活體成像系統(tǒng)具有靈敏度高、直觀、操作簡單、能同時觀測多個實驗標本，無放射損害等優(yōu)點，但也有其自身的缺陷，例如動物組織對光子吸收、空間分辨率較低等問題，因而活體成像系統(tǒng)仍需不斷地完善和改進。

活體成像系統(tǒng)的使用方法

　　1、制作動物模型

　　根據(jù)實驗需要通過尾靜脈注射、皮下移植、原位移植等方法接種已標記的細胞或組織。在活體成像系統(tǒng)建模時應(yīng)認真考慮實驗?zāi)康暮瓦x擇熒光標記，如標記熒光波長短，則穿透效率不高，建模時不宜接種深部臟器和觀察體內(nèi)轉(zhuǎn)移，但可以觀察皮下瘤和解剖后臟器直接成像。深部臟器和體內(nèi)轉(zhuǎn)移的觀察大多選用熒光素酶標記。

　　2、活體成像

　　小鼠經(jīng)過常規(guī)麻醉(氣麻、針麻皆可)后放入成像暗箱平臺，活體成像系統(tǒng)軟件控制平臺的升降到一個合適的視野，自動開啟照明燈(明場)拍攝diyi次背景圖。然后，自動關(guān)閉照明燈，在沒有外界光源的條件下(暗場)拍攝由小鼠體內(nèi)發(fā)出的特異光子。

　　明場與暗場的背景圖疊加后可以直觀的顯示動物體內(nèi)特異光子的部位和強度，完成成像操作。值得注意的是熒光成像應(yīng)選擇合適的激發(fā)和發(fā)射濾片，生物發(fā)光則需要成像前體內(nèi)注射底物激發(fā)發(fā)光。

　　3、數(shù)據(jù)處理

　　小動物活體成像系統(tǒng)圖像處理軟件除了提供含有光子強度標尺的成像圖片外，還能計算分析發(fā)光面積、總光子數(shù)、光子強度的相關(guān)參數(shù)供實驗者參考。

　　4、實驗影響因素

　　原則上，如預(yù)實驗時拍攝出圖片非特異性雜點多，需降低活體成像系統(tǒng)曝光時間;反之，如信號過弱可適當延長活體成像系統(tǒng)曝光時間。但曝光時間的延長，不僅增加了目的信號，對于背景噪音也存在一個放大效應(yīng)。同一批實驗應(yīng)保持一致的曝光時間，同時還應(yīng)保持標本相對位置和形態(tài)的一致，從而減少實驗誤差。

　　進行活體成像系統(tǒng)熒光成像時，實驗者可選擇背景熒光低不容易反光的黑紙放在動物標本身下，減少金屬載物臺的反射干擾。動物體內(nèi)很多物質(zhì)在受到激發(fā)光激發(fā)后，會發(fā)出熒光，產(chǎn)生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度。

　　背景熒光主要是來源于皮毛和血液的自發(fā)熒光，皮毛中的黑色素是皮毛中主要的自發(fā)熒光源，其發(fā)光光線波長峰值在500～520nm左右，在利用綠色熒光作為成像對象時，影響Z為嚴重，產(chǎn)生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度和特異性。動物尿液或其他雜質(zhì)如沒有及時清除，成像中也會出現(xiàn)非特異性信號。

　　活體成像系統(tǒng)使用時，實驗者考慮到非特異性雜信號，以及成像圖片美觀等方面，可能會調(diào)節(jié)信號的閾值，因此在分析信號光子數(shù)或信號面積時，應(yīng)考慮閾值的改變對實驗結(jié)果的影響。正確選擇ROI區(qū)域，可提高分析實驗數(shù)據(jù)的準確性。

活體成像系統(tǒng)模式選擇

　　活體成像系統(tǒng)模式很多，X光、放射性、各種熒光及發(fā)光等，有些成像可用于結(jié)構(gòu)成像，有些可用于功能成像，有的則兩種都可以。各種成像模式各有各的優(yōu)點與不足，要根據(jù)實驗的需要進行選擇，不能講活體成像系統(tǒng)哪種模式好或是哪種模式不好。將結(jié)構(gòu)成像與功能成像重合在一起進行分析是活體成像系統(tǒng)的一種發(fā)展趨勢。

　　活體成像系統(tǒng)模式優(yōu)點與不足，現(xiàn)簡要說明如下：