大腸桿菌（Escherichia coli）大腸埃希氏菌，它是一種普通的原核生物，根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為6類：腸致病性大腸桿菌（EPEC）、腸產毒性大腸桿菌（ETEC）、腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）、腸出血性大腸桿菌（EHEC）、腸黏附性大腸桿菌（EAEC）和彌散粘附性大腸桿菌(DAEC).。大腸桿菌屬于革蘭氏陰性細菌（G-）。下面就讓小編帶你了解一下常見的大腸桿菌的檢驗方法。

制備試驗樣品：

往裝有225mL稀釋劑的滅菌均質杯中置入通過無菌操作獲取的樣品25g，以8000r/min均質1～2分鐘，使得比例為1：10的樣品勻液制成。（能夠替代此操作的方法為使用滅菌乳缽研磨）。

對樣品勻液進行稀釋，估計樣品污染情況，用稀釋劑將樣品勻液制成一系列十倍遞增的樣品稀釋液。樣品勻液制備到稀釋完成這一過程所用的總時長不能大于一刻鐘。

EC肉湯以及LST肉湯初篩：

每個樣品選出相應適合的三個連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液。將三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯分別接種到每個稀釋度的樣品稀釋液中，每管接種1mL。將接種管置于溫度36±1攝氏度中培養(yǎng)48±2小時。對于試管的產氣情況進行觀察：對倒管內是否有氣泡產生進行檢測，向EC肉湯管中使用直徑為3毫米的接種環(huán)移種所有48±2小時內產氣的LST肉湯管培養(yǎng)物。在30分鐘內向帶蓋44.5±0.5攝氏度下水浴箱內置入所有接種的EC肉湯管，培養(yǎng)48±2小時。

伊紅美藍(EMB)平板：

向伊紅美藍(EMB)平板上劃線接種產氣管的培養(yǎng)物，在溫度36±1攝氏度下培養(yǎng)24±2小時。對有沒有具備黑色ZX有光澤或無光澤的典型菌落出現進行檢測。果果沒有典型菌落，那么至少要從平板上挑選兩個可疑的菌落。如果有典型菌落，那么至少從每個平板上挑選兩個典型菌落。用接種針接觸菌落ZX部位往營養(yǎng)瓊脂斜面上移種，在溫度36±1攝氏度下培養(yǎng)18到24個小時。

生物化學實驗

在下列培養(yǎng)基中移種斜面培養(yǎng)，然后進行生化試驗。

1.革蘭氏染色：

取18小時營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。

2.LST肉湯

將其于溫度36±1攝氏度培養(yǎng)48±2小時,對于試管中是否產生氣體進行觀察。

3.Koser氏枸椽酸鹽肉湯：

將其于溫度36±1攝氏度培養(yǎng)96小時，對有無生長進行記錄。

4.MR-VP培養(yǎng)基：

將其在36±1攝氏度溫度下培養(yǎng)48±2小時，通過無菌操作往13毫米×100毫米的試管中移入1mL培養(yǎng)物，將少許肌酸結晶、0.6毫升5％α-萘酚乙醇溶液以及0.2毫升40％氫氧化鉀溶液加入，如果有伊紅色出現，那么就說明VP試驗為陽性。再培養(yǎng)48小時MR-VP培養(yǎng)物的剩余部分，將甲基紅溶液滴加5滴，如果培養(yǎng)物變黃色，那么就為陰性反應，如果培養(yǎng)物變紅色，那么就為甲基紅試驗陽性。

5.色氨酸肉湯：

將其在36±1攝氏度溫度下培養(yǎng)24±2小時，然后將0.2～0.3mLKovacs氏試劑加入其中，如果上層出現紅色，那么就為靛基質陽性反應。