Western免疫印跡（WesternBlot）是往膜上轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)，然后利用抗體進行檢測?？赏ㄟ^融合部分的抗體對新基因的表達產(chǎn)物進行檢測?？捎孟鄳贵w作為一抗對已知表達蛋白進行檢測。

分類

主要有以下幾種western顯色的方法：

1.底物熒光ECF

2.底物DAB呈色

3.放射自顯影

4.底物化學發(fā)光ECL

底物DAB呈色以及底物化學發(fā)光ECL為如今比較常用的有底物，體同水平和實驗條件的是用diyi種方法，目前為止，用底物化學發(fā)光ECL一般發(fā)表在文章中。只需購買現(xiàn)成的試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)，有著比較簡單便捷的操作。將過氧化物+魯米諾作為反應底物，如果和HRP相遇就會發(fā)光，能夠曝光膠片，就能夠?qū)l帶洗出，以下就是它的原理。

原理

Western Blot類似于Southern或Northern雜交方法，然而其采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，用標記的二抗來“顯色”，抗體為“探針”，蛋白質(zhì)為被檢測物。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品往固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上轉(zhuǎn)移，固相載體以非共價鍵形式來進行蛋白質(zhì)的吸附，并且可以使其生物學活性和電泳分離的多肽類型保持不變?？乖褂霉滔噍d體上的蛋白質(zhì)或多，和對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過放射自顯影或者底物顯色來對電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分進行檢測。該技術(shù)也在蛋白水平的表達的檢測方面得到廣泛地應用。