聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，簡(jiǎn)稱PCR。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，通過(guò)高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)形成一個(gè)周期，目的DNA迅速擴(kuò)增，其具有節(jié)約時(shí)間，操作簡(jiǎn)單，高靈敏度，強(qiáng)特異性等特點(diǎn)。其又被叫做無(wú)細(xì)胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)。其不但在核酸序列分析和基因分離、克隆被使用，其還在任何有DNA,RNA的地方被使用或者被用來(lái)對(duì)疾病進(jìn)行診斷。

普通PCR儀操作規(guī)程

開(kāi)機(jī)操作

（1）將PCR儀電源開(kāi)關(guān)打開(kāi)。

（2）將PCR儀頂蓋向后平推，然后將PCR薄壁管放進(jìn)去。

（3）將PCR儀頂蓋向前平推，并且均勻用力壓下反扣部分。

值得注意的是：9700PCR儀必須使用圓頭的PCR薄壁管。

關(guān)機(jī)操作

（1）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，點(diǎn)擊EXit到主界面出現(xiàn)，將PCR電源開(kāi)關(guān)關(guān)閉。

（2）均勻用力抬起反扣部分，將PCR儀頂蓋向后平推，將PCR薄壁管取出。

（3）將PCR儀頂蓋向前平推。

熒光定量PCR儀操作規(guī)程

1.開(kāi)始運(yùn)行儀器

將PCR儀底座開(kāi)關(guān)打開(kāi)，再將定量PCR儀檢測(cè)器開(kāi)關(guān)打開(kāi)。在實(shí)驗(yàn)之前，首先對(duì)系統(tǒng)預(yù)熱半個(gè)小時(shí)，打開(kāi)電腦，將iQ5軟件啟動(dòng)。

2.放置樣品

在0.2ml的薄壁管或96孔板內(nèi)加入PCR反應(yīng)體系，將管蓋蓋上，注意，不要讓手指和反應(yīng)管表面有接觸，所以必須將一次性塑料手套戴上。按照順序在儀器的加熱孔中放入反應(yīng)管。

3.設(shè)置程序，運(yùn)行試驗(yàn)

定量PCR軟件的基本操作步驟如下：

（1）對(duì)熱循環(huán)程序文件進(jìn)行設(shè)置。

（2）對(duì)反應(yīng)管文件進(jìn)行設(shè)置。

（3）點(diǎn)擊“run”鍵，將程序運(yùn)行。

（4）數(shù)據(jù)分析

4.結(jié)果分析

（1）PCR反應(yīng)結(jié)束后，標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值軟件會(huì)自動(dòng)計(jì)算。

（2）可以在軟件窗口選擇相應(yīng)的分析功能進(jìn)行表達(dá)量分析，等位基因分析。

（3）點(diǎn)擊右上方的“Report”鍵，還能夠?qū)⒔Y(jié)果報(bào)告單輸出。

5.關(guān)閉運(yùn)行儀器

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將iQ5軟件、熒光定量檢測(cè)器及擴(kuò)增系統(tǒng)電源關(guān)閉，將電腦關(guān)閉，將反應(yīng)管取出。