流式細(xì)胞術(shù)是一種生物學(xué)技術(shù),用于對(duì)懸浮于流體中的微小顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)和分選。這種技術(shù)可以用來(lái)對(duì)流過(guò)光學(xué)或電子檢測(cè)器的一個(gè)個(gè)細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)的多種參數(shù)分析。流式細(xì)胞術(shù)(Flow CytoMetry,F(xiàn)CM)是對(duì)懸液中的單細(xì)胞或其他生物粒子,通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記的熒光信號(hào),實(shí)現(xiàn)高速、逐一的細(xì)胞定量分析和分選的技術(shù)??贵w的質(zhì)量控制是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)??贵w的質(zhì)量包括其特異性、靈敏度、精密度。下面就讓小編帶你了解一下流式分析怎么選擇單抗組合。
流式分析Z基礎(chǔ)的試劑就是抗體。選擇抗體的好壞直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。像F/P比值、亞型、全長(zhǎng)或片段、種宿來(lái)源、標(biāo)記熒光種類(lèi)等等都會(huì)影響抗體的特性。而且,單抗的種類(lèi)非常多,有CD分類(lèi)號(hào)的有300多種單抗,沒(méi)有CD分類(lèi)號(hào)的單抗又有許多,所以抗體組合的選擇非常困難。通常,選擇抗體組合遵循下面幾項(xiàng)原則:

1)選擇的抗體組合需要足夠?qū)?,Z好能夠鑒定樣本中的一切細(xì)胞亞群,無(wú)論是正常群體還是異常群體。
2)應(yīng)該盡量選擇熒光強(qiáng)度強(qiáng)的熒光素標(biāo)記表達(dá)比較少的抗原。
3)需要知道不同抗體的染色模式和細(xì)胞反應(yīng)譜。由于相同CD編號(hào)的抗體可能識(shí)別不同的抗原決定簇,所以需要根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇抗體。
4)抗體的多種組合可能會(huì)影響與抗原的結(jié)合,因此對(duì)于所用抗體組合,必須先了解每個(gè)抗體在對(duì)照細(xì)胞上單色標(biāo)記的表達(dá)情況。
5)對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)應(yīng)該盡可能使用體外診斷(IVD)試劑和分析特異性(ASR)試劑,研究用(RUO)試劑通常不能在體外診斷實(shí)驗(yàn)中使用。在ZG,被用作體外診斷的試劑還必須獲得國(guó)內(nèi)的SDA認(rèn)證。一個(gè)抗體組合內(nèi)的抗體可能來(lái)源不同的公司,有不同的濃度、不同的亞型、不同F(xiàn)/P值,所以需要自身的同型對(duì)照,但是實(shí)際操作非常困難。因此盡可能選擇同一家公司的試劑以防干擾。對(duì)于臨床上常見(jiàn)的流式檢測(cè)項(xiàng)目,所需的試劑組合基本都有參考或推薦的抗體組合。
例如T細(xì)胞亞群檢測(cè):CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3;陣發(fā)性血紅蛋白尿
(PNH)檢測(cè):CD55、CD59;血小板無(wú)力癥(GT)檢測(cè):CD41、CD61等等。
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