蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗(yàn)）就是Western Blot。作為一種實(shí)驗(yàn)方法。它常被用于分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中。生物組織樣品或者凝膠電泳處理過的細(xì)胞經(jīng)過特異性抗體著色，通過對(duì)著色的位置和著色深度的分析來使特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息獲得。

免疫反應(yīng)

1、在含有封閉液的平皿中移入使用TBS從下向上浸濕了的膜，室溫下脫色搖床上搖動(dòng)封閉一個(gè)小時(shí)。

2.用TBST在1.5ml離心管中將一抗稀釋至適當(dāng)濃度，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上鋪上適當(dāng)大小的一塊兒保鮮膜，用水將四角浸濕，從而保持保鮮膜平整。在保鮮膜上加上抗體溶液，將膜從封閉液中取出，將殘留液用濾紙吸去后，在抗體液面上面朝下放入膜蛋白。將膜四角掀動(dòng)從而將殘留氣泡趕出，室溫下孵育1到2個(gè)小時(shí)，在室溫下TBST脫色，搖床上洗兩次，每次十分鐘，然后再使用TBS洗一次。

3.對(duì)二抗稀釋液進(jìn)行準(zhǔn)備并且接觸膜，對(duì)步驟2中Z后一步重復(fù)，從而使得化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進(jìn)行。

化學(xué)發(fā)光

1.在保鮮膜上等體積混合A和B兩種試劑，一分鐘以后，將膜蛋白面朝下，使其充分接觸此混合液。再一分鐘以后，往另一保鮮膜上移入膜，將殘液去盡，包好，在X-光片夾中放入。

2.在暗室中，在塑料盤中分別倒入1×顯影液和定影液。將X－光片從紅燈下取出，用切紙刀進(jìn)行適當(dāng)大小的剪裁，將X-光片夾打開，在膜上放上X－光片，一旦放上，就不可以移動(dòng)，將X-光片夾關(guān)上，然后計(jì)算時(shí)間。按照信號(hào)的強(qiáng)弱對(duì)曝光時(shí)間進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，通常是一分鐘或者五分鐘。為了使Z佳效果達(dá)到，也能夠選擇不同時(shí)間多次壓片。結(jié)束曝光后，將X-光片夾打開，并且將X-光片取出，在顯影液中迅速浸入并且顯影，等到有明顯條帶出現(xiàn)以后，馬上將顯影終止。顯影時(shí)間通常是1-2分鐘（20～25℃），如果溫度過低（低于16℃），需要對(duì)顯影時(shí)間適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)。完成顯影后，立刻在定影液中浸入X-光片，定影時(shí)間通常為5～10分鐘，直到膠片透明為止，殘留的定影液使用自來水沖去以后，在室溫下晾干。值得留心的是，為了不影響結(jié)果，在顯影和定影移動(dòng)膠片盡量拿膠片一角，膠片不能夠被手指甲劃傷。

凝膠圖象分析

掃描或拍照膠片，目標(biāo)帶的分子量和凈光密度值使用凝膠圖象處理系統(tǒng)來進(jìn)行分析。