在選擇液相色譜儀色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在1**%酸性水溶液條件下檢測(cè)，即要選擇承受1**%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱。

液相色譜儀色譜柱選擇的思路

　　1、確定分離目的，確定液相色譜儀是否要求高分離度、短分析時(shí)間、高靈敏度、長(zhǎng)柱壽命，低的實(shí)驗(yàn)成本等。

　　2、評(píng)估分析物的化學(xué)性質(zhì)，諸如化學(xué)結(jié)構(gòu)、溶解性、穩(wěn)定性等。

　　3、選擇合適的色譜柱，了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì)。

液相色譜儀色譜柱選擇的條件

　　1、填料基質(zhì)

　?、俟枘z基質(zhì)：純度高本錢低，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。

　?、诰酆衔锘|(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬，溫度穩(wěn)定(高溫可以達(dá)到80度以上)，機(jī)械強(qiáng)度小。

　　2、顆粒外形

　　大多現(xiàn)代液相色譜儀填料都是球形顆粒，但有時(shí)是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長(zhǎng)的柱壽命在使用高粘度的活動(dòng)相時(shí);不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對(duì)低廉的價(jià)格。

　　3、顆粒粒徑

　　粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時(shí)會(huì)導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品，液相色譜儀可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。

　　4、含碳量

　　含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān)。高含碳量進(jìn)步柱容量、分辨率及分析時(shí)間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時(shí)間短、展現(xiàn)不同的選擇性，用于快速分析簡(jiǎn)單樣品及需要高含水活動(dòng)相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。

　　5、孔徑和比表面積

　　液相色譜儀吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi)。因此，分子必須進(jìn)進(jìn)孔內(nèi)才能被吸附和分離。

　　孔徑和比表面積是相輔相成的兩個(gè)概念?？讖叫”缺砻娣e大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng)，增加保存，上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小，平衡時(shí)間快，適合梯度分析。

　　6、孔容和機(jī)械強(qiáng)度

　　孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機(jī)械強(qiáng)度?？左w積大的填料相對(duì)孔體積小的填料機(jī)械強(qiáng)度要略弱。孔體積為1.5mL/g或更小的填料大多用于液相色譜儀分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。

　　7、封端

　　封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰。不封端鍵合相相對(duì)封端鍵合相會(huì)產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品。

液相色譜儀色譜柱填料的選擇

　　液相色譜儀中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解。

　　一、硅膠基質(zhì)填料

　　1、正相色譜

　　正相色譜用的固定相通常為硅膠以及其它具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)和氰基團(tuán)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份Zxian被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如：正己烷、氯仿、二氯甲烷等。

　　2、反相色譜

　　反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。

　　樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組份Zxian被沖洗出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反相填料有：C18、C8、C4、C6H5等。

　　二、聚合物填料

　　聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在pH值為1～14均可使用。相對(duì)于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物填料對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

　　三、其它無機(jī)填料

　　其它無機(jī)填料液相色譜儀色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。

　　石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，又由于在液相色譜儀流動(dòng)相中不會(huì)被溶解,這類柱可在任何pH與溫度下使用。

　　氧化鋁也可用于液相色譜儀，氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可在pH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用。

　　新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于液相色譜儀，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用pH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料是Z近幾年才開始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行中。