細胞培養(yǎng)箱是開展免疫學、腫瘤學、遺傳學及生物工程所必須的關鍵設備，細胞培養(yǎng)箱廣泛應用于細胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng)，常見于細胞動力學研究、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理、化學因素的致癌或毒理效應、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細胞生產(chǎn)抗體、體外授精(IVF)、干細胞、組織工程、藥物篩選等研究領域。

細胞培養(yǎng)箱的污染來源

　　對于細胞來說，非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存，培養(yǎng)箱本身是不會辨別的，而細胞培養(yǎng)中大部分時間里細胞都是位于培養(yǎng)箱內(nèi)，因此箱體內(nèi)能否抑jun或滅菌非常關鍵!

　　細胞培養(yǎng)箱中的主要污染源：細菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原體、非同種細胞。

　　支原體：支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞已經(jīng)受到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，yi制細胞生長等，往往被大多數(shù)實驗者忽視。

　　細菌：細菌污染后，培養(yǎng)基1-2天就會變色，對細胞生長影響明顯，應迅速將污染細胞與其它細胞系隔離，滅菌后丟棄，還要用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺。

　　病毒：由于病毒寄生生存，爆發(fā)后盡快和正常細胞隔離，丟棄處理，相對來說容易處理，對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。

　　真菌(霉菌和酵母菌)：真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了;目前沒有好的yi制方法，包括現(xiàn)在常用的兩性霉素，一旦污染容易反復爆發(fā)，尤其孢子很難殺滅。

　　非同種細胞：即細胞交叉污染，由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開，往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實驗宣告無效。

細胞培養(yǎng)箱的消毒滅菌

　　細胞培養(yǎng)箱的滅菌和消毒方法有化學消毒、干熱滅菌以及濕熱滅菌。

　　化學消毒法：

　　針對細胞培養(yǎng)箱的滅菌和消毒，采用化學消毒只能是易揮發(fā)沒有殘留的普通試劑(如酒精)，而酒精的只對部分細菌繁殖體等微生物有去除效果，只能作為一種輔助消毒滅菌方法，對于孢子及病毒起不到殺滅的作用;如果采用毒性較大的化學試劑(如雙氧水、環(huán)氧乙烷等)，在消毒處理后將會產(chǎn)生殘留，對細胞培養(yǎng)箱的培養(yǎng)環(huán)境帶來化學污染，影響后續(xù)的培養(yǎng)。

　　干熱法滅菌：

　　干熱法滅菌是指將細胞培養(yǎng)箱的箱體內(nèi)加熱到120攝氏度以上的高溫，濕度為20%以內(nèi)，持續(xù)一定的時間(2小時)，通過高溫是蛋白質及核算變性失活，達到殺滅的目的;但干熱對于箱體內(nèi)其他部件要求能耐受高溫，對于傳感器等部件必須取出，有可能帶來二次污染，并且有些真菌芽孢，由于厚厚的細胞壁保護，能夠抵抗一定的高溫，滅菌不能徹底。

　　濕熱滅菌：

　　濕熱滅菌是指在高溫的同時保持細胞培養(yǎng)箱箱體內(nèi)飽和濕度，可以降低加熱溫度，同時達到徹底滅菌效果。

　　濕熱滅菌相比于干熱滅菌，主要區(qū)別是：

　?、贊駸釡缇械木w吸收水分，蛋白質含水量高，所需凝固溫度降低，易凝固變性;

　?、诟邷厮羝麑Φ鞍踪|有高度的穿透力，從而加速蛋白質變性而迅速死亡;

　　③三是濕熱的蒸汽有潛熱存在，能迅速提高被滅菌體的溫度，從而增加滅菌效力。

　　由此可見，細胞培養(yǎng)箱采用濕熱滅菌是一種可行且效果的滅菌方法，能徹底消滅細菌、真菌、孢子、病毒等微生物，防止環(huán)境對箱體內(nèi)污染和不同培養(yǎng)對象間的交叉污染;同時相比于化學消毒方式滅菌效果更為徹底、且沒有殘留;相比于干熱滅菌，可以降低滅菌的溫度，加大滅菌的徹底性，且沒有二次污染。

細胞培養(yǎng)室的消毒清理

　　1、細胞培養(yǎng)室要制定合理的衛(wèi)生制度安排，一般每周打掃次，打掃范圍包括：特殊角落儀器設備阻擋處塵埃的清除;

　　2、對可觸及到的細胞培養(yǎng)箱表面及房間裝修面進行清潔水稀釋的消毒液等清潔;

　　3、清潔完后進行抽濕干燥、紫外消毒處理等。

　　目前對培養(yǎng)室無菌環(huán)境的維持主要以紫外線殺菌消毒為主。細菌經(jīng)紫外線照射一定時間后，其鏈上相鄰的個胸腺嘧啶共價結合形成二聚體，使分子空間構型發(fā)生改變，從而干擾細菌的復制和轉錄，導致細菌死亡。