高效液相色譜儀的應(yīng)用范圍日益擴展。由于它使用了非破壞性檢測器，樣品被分析后，在大多情況下，可除去流動相，實現(xiàn)對少量珍貴樣品的回收，亦可用于樣品的純化制備。

高效液相色譜儀的原理

　　高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

Waters Alliance HPLC 高效液相色譜系統(tǒng)（點擊圖片查看產(chǎn)品詳情）

高效液相色譜儀的類型

　　比較常見的是液固吸附色譜，液固色譜進行混合物分離，固定相是固體吸附劑，可以分為極性和非極性兩大類。選用的溶劑與固定相互不相溶，選用的溶劑應(yīng)有高純度，以防引起柱性能的改變。選用的溶劑如果使用紫外吸收檢測器，就不能選用有紫外吸收的溶劑;選用的溶劑應(yīng)有足夠溶解能力，以提高靈敏度。溶劑應(yīng)具有低黏度和低沸點，避免使用毒性溶劑，以保證安全。

　　鍵合相色譜，使用極性鍵和固定性，屬分配色譜。反鍵合相色譜使用極性較小的鍵合固定相，可用疏溶劑作用。按極性大小可分為非極性、弱極性、極性。正鍵合相色譜采用流動相，流主體成分為己烷或庚烷，反相鍵合相色譜主題為水。多用于分離各類極性化合物如染料、炸 藥、多巴胺、氨基酸等，在生物化學(xué)、食品分析、環(huán)境污染分析、醫(yī)藥研究等多領(lǐng)域有很大的發(fā)展。

　　凝膠色譜，又稱分子排阻色譜，按照分子大小進行分離。是一種多孔性的聚合材料，可分為兩類：即凝膠過濾色譜法與凝膠滲透色譜法。是利用了分配定律。由兩部分組成，一部分是惰性載體，另一部分是固定液。分內(nèi)色譜中，要求盡可能不與固定液互溶，能分離極性、非極性化合物。由于不同極性鍵合固定相的出現(xiàn)，分離的選擇性可得到很好的控制。

高效液相色譜儀的特點

　　1、分離效能高

　　由于新型高效微粒固定相填料的使用，液相色譜填充柱的注銷可達5×10^3～3×10^4塊/m理論塔板數(shù)，遠遠高于氣相色譜填充柱10^3塊/m理論塔板數(shù)的柱效。

　　2、選擇性高

　　由于液相色譜柱具有高柱效，并且流動相可以控制和改善分離過程的選擇性。因此，高效液相色譜儀不僅可以分析不同類型的有機化合物及其同分異構(gòu)體，還可以分析在性質(zhì)上極為相似的旋光異構(gòu)體，并已在高LX的合成藥物和升華藥物的生產(chǎn)控制分析中發(fā)揮了重要作用。

　　3、檢測靈敏度高

　　在高效液相色譜儀中使用的檢測器大多數(shù)都具有較高的靈敏度。如被廣泛使用的紫外吸收檢測器，Z小檢出量可達10^-9g，用于痕量分析的熒光檢測器，Z小檢出量可達10^-12g。

　　4、分析速度快

　　由于高壓輸液泵的使用，相對于經(jīng)典液相色譜，其分析時間大大縮短，當(dāng)輸液壓力增加時，流動相流速會加快，完成一個樣品的分析時間僅需幾分鐘到幾十分鐘。

高效液相色譜儀的用途

　　1、環(huán)境分析中的應(yīng)用：可應(yīng)用于環(huán)芳烴、農(nóng)藥殘留分析等。

　　2、食品分析中的應(yīng)用：可應(yīng)用于食品營養(yǎng)成分分析、食品添加劑分析、食品污染物分析等。

　　3、生命科學(xué)中的應(yīng)用：可在分子水平上研究生命科學(xué)、遺傳工程、臨床化學(xué)、分子生物學(xué)及生化領(lǐng)域的分子量物質(zhì)純化、分離和測定等。

　　4、醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用：體液中代謝物測定、藥代動力學(xué)研究、臨床藥物監(jiān)測等的分析測定。

　　5、無機分析中的應(yīng)用：陰、陽離子的分析等。

高效液相色譜儀與經(jīng)典液相色譜儀的區(qū)別

　　經(jīng)典液相色譜儀：

　　經(jīng)典液相色譜儀使用粗粒多孔固定相，裝填在大口徑、長玻璃柱管內(nèi)，流動相僅靠重力流經(jīng)色譜柱，溶質(zhì)在固定相的傳質(zhì)、擴散速度緩慢，柱入口壓力低，僅有低柱效，分析時間冗長。

　　高效液相色譜儀：

　　高效液相色譜儀使用了全多孔微粒固定相，裝填在小口徑、短不銹鋼柱內(nèi)，流動相通過高壓輸液泵進入高柱壓的色譜柱，溶質(zhì)在固定相的傳質(zhì)，擴散速度大大加快，從而在短的分析時間內(nèi)獲得高柱效和高分離能力。