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高效液相色譜儀

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GX液相色譜儀常見的檢測器

更新時(shí)間:2025-10-22 17:46:55 類型:高效液相色譜儀結(jié)構(gòu) 閱讀量:8252
導(dǎo)讀:高效液相色譜儀最常用的檢測器為紫外檢測器,包括二極管陣列檢測器,其他常見的檢測器有熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器、電化學(xué)檢測器和化學(xué)反應(yīng)檢測器等。

  GX液相色譜儀Z常用的檢測器為紫外檢測器,包括二極管陣列檢測器,其他常見的檢測器有熒光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器、電化學(xué)檢測器和化學(xué)反應(yīng)檢測器等。

紫外吸收(UV)檢測器

  UV檢測器是目前GX液相色譜儀應(yīng)用Z廣泛的檢測器。它是依據(jù)光吸收原理,以適當(dāng)?shù)墓饴泛碗娐?,輸出一個(gè)與試樣組分濃度成正比的紫外一可見光吸收信號,其結(jié)構(gòu)與一般光度計(jì)相似。其流通池是組分流過的光學(xué)通道,池體積一般為8μl,內(nèi)徑小于1mm,長度10mm左右。

GX液相色譜儀.jpg

  GX液相色譜儀這種檢測器靈敏度高,線性范圍寬,對流速和溫度變化不敏感,可用于梯度洗脫分離。紫外吸收檢測要求被檢測樣品組分有紫外一可見光吸收,而使用的流動相無吸收,或在被測組分吸收波長處無吸收。一般選擇在欲分析物有Zda吸收的波長處進(jìn)行檢測,以獲得Zda靈敏度和抗干擾能力。在沒有Zda吸收時(shí),可采用末端吸收。檢測波長的選擇除取決于待測物質(zhì)的成分和分子結(jié)構(gòu)外,還必須考慮流動相組成、共存組分干擾等因素。特別是各種溶劑都有一定的透過波長下限值,超過這個(gè)波長,溶劑的吸收會變得很強(qiáng),以至于不能很好地測出待測物質(zhì)的吸收強(qiáng)度。

光電二極管陣列(PDA)檢測器

  PDA檢測器又稱為二極管陣列檢測器(DAD),這種檢測器以光電二極管陣列作為檢測元件,可進(jìn)行多通道并行檢測,在一次色譜測量中,可同時(shí)獲得時(shí)間、波長、吸光度三者的關(guān)系,通過計(jì)算機(jī)處理,在熒光屏上顯示出三維圖譜,也可作出任意波長的吸光度一時(shí)問曲線和任意時(shí)間的吸光度一波長曲線。

  DAD的光路與紫外檢測器不同,光源發(fā)出的光聚焦后先通過檢測池,通過檢測池的透射光由全息光柵色散成多色光,不同波長的色散光按波長順序聚焦在陣列元件上,每個(gè)元件對應(yīng)一定的納米數(shù)。當(dāng)光照射到光電二極管時(shí),光電二極管產(chǎn)生訊號。由于色散過程及透射光的檢測是全波長范圍的,可在瞬間檢測流經(jīng)檢測池的全吸收光譜,得到三維色譜-光譜圖。計(jì)算機(jī)化的數(shù)據(jù)處理,還可進(jìn)行色譜峰光譜相似性比較、峰純度檢測及利用譜圖庫對掣定樣品進(jìn)行檢索等,為定性、定量分析提供更豐富的信息。

  1、多通道多波長檢測可以同時(shí)得到多個(gè)波長的色譜圖,每個(gè)成分均可在Z佳波長下檢測定量。

  2、光譜相似性比較在GX液相色譜儀中,兩個(gè)物質(zhì)出峰時(shí)間一致并不能完全說明為同一物質(zhì),通過色譜峰紫外光譜一致性比較,可提高測定的可靠性。

  3、峰純度檢測對色譜峰峰頂、上、下3個(gè)點(diǎn)的光譜進(jìn)行比較,完全吻合意味這是1個(gè)單組分峰,不吻合則表示為未分離峰。并可計(jì)算出純度系數(shù)PI,PI值在0~1之問,越接近1,表示峰純度越好,PI可由計(jì)算機(jī)自動計(jì)算。

  4、光譜檢索與比較二極管陣列檢測器得到的光譜圖可分類存儲到光譜庫中,當(dāng)測定類似成分時(shí),可調(diào)出相關(guān)譜圖,進(jìn)行檢索和比較,也可通過比較光譜相似系數(shù)比較相似性。

示差折光檢測器(RID)

  示差折光檢測器是GX液相色譜儀一種通用型檢測器?;谶B續(xù)測定色譜柱流出物光折射率的變化而用于測定溶質(zhì)濃度,溶液的光折射率是溶劑流動相和溶質(zhì)各自的折射率乘以基物質(zhì)的量濃度之和,溶有樣品的流動相和流動相本身之間光折射率之差即表示樣品在流動相中濃度。

  原則上,凡是與流動相光折射率有差別的樣品都可用它來測定,其檢測限可達(dá)(10^-6~10^-7)g/ml。應(yīng)注意的是,選擇溶劑時(shí)必須考慮溶劑的光折射率。但這種檢測器靈敏度低,對溫度、流動相組成等的變化敏感,而且與梯度洗脫不相容,很大程度地限制了它的應(yīng)用范圍。在藥物分析中,這種檢測器多用于多糖類、萜類化合物等分子量和含量的測定。

蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)

  蒸發(fā)光散射檢測器是一種新型的通用型質(zhì)量檢測器,它的通用檢測原理克服了常見于GX液相色譜儀傳統(tǒng)檢測方法的不足,已越來越多地應(yīng)用于GX液相色譜儀、超臨界色譜和逆流色譜中。

  1、ELSD的檢測原理

  ELSD運(yùn)行有三個(gè)過程:diyi是霧化過程,用惰性氣體或凈化空氣將色譜柱流出物霧化;第二是蒸發(fā)過程,在一個(gè)加熱管(漂移管)中將流動相揮發(fā);第三是檢測過程,測定留下來的樣品顆粒的光散射。所有商品ELSD都由一種或兩種模式完成這三個(gè)過程。模式A的操作是全部柱流出物(氣溶膠)都進(jìn)入直的漂移管,讓流動相在其中蒸發(fā),模式B中是將氣溶膠通過一個(gè)彎管,在此管中大的顆粒沉積下來流入廢氣管,其余的小顆粒進(jìn)入螺旋狀的漂移管,在上述兩種模式中,樣品顆粒均進(jìn)入光管,使激光發(fā)生散射而得以檢測。

  2、ELSD檢測的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)

  優(yōu)點(diǎn):①具有較好的通用性,任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測;②在相同的色譜條件下,物理性質(zhì)相似的物質(zhì)可給出一致的響應(yīng);③能與梯度洗脫方式相容;④靈敏度高于示差折光檢測器、紫外末端吸收檢測法。⑤在ELSD上開發(fā)的實(shí)驗(yàn)方法移植到質(zhì)譜上則無需修改。

  缺點(diǎn):①靈敏度不夠理想;②流動相的選擇受限;③某些樣品線性范圍較窄等。

  3、影響ELSD檢測性能的基本因素

 ?、俨僮髂J降倪x擇,選擇合適的操作模式可提高方法的靈敏度,操作模式的選擇取決于樣品的揮發(fā)性、流動相的組成及其流速。

 ?、诹鲃酉嘟M成及流速的選擇,流動相的揮發(fā)性越好,方法的靈敏度越高。流動相的流速越低,相應(yīng)的信號越強(qiáng)。

 ?、燮乒軠囟葘€水平和噪音的影響并無明顯的規(guī)律性。Zyou溫度應(yīng)為在流動相基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上,產(chǎn)生可接受噪音的Zdi溫度。

  ④載氣流速是影響檢測性能的一個(gè)很重要的因素。Zyou載氣流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上(例如0.5mV),產(chǎn)生Zda檢測響應(yīng)值時(shí)的Zdi流速。

GX液相色譜儀.jpg

熒光檢測器(FSD)

  熒光檢測器是基于化合物的光致發(fā)光現(xiàn)象,熒光檢測器流通池為直角形的試樣池,用石英材料制成。這一檢測器特別適用于痕量組分和能顯示熒光的物質(zhì)檢測。GX液相色譜儀這種檢測器的Zda優(yōu)點(diǎn)是極高的靈敏度和良好的選擇性。一般來說,它比紫外吸收檢測器的靈敏度要高10-1000倍,可達(dá)μg/L級,而且它所需要的試樣很小,因此在藥物和生化分析中有著廣泛的應(yīng)用。

GX液相色譜儀其他檢測器

  在GX液相色譜儀中除上述常用檢測器外,還有一些檢測器可供選擇使用。

  ①電化學(xué)檢測器(ECD)

  這類檢測器主要有:電導(dǎo)檢測器、安培檢測器、介電常數(shù)檢測器和電位測定檢測器等。電導(dǎo)、電位等檢測器已在離子色譜巾得到了廣泛應(yīng)用;介電常數(shù)檢測器性能類似于示差折光檢測器;安培檢測器可檢測氧化性物質(zhì),適用范圍很寬。

  ②化學(xué)反應(yīng)檢測器(CRD)

  氨基酸分析儀采用的是典型的將被測物質(zhì)進(jìn)行某種化學(xué)反應(yīng)后,再用高靈敏度的某種檢測器檢測的化學(xué)反應(yīng)檢測器。

  此外,還有光電導(dǎo)檢測器、放射性檢測器以及HPLC/IR、HPLC/MS和HPLC/NMR等聯(lián)用檢測方法。


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