概念

當(dāng)某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長的入射光（通常是紫外線或X射線）照射，吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的波長長的出射光（通常波長在可見光波段）；很多熒光物質(zhì)一旦停止入射光，發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失。具有這種性質(zhì)的出射光就被稱之為熒光。

原理

光照射到某些原子時(shí)，光的能量使原子核周圍的一些電子由原來的軌道躍遷到了能量更高的軌道，即從基態(tài)躍遷到diyi激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等。diyi激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等是不穩(wěn)定的，所以會(huì)恢復(fù)基態(tài)，當(dāng)電子由diyi激發(fā)單線態(tài)恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，能量會(huì)以光的形式釋放，所以產(chǎn)生熒光。

熒光是物質(zhì)吸收光照或者其他電磁輻射后發(fā)出的光。大多數(shù)情況下，發(fā)光波長比吸收波長較長，能量更低。但是，當(dāng)吸收強(qiáng)度較大時(shí)，可能發(fā)生雙光子吸收現(xiàn)象，導(dǎo)致輻射波長短于吸收波長的情況發(fā)生。當(dāng)輻射波長與吸收波長相等時(shí)，既是共振熒光。

與流式細(xì)胞儀相關(guān)的熒光術(shù)語

MESF等量可溶性熒光分子：

國際標(biāo)準(zhǔn)單位，用來衡量熒光強(qiáng)度。

自發(fā)熒光：

細(xì)胞或者粒子在激發(fā)照射下會(huì)發(fā)出各種波長的熒光。

流式細(xì)胞儀精度：

分析白細(xì)胞要求精度在600MESF之內(nèi)，分析其他的細(xì)胞和粒子則需要更加高的精度（200MESF）。

常見熒光染料種類

365nm紫外光激發(fā)

DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）：藍(lán)色 455nm。

488nm藍(lán)色激光激發(fā)

FITC（異硫氰酸熒光素）：綠色 530nm。

PE（藻紅蛋白）：橙黃色 575nm。

PE-Cy5（PE的衍生物）：紅色 665nm。

PerCP（多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質(zhì)復(fù)合物）：紅色 675nm。

PI（碘化丙啶）：橙紅色 620nm。

532nm綠色激光激發(fā)

PE（藻紅蛋白）：橙黃色 575nm。

PE-Dy647（PE的衍生物）：紅色 647nm。

PE-Cy5（PE的衍生物）：紅色 665nm。

637nm紅色激光激發(fā)

APC（別藻紅蛋白）：紅色 665nm。

APC-Cy5（別藻紅蛋白的衍生物）：深紅色 710nm。