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2025-01-10 10:53:59組織透明化成像
“組織透明化成像”是一種先進(jìn)的生物醫(yī)學(xué)成像技術(shù)。它通過將生物組織處理成透明狀態(tài),使得光線能夠穿透組織深處,從而實(shí)現(xiàn)高分辨率的三維成像。這種技術(shù)能夠清晰地展示組織內(nèi)部的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、血管網(wǎng)絡(luò)等細(xì)節(jié),為生物醫(yī)學(xué)研究提供了強(qiáng)有力的支持。組織透明化成像廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、腫瘤學(xué)等領(lǐng)域,幫助科學(xué)家深入觀察和分析生物組織的微觀結(jié)構(gòu)和功能。

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2023-02-13 10:39:43組織透明化與點(diǎn)擊化學(xué)相結(jié)合的新技術(shù)CATCH
在完整組織中觀察藥物靶點(diǎn)相互作用的工具一直是理解體內(nèi)藥物作用的主要障礙。2022年發(fā)表在Cell上的題為“Insitu identification of cellular drug targets in mammalian tissue”的文章有突破性進(jìn)展,作者通過修改和整合點(diǎn)擊化學(xué)(CC)與組織透明化技術(shù),開發(fā)了一種方法——透明輔助組織點(diǎn)擊化學(xué)(Clearing-Assisted Tissue Click Chemistry,簡(jiǎn)稱CATCH),允許小分子藥物-靶點(diǎn)相互作用在亞細(xì)胞分辨率下進(jìn)行標(biāo)記和成像(圖1A)。該技術(shù)為組織中小分子的體內(nèi)相互作用可視化提供了一個(gè)有價(jià)值的平臺(tái),并能夠識(shí)別藥物在哺乳動(dòng)物組織中的分布和參與。圖1 CATCH技術(shù)的方法開發(fā)1.組織透明化極大地改善了哺乳動(dòng)物組織中的化學(xué)標(biāo)記作者對(duì)小鼠給藥脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)緩聚劑PF7845-yne(末端含炔基),通過CuAAC點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng),炔基與熒光標(biāo)簽的疊氮化物反應(yīng)形成疊氮炔環(huán),進(jìn)而引入熒光基團(tuán)。初始試圖直接成像藥物結(jié)合的FAAH,但由于信噪比較差,未能顯示細(xì)胞靶標(biāo)。因而猜測(cè)腦組織構(gòu)成復(fù)雜,其致密的脂膜可能影響點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng),作者測(cè)試了基于聚丙烯酰胺的水凝膠組織透明化方法CLARITY,結(jié)果發(fā)現(xiàn)去除脂質(zhì)后顯著提升了成像的信噪比(圖1C、D)。作者同時(shí)也驗(yàn)證了其他的透明化方法也得到了類似的效果(圖1E)。此外,作者還比較了不同的點(diǎn)擊化學(xué)配體(TBTA,BTTAA,BTTP)及不同的銅離子濃度下的反應(yīng)效率,發(fā)現(xiàn)使用BTTP,150 μM硫酸銅條件下可獲得高信噪比且穩(wěn)定的成像(圖1B)。2.CATCH實(shí)現(xiàn)了藥物-靶點(diǎn)接觸的全腦、亞細(xì)胞原位成像為了驗(yàn)證CATCH應(yīng)用的廣泛性,作者對(duì)三種小分子藥物FAAH緩聚劑PF7845-yne、BIA10-2474-yne和單胺氧化酶(MAO)緩聚劑Pargyline-yne進(jìn)行CATCH成像,結(jié)果清晰展示了藥物-靶點(diǎn)在小鼠不同腦區(qū)的分布(圖2A-E)。另外,還可以展示這些分子主要靶向的細(xì)胞類型,F(xiàn)AAH緩聚劑主要靶向新皮質(zhì)和海馬中的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu);而Pargyline-yne主要結(jié)合全腦的血管樣結(jié)構(gòu),少量下丘腦和腦橋內(nèi)稀疏但特異標(biāo)記的神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu)(圖2F)。圖2 全腦藥物結(jié)合的可視化2.CATCH可與熒光標(biāo)記復(fù)合以識(shí)別靶細(xì)胞類型作者在給藥處理后進(jìn)行NeuN免疫染色,發(fā)現(xiàn)PF7845-yne和BIA10-2474-yne主要與新皮質(zhì)、海馬和杏仁核中的NeuN+神經(jīng)元共定位。而在腦橋中發(fā)現(xiàn)了一小群神經(jīng)元樣結(jié)構(gòu),它們是NeuN陰性但被 pargyline-yne 靶向的(圖3A-D)。隨后作者洗脫NeuN并重新孵育TH抗體驗(yàn)證該推測(cè),確定了NeuN-,Pargyline-yne陽性的細(xì)胞的確是LC-NA神經(jīng)元(圖3E)。由此證明,CATCH可以和熒光標(biāo)記結(jié)合揭示了藥物結(jié)合的細(xì)胞類型,并且可以區(qū)分神經(jīng)元不同部分的藥物靶標(biāo)參與位點(diǎn),可以支持多輪的藥物靶向細(xì)胞類型鑒定。圖3 藥物靶點(diǎn)的細(xì)胞型鑒定锘海團(tuán)隊(duì)自主研發(fā)的組織透明化試劑盒可以高效地進(jìn)行脫色脫脂,采用親水性溫和環(huán)境的設(shè)計(jì),在組織熒光保護(hù)、樣本形態(tài)維持、降低自發(fā)熒光等方面表現(xiàn)出比較優(yōu)異的性能,適用范圍廣、操作簡(jiǎn)便、速度快、效率高。
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2022-11-25 11:20:303D組織成像:快速預(yù)覽到高分辨率成像的一鍵切換
全場(chǎng)景顯微成像分析平臺(tái)MICA集3D采集和AI定量于一體。3D組織成像廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域。研究人員利用它來揭示組織組成和完整性的詳細(xì)信息,或從實(shí)驗(yàn)操作中得出結(jié)論,或比較健康與不健康的樣本。本文介紹了MICA如何幫助研究人員進(jìn)行3D組織成像。3D組織成像模式生物或患者的組織切片可用于分析從組織到細(xì)胞的各種形態(tài),進(jìn)而發(fā)現(xiàn)健康和非健康樣本以及對(duì)照樣品和實(shí)驗(yàn)樣品之間的差異。例如,是否存在特定細(xì)胞或它們的形態(tài)(即形狀、體積、長(zhǎng)度、面積)都是有意義的參數(shù)。熒光顯微鏡有助于識(shí)別特定標(biāo)記的細(xì)胞或細(xì)胞組分。因此,要么用轉(zhuǎn)熒光標(biāo)記基因生物,要么用免疫熒光染色。此外,某些基因和轉(zhuǎn)錄也可以通過熒光原位雜交 (Fluorescence in Situ Hybridization, FISH) 進(jìn)行可視化。3D組織成像的一個(gè)示例是,對(duì)腦部神經(jīng)元進(jìn)行成像,以確定它們的長(zhǎng)度、體積或與其它細(xì)胞的連接。例如,可以對(duì)患有局部腦缺血的模式生物制作腦部切片,以了解形態(tài)差異和細(xì)胞數(shù)量。挑 戰(zhàn)首要的挑戰(zhàn)之一是使用顯微鏡初步觀察樣本。需要將樣本置于載物臺(tái)上并不斷調(diào)整三維位置以確保對(duì)樣本進(jìn)行正確成像。你從目鏡或屏幕上看到的只是樣本極小的一部分。因此,要將樣本保持在正確的焦距內(nèi)并找到正確位置,以便找到感興趣的區(qū)域,是一個(gè)非常麻煩的過程。MICA的樣本查找功能通過將樣本聚焦并生成每個(gè)相關(guān)區(qū)域的低倍率預(yù)覽圖來自動(dòng)化這個(gè)過程,這個(gè)功能可以用于整個(gè)成像過程的定位。下一個(gè)挑戰(zhàn)是設(shè)置成像參數(shù),因此可以在看到感興趣的信號(hào)下,避免樣本遭受不必要的光漂白。這一步驟通常要同時(shí)選擇激發(fā)和接受檢測(cè)的技術(shù)參數(shù),因?yàn)槊恳豁?xiàng)參數(shù)都會(huì)對(duì)樣本和獲得的結(jié)果產(chǎn)生不同的影響。使用MICA,您只需輕輕點(diǎn)擊一下“Live”,便可自動(dòng)完成可視化熒光所需的所有參數(shù)設(shè)置。可隨時(shí)通過點(diǎn)擊“OneTouch”執(zhí)行這一自動(dòng)化設(shè)置來優(yōu)化當(dāng)前視圖的參數(shù)。更改顯微鏡的特定技術(shù)參數(shù)前,實(shí)驗(yàn)人員通常需要了解更改參數(shù)將產(chǎn)生的影響,但在MICA中,設(shè)置是輸出驅(qū)動(dòng)型的,也就是說,可定義所需的輸出,然后自動(dòng)完成對(duì)應(yīng)的調(diào)整。一般而言,第 一步是確定要成像的正確位置。實(shí)驗(yàn)人員需要使用目鏡了解樣本的整體概況,并記住不同的位置。數(shù)字顯微鏡可以生成樣本的概覽,這可以提供一些幫助,但實(shí)驗(yàn)人員仍然需要指出圖像中要進(jìn)一步成像的位置。MICA的Navigator工具可簡(jiǎn)化這一過程。用戶可以生成低倍或高倍的預(yù)覽,輕松定位感興趣的區(qū)域,并可以使用工具直接在圖像上標(biāo)記出感興趣的樣本區(qū)域。這樣后續(xù)高分辨率圖片就可以保存下來。高放大倍數(shù)物鏡通常需要使用浸沒式介質(zhì),最 常見的是水和油。水為水溶液中的成像樣品匹配了最 佳的光學(xué)指數(shù),而油為包埋的成像樣品匹配了最 佳的光學(xué)指數(shù)。水浸物鏡也可用于固定式樣本,但會(huì)稍微影響成像質(zhì)量。MICA可同時(shí)滿足兩種需求。水鏡還具有全自動(dòng)化操作的額外優(yōu)勢(shì),水的浸入可以自動(dòng)建立并維持。為進(jìn)一步提高光學(xué)質(zhì)量,一些物鏡會(huì)通過校正環(huán)來補(bǔ)償樣本板的厚度。校正環(huán)可手動(dòng)、也可自動(dòng)操作。MICA配置了自動(dòng)校正環(huán)功能,可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)優(yōu)化。相對(duì)厚度是組織切片成像的另一大挑戰(zhàn)。厚切片會(huì)形成較多的散射光,干擾所需信號(hào)。THUNDER可減少背景模糊,為組織成像提供了一種寶貴的計(jì)算成像方法。 MICA集THUNDER于一體,可在合理的時(shí)間范圍內(nèi)確定感興趣的區(qū)域。除了類似于THUNDER的計(jì)算清除方法,共聚焦激光掃描顯微術(shù)(CLSM)等光學(xué)部分也是3D組織玻片成像的一種方法。這種方法中,可獲得性和可用性方面也是挑戰(zhàn)。除了技術(shù)設(shè)置比較復(fù)雜,共聚焦顯微鏡所需的培訓(xùn)時(shí)間一般也更長(zhǎng)。MICA集共聚焦和寬場(chǎng)成像于一體,最 大程度減少了成像參數(shù)設(shè)置,縮短了所需的培訓(xùn)時(shí)間,同時(shí)也降低了操作顯微鏡的技能要求。另外,共聚焦和寬場(chǎng)成像模式的圖像設(shè)置有相同的外觀和使用感受,因此,用戶無需學(xué)習(xí)兩種系統(tǒng)的操作方法。而且,用戶可隨意在寬場(chǎng)和共聚焦兩種模式間切換而無需在兩種成像系統(tǒng)間轉(zhuǎn)移樣本??茖W(xué)實(shí)驗(yàn)的一個(gè)關(guān)鍵方面是,改變盡可能少的變量,以確定對(duì)樣本和結(jié)果的任何影響。除了保證樣本處理相同外,另一個(gè)方面是針對(duì)激發(fā)和接收檢測(cè)成像參數(shù)相同。MICA默認(rèn)在不同項(xiàng)目中保持成像參數(shù)不變,用戶僅基于自己的需求進(jìn)行調(diào)整??筛鶕?jù)參考圖像輕松恢復(fù)成像參數(shù)。方法三個(gè)厚度為250μm的小鼠腦部切片包含下述熒光標(biāo)記物:細(xì)胞核(DAPI,品紅色)神經(jīng)元(細(xì)胞質(zhì)GFP,青色)星形膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP-DsRed,紅色)將切片固定于載玻片支架中(圖1)并置于載物臺(tái)上進(jìn)行成像。圖1:用于玻片成像的MICA玻片夾,例如組織切片。在樣本定義中輸入蓋玻片類型和染料等基本信息。利用這一信息,Sample Finder可以識(shí)別蓋玻片并自動(dòng)生成低倍的預(yù)覽。對(duì)整個(gè)蓋玻片的預(yù)覽可以用來識(shí)別三個(gè)組織切片,然后用Navigator工具進(jìn)行標(biāo)記。隨后無需手動(dòng)調(diào)整成像參數(shù),便可以在20倍寬場(chǎng)模式下對(duì)標(biāo)記區(qū)域生成掃描拼接圖像。在這個(gè)放大倍數(shù)和分辨率下,就能在組織切片上識(shí)別出感興趣的區(qū)域,然后用共聚焦顯微鏡成像。此時(shí),MICA會(huì)在相關(guān)區(qū)域切換為共聚焦模式,記錄高清晰圖像,包括三維立體圖像。定義三維立體圖像時(shí),可以手動(dòng)或單擊鼠標(biāo)自動(dòng)設(shè)置限制。z Range Finder工具自動(dòng)確定3D圖像掃描開始和結(jié)束部分。成像后,可借助MICA Learn & Results工具測(cè)量樹突棘。為此,使用pixel classifier在疊層投影下識(shí)別棘突。pixel classifier簡(jiǎn)單易用且功能強(qiáng)大,用戶只需使用類似于繪畫工具的繪圖工具標(biāo)記對(duì)象的示例,在這種情況下為棘突。通過訓(xùn)練模型,更好地再現(xiàn)輸入,然后提供圖像中其他對(duì)象的預(yù)覽。經(jīng)過訓(xùn)練后,就可使用模型分析圖像。 結(jié)果找到載玻片預(yù)覽上單個(gè)腦部切片,然后使用Magic Wand工具進(jìn)行標(biāo)記以進(jìn)行掃描拼接。Magic Wand自動(dòng)識(shí)別組織切片的邊界并相應(yīng)地定義所需的拼接。圖2:MICA在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)進(jìn)行完整的玻片預(yù)覽(寬場(chǎng)),便于更輕松地定位。借助該信息的信息,可找到大圖掃描拼接的感興趣區(qū)域??墒褂肕agic Wand工具自動(dòng)化檢測(cè)感興趣區(qū)域。MICA可同時(shí)采集最 多四個(gè)熒光團(tuán),因此相比基于濾光塊的序列成像的顯微系統(tǒng),可有效節(jié)約用戶的時(shí)間。在單次掃描拼接中,可找到感興趣區(qū)域,并在共聚焦模式下以更高的放大倍數(shù)觀察更多的細(xì)節(jié)。二維圖像需要借助三維數(shù)據(jù)以獲得更詳細(xì)的信息。為此,z界面中定義了三維立體模式。在CLSM下進(jìn)行立體采集后(120μm厚),可在三維觀察器中可視化數(shù)據(jù),獲得腦部樣本的更多空間信息。圖3:三維重構(gòu)CLSM。通過三維采集進(jìn)一步研究組織切片。利用獲得的三維信息,用戶可以更好地了解樣本的空間狀況,例如了解細(xì)胞間的連接。對(duì)于定量來說,可根據(jù)三維采集信息生成最 大投影來測(cè)量樣本樹突棘的平均面積。pixel classifier識(shí)別棘突,分析工具則確定面積。得到的數(shù)值可繪制成圖,以可視化數(shù)據(jù)和相關(guān)性。圖4顯示了樹突棘面積的直方圖。這些結(jié)果也可通過箱線圖的形式顯示,來比較不同的樹突棘群落(圖4)。圖4:分析。MICA不僅采集圖像,還可對(duì)它們進(jìn)行分析。為此,可使用基于人工智能技術(shù)的pixel classifier來識(shí)別相關(guān)的圖像細(xì)節(jié)。隨后,識(shí)別出的對(duì)象可以被量化并顯示在圖形中。在本示例中,樹突棘的平均面積在最 大投影上測(cè)量。結(jié)論MICA是用于三維組織成像的有效工具:使用pixel classifier功能,用戶可以快速了解樣本的整體質(zhì)量,確定進(jìn)一步的操作。隨后,Navigator視圖可對(duì)組織切片進(jìn)行更深入的觀察。Magic Wand等工具用于快速定義感興趣的區(qū)域,加上4個(gè)通道的同時(shí)成像,可加快大圖掃描拼接的速度。使用新的z界面使三維采集更加簡(jiǎn)化,pixel classifier能輔助后續(xù)分析。簡(jiǎn)而言之,MICA集寬場(chǎng)成像和共聚焦成像于一個(gè)系統(tǒng)中。它可以幫助用戶在一個(gè)系統(tǒng)中完成從圖像預(yù)覽到三維細(xì)節(jié)成像再到分析的整個(gè)工作流程。參考資料:Efficient Long-term Time-lapse Microscopy, Science Lab (2022) Leica Microsystems.
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2022-11-09 16:39:463D組織成像:快速預(yù)覽到高分辨率成像的一鍵切換
全場(chǎng)景顯微成像分析平臺(tái)MICA集3D采集和AI定量于一體。3D組織成像廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域。研究人員利用它來揭示組織組成和完整性的詳細(xì)信息,或從實(shí)驗(yàn)操作中得出結(jié)論,或比較健康與不健康的樣本。本文介紹了MICA如何幫助研究人員進(jìn)行3D組織成像。3D組織成像模式生物或患者的組織切片可用于分析從組織到細(xì)胞的各種形態(tài),進(jìn)而發(fā)現(xiàn)健康和非健康樣本以及對(duì)照樣品和實(shí)驗(yàn)樣品之間的差異。例如,是否存在特定細(xì)胞或它們的形態(tài)(即形狀、體積、長(zhǎng)度、面積)都是有意義的參數(shù)。熒光顯微鏡有助于識(shí)別特定標(biāo)記的細(xì)胞或細(xì)胞成分。因此,要么用轉(zhuǎn)熒光標(biāo)記基因生物,要么用免疫熒光染色。此外,某些基因和轉(zhuǎn)錄也可以通過熒光原位雜交 (Fluorescence in Situ Hybridization, FISH) 進(jìn)行可視化。3D組織成像的一個(gè)示例是,對(duì)腦部神經(jīng)元進(jìn)行成像,以確定它們的長(zhǎng)度、體積或與其它細(xì)胞的連接。例如,可以對(duì)患有局部腦缺血的模式生物制作腦部切片,以了解形態(tài)差異和細(xì)胞數(shù)量。挑戰(zhàn)首要的挑戰(zhàn)之一是使用顯微鏡初步觀察樣本。需要將樣本置于載物臺(tái)上并不斷調(diào)整三維位置以確保對(duì)樣本進(jìn)行正確成像。你從目鏡或屏幕上看到的只是樣本極小的一部分。因此,要將樣本保持在正確的焦距內(nèi)并找到正確位置,以便找到感興趣的區(qū)域,是一個(gè)非常麻煩的過程。MICA的樣本查找功能通過將樣本聚焦并生成每個(gè)相關(guān)區(qū)域的低倍率預(yù)覽圖來自動(dòng)化這個(gè)過程,這個(gè)功能可以用于整個(gè)成像過程的定位。下一個(gè)挑戰(zhàn)是設(shè)置成像參數(shù),因此可以在看到感興趣的信號(hào)下,避免樣本遭受不必要的光漂白。這一步驟通常要同時(shí)選擇激發(fā)和接受檢測(cè)的技術(shù)參數(shù),因?yàn)槊恳豁?xiàng)參數(shù)都會(huì)對(duì)樣本和獲得的結(jié)果產(chǎn)生不同的影響。使用MICA,您只需輕輕點(diǎn)擊一下“Live”,便可自動(dòng)完成可視化熒光所需的所有參數(shù)設(shè)置??呻S時(shí)通過點(diǎn)擊“OneTouch”執(zhí)行這一自動(dòng)化設(shè)置來優(yōu)化當(dāng)前視圖的參數(shù)。更改顯微鏡的特定技術(shù)參數(shù)前,實(shí)驗(yàn)人員通常需要了解更改參數(shù)將產(chǎn)生的影響,但在MICA中,設(shè)置是輸出驅(qū)動(dòng)型的,也就是說,可定義所需的輸出,然后自動(dòng)完成對(duì)應(yīng)的調(diào)整。一般而言,第一步是確定要成像的正確位置。實(shí)驗(yàn)人員需要使用目鏡了解樣本的整體概況,并記住不同的位置。數(shù)字顯微鏡可以生成樣本的概覽,這可以提供一些幫助,但實(shí)驗(yàn)人員仍然需要指出圖像中要進(jìn)一步成像的位置。MICA的Navigator工具可簡(jiǎn)化這一過程。用戶可以生成低倍或高倍的預(yù)覽,輕松定位感興趣的區(qū)域,并可以使用工具直接在圖像上標(biāo)記出感興趣的樣本區(qū)域。這樣后續(xù)高分辨率圖片就可以保存下來。高放大倍數(shù)物鏡通常需要使用浸沒式介質(zhì),最常見的是水和油。水為水溶液中的成像樣品匹配了最佳的光學(xué)指數(shù),而油為包埋的成像樣品匹配了最佳的光學(xué)指數(shù)。水浸物鏡也可用于固定式樣本,但會(huì)稍微影響成像質(zhì)量。MICA可同時(shí)滿足兩種需求。水鏡還具有全自動(dòng)化操作的額外優(yōu)勢(shì),水的浸入可以自動(dòng)建立并維持。為進(jìn)一步提高光學(xué)質(zhì)量,一些物鏡會(huì)通過校正環(huán)來補(bǔ)償樣本板的厚度。校正環(huán)可手動(dòng)、也可自動(dòng)操作。MICA配置了自動(dòng)校正環(huán)功能,可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)優(yōu)化。相對(duì)厚度是組織切片成像的另一大挑戰(zhàn)。厚切片會(huì)形成較多的散射光,干擾所需信號(hào)。THUNDER可減少背景模糊,為組織成像提供了一種寶貴的計(jì)算成像方法。 MICA集THUNDER于一體,可在合理的時(shí)間范圍內(nèi)確定感興趣的區(qū)域,除了類似于THUNDER的計(jì)算清除方法,共聚焦激光掃描顯微術(shù)(CLSM)等光學(xué)部分也是3D組織玻片成像的一種方法。這種方法中,可獲得性和可用性方面也是挑戰(zhàn)。除了技術(shù)設(shè)置比較復(fù)雜,共聚焦顯微鏡所需的培訓(xùn)時(shí)間一般也更長(zhǎng)。MICA集共聚焦和寬場(chǎng)成像于一體,最大程度減少了成像參數(shù)設(shè)置,縮短了所需的培訓(xùn)時(shí)間,同時(shí)也降低了操作顯微鏡的技能要求。另外,共聚焦和寬場(chǎng)成像模式的圖像設(shè)置有相同的外觀和使用感受,因此,用戶無需學(xué)習(xí)兩種系統(tǒng)的操作方法。而且,用戶可隨意在寬場(chǎng)和共聚焦兩種模式間切換而無需在兩種成像系統(tǒng)間轉(zhuǎn)移樣本。科學(xué)實(shí)驗(yàn)的一個(gè)關(guān)鍵方面是,改變盡可能少的變量,以確定對(duì)樣本和結(jié)果的任何影響。除了保證樣本處理相同外,另一個(gè)方面是針對(duì)激發(fā)和接收檢測(cè)成像參數(shù)相同。MICA默認(rèn)在不同項(xiàng)目中保持成像參數(shù)不變,用戶僅基于自己的需求進(jìn)行調(diào)整。可根據(jù)參考圖像輕松恢復(fù)成像參數(shù)。方法三個(gè)厚度為250μm的小鼠腦部切片包含下述熒光標(biāo)記物:· 細(xì)胞核(DAPI,品紅色)· 神經(jīng)元(細(xì)胞質(zhì)GFP,青色)· 星形膠質(zhì)細(xì)胞(GFAP-DsRed,紅色)將切片固定于載玻片支架中(圖1)并置于載物臺(tái)上進(jìn)行成像。圖2: MICA在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)進(jìn)行完整的玻片預(yù)覽(寬場(chǎng)),便于更輕松地定位。借助該信息的信息,可找到大圖掃描拼接的感興趣區(qū)域??墒褂肕agic Wand工具自動(dòng)化檢測(cè)感興趣區(qū)域。MICA可同時(shí)采集最多四個(gè)熒光團(tuán),因此相比基于濾光塊的序列成像的顯微系統(tǒng),可有效節(jié)約用戶的時(shí)間。在單次掃描拼接中,可找到感興趣區(qū)域,并在共聚焦模式下以更高的放大倍數(shù)觀察更多的細(xì)節(jié)。二維圖像需要借助三維數(shù)據(jù)以獲得更詳細(xì)的信息。為此,z界面中定義了三維立體模式。在CLSM下進(jìn)行立體采集后(120μm厚),可在三維觀察器中可視化數(shù)據(jù),獲得腦部樣本的更多空間信息。 圖3:三維重構(gòu)CLSM。通過三維采集進(jìn)一步研究組織切片。利用獲得的三維信息,用戶可以更好地了解樣本的空間狀況,例如了解細(xì)胞間的連接。對(duì)于定量來說,可根據(jù)三維采集信息生成最大投影來測(cè)量樣本樹突棘的平均面積。pixel classifier識(shí)別棘突,分析工具則確定面積。得到的數(shù)值可繪制成圖,以可視化數(shù)據(jù)和相關(guān)性。圖4顯示了樹突棘面積的直方圖。這些結(jié)果也可通過箱線圖的形式顯示,來比較不同的樹突棘群落(圖4)。圖4:分析。MICA不僅采集圖像,還可對(duì)它們進(jìn)行分析。為此,可使用基于人工智能技術(shù)的pixel classifier來識(shí)別相關(guān)的圖像細(xì)節(jié)。隨后,識(shí)別出的對(duì)象可以被量化并顯示在圖形中。在本示例中,樹突棘的平均面積在最大投影上測(cè)量。結(jié)論MICA是用于三維組織成像的有效工具:使用pixel classifier功能,用戶可以快速了解樣本的整體質(zhì)量,確定進(jìn)一步的操作。隨后,Navigator視圖可對(duì)組織切片進(jìn)行更深入的觀察。Magic Wand等工具用于快速定義感興趣的區(qū)域,加上4個(gè)通道的同時(shí)成像,可加快大圖掃描拼接的速度。使用新的z界面使三維采集更加簡(jiǎn)化,pixel classifier能輔助后續(xù)分析。簡(jiǎn)而言之,MICA集寬場(chǎng)成像和共聚焦成像于一個(gè)系統(tǒng)中。它可以幫助用戶在一個(gè)系統(tǒng)中完成從圖像預(yù)覽到三維細(xì)節(jié)成像再到分析的整個(gè)工作流程。
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2025-02-17 14:30:16核磁共振成像成像特點(diǎn)是什么?
核磁共振成像成像特點(diǎn) 核磁共振成像(MRI)作為一種非侵入性醫(yī)學(xué)成像技術(shù),在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中得到了廣泛應(yīng)用。與傳統(tǒng)的X射線和CT掃描不同,核磁共振成像通過利用強(qiáng)磁場(chǎng)和射頻脈沖,生成高分辨率的內(nèi)部圖像,能夠清晰地呈現(xiàn)身體各個(gè)組織和器官的結(jié)構(gòu)。本文將深入探討核磁共振成像的成像特點(diǎn),并闡明其在臨床應(yīng)用中的優(yōu)勢(shì)。 高分辨率的軟組織成像 核磁共振成像顯著的特點(diǎn)之一是其在軟組織成像方面的優(yōu)越性。傳統(tǒng)的成像技術(shù)如X射線或CT掃描主要依賴于硬組織的密度差異,而MRI則能夠提供軟組織的細(xì)節(jié)圖像。無論是腦組織、肌肉、關(guān)節(jié)還是器官,核磁共振都能提供清晰的圖像,這使得醫(yī)生在診斷時(shí)能夠準(zhǔn)確識(shí)別各種疾病,如腦部腫瘤、脊柱疾病、心血管疾病等。 無輻射危害 與X射線和CT掃描等影像技術(shù)不同,核磁共振成像不會(huì)使用任何形式的電離輻射,這使得其在許多臨床情境下成為一種更加安全的選擇。特別是在需要多次檢查的情況下(如癌癥隨訪或慢性病監(jiān)控),MRI因其零輻射特性而具有明顯的優(yōu)勢(shì)。MRI對(duì)孕婦和兒童等敏感人群更為友好,是其在兒科和產(chǎn)科中應(yīng)用的關(guān)鍵因素之一。 多平面成像能力 核磁共振成像具有獨(dú)特的多平面成像能力,即能夠在不同的平面(如橫截面、冠狀面、矢狀面等)上進(jìn)行成像。這一特點(diǎn)使得MRI能夠從多角度、多方位獲取圖像,極大提高了疾病診斷的精確度和可靠性。通過多平面重建,醫(yī)生可以清晰地了解患者病變區(qū)域的空間關(guān)系,從而進(jìn)行更有效的診斷和。 組織對(duì)比度良好 核磁共振成像提供了較為優(yōu)異的組織對(duì)比度,這使得不同類型的組織在圖像中的分辨更加明顯。例如,腫瘤和正常組織的對(duì)比度非常高,幫助醫(yī)生識(shí)別腫瘤的邊界和形態(tài)特征。MRI技術(shù)還可以通過使用不同的序列(如T1、T2加權(quán)成像)來突出顯示不同類型的組織結(jié)構(gòu),這對(duì)于臨床中的診斷工作至關(guān)重要。 動(dòng)態(tài)成像和功能性成像 隨著技術(shù)的不斷發(fā)展,MRI不僅能夠提供靜態(tài)的解剖學(xué)圖像,還能夠進(jìn)行動(dòng)態(tài)成像和功能性成像。例如,通過使用功能性MRI(fMRI)技術(shù),醫(yī)生可以觀察到大腦在執(zhí)行特定任務(wù)時(shí)的活動(dòng)情況,這對(duì)于神經(jīng)科學(xué)的研究和疾病的診斷具有重要意義。MRI還可以通過動(dòng)態(tài)對(duì)比增強(qiáng)成像(DCE-MRI)評(píng)估腫瘤的血流情況,進(jìn)一步提高腫瘤的評(píng)估精度。 總結(jié) 核磁共振成像憑借其高分辨率軟組織成像、無輻射危害、多平面成像能力、優(yōu)異的組織對(duì)比度以及動(dòng)態(tài)成像和功能性成像等特點(diǎn),已成為醫(yī)學(xué)影像學(xué)領(lǐng)域中不可或缺的重要技術(shù)。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,MRI將繼續(xù)在疾病診斷和中發(fā)揮著越來越重要的作用,尤其在軟組織成像和復(fù)雜疾病的早期發(fā)現(xiàn)中具有不可替代的優(yōu)勢(shì)。 這篇文章結(jié)構(gòu)緊湊,內(nèi)容詳實(shí),使用了相關(guān)的SEO關(guān)鍵詞,適合于優(yōu)化網(wǎng)站排名。如果您有任何特定要求或修改意見,可以告訴我,我會(huì)根據(jù)您的需要進(jìn)一步調(diào)整。
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2025-05-19 11:15:18透射電子顯微鏡怎么成像
透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope, TEM)作為現(xiàn)代科學(xué)研究中的一項(xiàng)重要工具,廣泛應(yīng)用于材料科學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)等領(lǐng)域。它的工作原理和成像技術(shù)為我們揭示了物質(zhì)的微觀結(jié)構(gòu),尤其是能夠深入到納米級(jí)別,觀察細(xì)胞內(nèi)部的精細(xì)結(jié)構(gòu)以及各類材料的晶體結(jié)構(gòu)。本文將詳細(xì)介紹透射電子顯微鏡如何進(jìn)行成像,探討其成像原理、過程及其優(yōu)勢(shì),為理解其在科研中的重要作用提供清晰的視角。 透射電子顯微鏡的成像原理 透射電子顯微鏡通過利用電子束與樣品的相互作用進(jìn)行成像。與傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡不同,透射電子顯微鏡使用高能電子束而非光線,因?yàn)殡娮硬ㄩL(zhǎng)遠(yuǎn)小于可見光,從而能夠觀察到比光學(xué)顯微鏡更為細(xì)微的物質(zhì)結(jié)構(gòu)。當(dāng)電子束通過樣品時(shí),部分電子被樣品中的原子散射或透過,另一部分則未受影響。通過檢測(cè)這些不同的電子束,電子顯微鏡能夠繪制出樣品的詳細(xì)影像。 成像過程 電子束的生成與聚焦 透射電子顯微鏡的電子束通常由一個(gè)加速器產(chǎn)生并通過電磁透鏡聚焦成極細(xì)的電子束。加速后的電子束具有極高的能量,可以穿透很薄的樣品。 樣品的制備 樣品必須足夠薄,以便電子束能夠透過。一般來說,樣品的厚度需要控制在100nm以下,這樣電子才能順利通過并獲得清晰的成像。 與樣品的相互作用 當(dāng)電子束與樣品的原子發(fā)生相互作用時(shí),部分電子會(huì)被散射,部分則通過樣品。這些散射電子和透過電子的不同程度為成像提供了信息。 成像與放大 整個(gè)透射過程通過一系列的透鏡系統(tǒng),將透過樣品的電子聚焦到熒光屏或相機(jī)上,從而形成樣品的高分辨率圖像。不同的電子透過樣品的路徑、散射程度以及強(qiáng)度變化構(gòu)成了圖像的細(xì)節(jié)。 透射電子顯微鏡的優(yōu)勢(shì) 高分辨率 透射電子顯微鏡的大優(yōu)勢(shì)在于其超高的分辨率,能夠觀察到原子級(jí)別的細(xì)節(jié)。由于電子的波長(zhǎng)比可見光波長(zhǎng)短,它能揭示光學(xué)顯微鏡無法捕捉到的微觀結(jié)構(gòu)。 納米尺度觀察 TEM不僅能夠看到納米尺度的細(xì)節(jié),還是觀察材料、細(xì)胞、病毒等微觀結(jié)構(gòu)的首選工具,廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究及臨床診斷中。 多功能性 除了成像,透射電子顯微鏡還可以進(jìn)行化學(xué)成分分析(如電子能量損失譜、X射線能譜等),進(jìn)一步提高了其應(yīng)用的廣泛性和準(zhǔn)確性。 結(jié)語 透射電子顯微鏡作為現(xiàn)代科研不可或缺的工具,其高分辨率和獨(dú)特的成像原理使其在微觀結(jié)構(gòu)觀察中具有無可替代的地位。無論是在材料科學(xué)還是生物學(xué)領(lǐng)域,TEM為我們提供了觀察微觀世界的新視角和深度,使我們得以深入探索細(xì)胞、材料和納米結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。
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