液相色譜儀利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進(jìn)行先分離,而后分析鑒定的儀器。由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。
色譜法的分離原理是:溶于流動相中的各組分經(jīng)過固定相時,由于與固定相發(fā)生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中滯留時間不同,從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
色譜法Z早是由俄國植物學(xué)家茨維特在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時發(fā)現(xiàn)的,色譜法因之得名。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。

液相色譜儀開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相,稱為經(jīng)典液相色譜儀,此方法柱效低、時間長(常有幾個小時)。GX液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜儀的基礎(chǔ)上,于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜儀的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,小顆粒具有高柱效,但會引起高阻力,需用高壓輸送流動相,故又稱高壓液相色譜儀。又因分析速度快而稱為高速液相色譜儀,也稱現(xiàn)代液相色譜儀。
1、高壓:液相色譜儀以液體為流動相(稱為載液),液體流經(jīng)色譜柱,受到阻力較大,為了迅速地通過色譜柱,必須對載液施加高壓。一般可達(dá)150~350×10^5Pa。
2、高速:流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多,一般可達(dá)1~10ml/min。GX液相色譜儀所需的分析時間較之經(jīng)典液相色譜儀少得多,一般少于1h。
3、GX:近來液相色譜儀研究出許多新型固定相,使分離效率大大提高。
4、高靈敏度:GX液相色譜儀已廣泛采用高靈敏度的檢測器,進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達(dá)10^-11g。另外,用樣量小,一般幾個微升。
5、適應(yīng)范圍寬:液相色譜儀,只要求試樣能制成溶液,而不需要氣化,因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大(大于400以上)的有機物(這些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的75%~80%)原則上都可應(yīng)用GX液相色譜儀來進(jìn)行分離、分析。
近年來液相色譜儀分析技術(shù)得到快速發(fā)展,那么在采購液相色譜儀時如何看待性能技術(shù)指標(biāo)的適用性?主要有如下幾點:
1、首先要看液相色譜儀的靈敏度或檢測限是是否能滿足使用要求。如果樣品稀少,則必須首先考慮液相色譜儀的靈敏度,如果靈敏度達(dá)不到使用要求,就是極大的不適用。
2、液相色譜儀的噪聲是否滿足使用要求。噪聲是液相色譜儀主要分析誤差來源,儀器有多大的N,它都直接累加在分析結(jié)果中,所以有多大噪聲,分析數(shù)據(jù)中增加多大誤差。

3、量程能否滿足使用要求。目前,國內(nèi)外有些液相色譜儀的UVD,因為噪聲太大,所以其里面量程只能到0.1~2.0AUFS,而當(dāng)今世界上的液相色譜儀的量程可達(dá)到0.005~2.UFS。尤其是在生命科學(xué)研究領(lǐng)域,對液相色譜儀的量程要求越寬越好。
4、液相色譜儀的線性動態(tài)范圍是否滿足使用要求。它決定了使用者能否保證使用在儀器的線性范圍內(nèi)。所以,液相色譜儀的線性動態(tài)范圍越大越好。
5、液相色譜儀高壓泵的壓力、流量范圍是否能滿足使用要求、能否做梯度分析。這方面需要看使用者的具體要求:如果是要求制備、收集樣品,就必須選擇大流量的高壓泵;如果是做生命科學(xué)研究,往往要求高壓泵的流量連續(xù)可調(diào),甚至要求量程下限要達(dá)到0.001ml/min;如果做較復(fù)雜的樣品分析,就必須要有梯度功能。
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