采用溶菌酶。 3、原因：融合蛋白被蛋白酶降解解決方案：在裂解步驟或洗滌步驟加入適量的蛋白酶抑-制劑，如PMSF。 4、原因：融合蛋白不能有效地從樹(shù)脂上洗脫下來(lái)解決方案：①延長(zhǎng)洗脫時(shí)間，或者增加洗脫液中還原性谷胱甘肽的濃度至15mM或者更高調(diào)節(jié)洗脫液的pH值至8.0∽9.0。②在洗脫液中加入Triton X-100（終濃度0.1%）、辛基-葡萄糖苷（終濃度2%）或者NaCl（終濃度0.1∽0.2 M）。問(wèn)題二：洗脫液中有較多雜帶1、原因：融合蛋白被蛋白酶降解解決方案：在裂解步驟或洗滌步驟加入適量的蛋白酶抑-制劑如PMSF。 2、原因：一些宿主蛋白，比如伴侶蛋白，可能會(huì)和融合蛋白互相作用解決方案：在洗滌液中加入DTT（終濃度5 mM）。在純化前將重組蛋白溶液和伴侶蛋白溶液(2 mM ATP, 10mM MgSO4, 50 mM Tris-HCl)，37℃振蕩10 min 3、原因：過(guò)度的超聲處理會(huì)導(dǎo)致一些蛋白與融合蛋白相結(jié)合解決方案：采用溫和的超聲破碎條件或者其他的裂解條件。 4、原因：有些蛋白會(huì)與融合蛋白或樹(shù)脂發(fā)生非特異性結(jié)合解決方案：優(yōu)化洗滌條件：加入一些洗滌劑如1% Triton X-100、1%Tween-20、0.03% SDS 或者0.1% NP-40 可以降低非特異性吸附。優(yōu)化洗滌液中的鹽濃度也可以降低非特異性吸附。更多GST標(biāo)簽蛋白純化詳情可以關(guān)注義翹神州：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/gst-tag-protein-expression

2022-12-28 09:16:34德國(guó)QATM金相切割機(jī)，后悔沒(méi)早買(mǎi): 月初的時(shí)候，朋友跟我安利了一個(gè)德國(guó)QATM的牌子，說(shuō)是他們實(shí)驗(yàn)室用了很久的一款金相切割機(jī)，非常不錯(cuò)。之前也有其他小伙伴向我推薦過(guò)很多次，當(dāng)時(shí)我是各種猶豫，一來(lái)對(duì)這個(gè)牌子不熟，二來(lái)沒(méi)有使用過(guò)，著實(shí)有點(diǎn)不放心。這次再次被朋友安利，正好實(shí)驗(yàn)室近期也在選購(gòu)金相切割機(jī)，索性就選擇了德國(guó)QATM手動(dòng)/自動(dòng)一體砂輪金相切割機(jī)Qcut 250A試試看。不用不知道，用了之后還真是后悔沒(méi)早買(mǎi)，確實(shí)如朋友所說(shuō)，好用性?xún)r(jià)比又高，真正是金相實(shí)驗(yàn)室必備，樣品切割時(shí)的得力小幫手。原裝進(jìn)口德國(guó)QATM手動(dòng)/自動(dòng)一體砂輪切割機(jī)Qcut 250A，是一款濕式砂輪金相切割機(jī)，具有精密動(dòng)態(tài)范圍和手動(dòng)垂直切割（直切）功能，切割直徑可達(dá)95mm，配備機(jī)電操作桿制動(dòng)器。自動(dòng)X軸可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的脈沖切割和擺動(dòng)式切割，寬敞的切割室空間提供了多種樣品夾持選擇。大尺寸窗式滑動(dòng)前門(mén)提供觀察切割過(guò)程良好視野，結(jié)合帶有安全互鎖的側(cè)門(mén)，可對(duì)切割室實(shí)現(xiàn)更方便操作和安全控制。切割片直徑10in，優(yōu)異的LED照明，T型槽工作臺(tái)，大型不銹鋼臺(tái)面耐磨板是可更換的，切割室左、右開(kāi)孔可用于長(zhǎng)樣品切割。外置45L雙格室?guī)н^(guò)濾系統(tǒng)的冷卻循環(huán)系統(tǒng)，堅(jiān)固的鋁制設(shè)計(jì)，粉末涂層，耐用美觀。適用大多數(shù)材料金相切割，是金相實(shí)驗(yàn)室常備的切割設(shè)備。 Qcut 250A手動(dòng)/自動(dòng)一體砂輪金相切割機(jī)后悔沒(méi)早買(mǎi)的五大性能如下： ? 帶有機(jī)電操作桿制動(dòng)器的手動(dòng)Y軸；7英寸觸屏操作界面，直觀的ATM用戶(hù)軟件控制 ? 自動(dòng)X軸及手柄實(shí)現(xiàn)的手動(dòng)行程；切割力相關(guān)的進(jìn)給控制（X軸）；可選激光輔助定位 ? 帶有安全鎖的滑動(dòng)門(mén)和側(cè)門(mén)操作方便更安全；切割室左、右側(cè)的開(kāi)口適用于長(zhǎng)工件的切割 ? 大型不銹鋼臺(tái)面配有可更換的耐磨板；鋁制機(jī)架，粉末涂層，美觀且更耐用 ? 切割室優(yōu)異的LED照明；快速拆卸，應(yīng)用更靈活總之，我是真的后悔沒(méi)有早點(diǎn)用上德國(guó)QATM金相切割機(jī)，現(xiàn)在我也變成了德國(guó)QATM金相切割機(jī)的忠實(shí)粉絲，逢人就安利。相信您只要使用過(guò)，一定會(huì)像我一樣喜歡上且離不開(kāi)。

2024-01-16 16:37:22MBP標(biāo)簽：深度解析其蛋白大小、序列及其在生物技術(shù)中的應(yīng)用: MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白）標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP標(biāo)簽可通過(guò)免疫分析很方便地檢測(cè)。有必要用位點(diǎn)專(zhuān)一的蛋白酶切割標(biāo)簽。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。 MBP標(biāo)簽序列：396 AA 純化：融合蛋白可通過(guò)交聯(lián)淀粉親和層析一步純化。結(jié)合的融合蛋白可用10mM麥芽糖在生理緩沖液中進(jìn)行洗脫。結(jié)合親和力在微摩爾范圍。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效結(jié)合，而其他融合蛋白則不受影響。緩沖條件為pH7.0到8.5，鹽濃度可高達(dá)1M，但不能使用變性劑。如果要去除MBP融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。 mbp標(biāo)簽優(yōu)缺點(diǎn)：簡(jiǎn)單親和純化即可實(shí)現(xiàn)；增加蛋白表達(dá)量和蛋白穩(wěn)定性；促進(jìn)蛋白的可溶性和正確折疊；標(biāo)簽較大，對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)/功能會(huì)有一定影響。常見(jiàn)的蛋白標(biāo)簽：常見(jiàn)的融合標(biāo)簽包括谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）、麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）、幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白（CBD）、硫氧還蛋白（Trx）、鏈霉親和素、多聚組氨酸（Poly-His）、小分子泛素樣修飾蛋白（SUMO）和血凝素標(biāo)簽（HA）。 GST: GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 標(biāo)簽蛋白本身是一個(gè)在解-毒過(guò)程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶，它的天然大小為26KD。將它應(yīng)用在原核表達(dá)的原因大致有兩個(gè)，一個(gè)是因?yàn)樗且粋€(gè)高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；另一個(gè)是它可以在大腸桿菌中大量表達(dá)，起到提高表達(dá)量的作用。GST融合表達(dá)系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于各種融合蛋白的表達(dá)，可以在大腸桿菌和酵母菌等宿主細(xì)胞中表達(dá)。結(jié)合的融合蛋白在非變性條件下用10mM 還原型谷胱甘肽洗脫。在大多數(shù)情況下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二體。GST標(biāo)簽可用酶學(xué)分析或免疫分析很方便的檢測(cè)。標(biāo)簽有助于保護(hù)重組蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其穩(wěn)定性。在大多數(shù)情況下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。純化：該表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的GST標(biāo)簽蛋白可直接從細(xì)菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠(Glutathionesepharose)親和樹(shù)脂進(jìn)行純化。GST標(biāo)簽蛋白可在溫和、非變性條件下洗脫，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在變性條件下會(huì)失去對(duì)谷胱甘肽樹(shù)脂的結(jié)合能力，因此不能在純化緩沖液中加入強(qiáng)變性劑如：鹽酸胍或尿素等。如果要去除GST融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測(cè)：可用GST抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測(cè)。 HA：HA標(biāo)簽蛋白，標(biāo)簽序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的紅細(xì)胞凝集素表面抗原決定簇，9個(gè)氨基酸，對(duì)外源靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小, 容易構(gòu)建成標(biāo)簽蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti－HA抗體檢測(cè)和ELISA檢測(cè)。用HA peptide可實(shí)現(xiàn)帶HA tag的蛋白洗脫，0.15M Arginine-HCl緩沖液, pH3.0可實(shí)現(xiàn)蛋白純化beads 的重生。 …… 更多關(guān)于蛋白標(biāo)簽詳情可以關(guān)注：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag