液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜及液-固色譜?，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有GX、快速、靈敏等特點。

液相色譜儀的工作原理

　　液相色譜儀利用混合物各組分在固定相和流動相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對運(yùn)動的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。

　　色譜填料：經(jīng)過制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5-10粒徑的球形顆粒。

　　色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長250mm。

　　色譜柱：也稱固定相，是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的，色譜柱的填充，干法填充：在硬臺面上鋪上軟墊，將空柱管上端打開垂直放在軟墊上，用漏斗每次灌入50-100mg填料，然后垂直臺面墩10-20次。

　　濕法填充：又稱淤漿填充法，使用專門的填充裝置。

液相色譜儀的結(jié)構(gòu)

　　液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。

　　進(jìn)樣系統(tǒng)：

　　液相色譜儀一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

　　輸液系統(tǒng)：

　　液相色譜儀該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為1.47～4.4×10^7Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

　　分離系統(tǒng)：

　　液相色譜儀該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm(需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管)，內(nèi)徑為2～5mm，由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成)。

　　固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性和比表面積大的特點，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。

液相色譜儀的應(yīng)用

　　液相色譜儀可用于高沸點、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說，沸點在450℃以下，相對分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可采用GX液相色譜儀分析。

　　液相色譜儀色譜柱的使用和維護(hù)，色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。

　　在液相色譜儀操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。

　　反沖色譜柱，一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效，預(yù)柱和保護(hù)柱，選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。

　　有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

　　避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。